乳腺癌相关成纤维细胞miRNA表达的检测和分析

目的研究人乳腺癌微环境癌相关成纤维细胞(CAF)与正常成纤维细胞(NF)miRNA表达的差异及其对CAF的生物学功能的影响。方法运用1型胶原酶消化法分别处理临床乳腺癌患者的癌组织和对应癌旁组织标本,原代分离培养CAF和NF细胞;利用免疫荧光法和Western blot法分析CAF和NF细胞成纤维细胞分泌蛋白(FSP)的表达情况,对所分离培养的细胞进行纯度和特性鉴定;利用TranswellTM实验比较CAF与NF细胞的侵袭能力;利用miRNA芯片和芯片结果显著性差异(SAM)分析法分析CAF与NF细胞miRNA表达的差异;对差异miR-205和miR-221,在原代培养的CAF和NF进行实时定量PCR(qRT-PCR)验证;利用多种生物信息学软件预测差异miRNA的靶基因;利用DAVID软件对靶基因进行信号通路富集度分析。利用ELISA检测TGF-β和IL-6信号通路的核心蛋白基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-2和MMP-9的表达差异。结果成功分离得到原代培养的CAF与NF细胞,纯度大于95%;与NF细胞相比,CAF细胞的侵袭能力明显增强;miRNA芯片分析结果显示,CAF有10个变化倍数1.5的异常表达miRNA(P0.05),其中3个上调表达(miR-221-5p、miR-31-3p、miR-221-3p),7个下调表达(miR-205、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-101、miR-342-3p、let-7g)。信号通路富集度分析发现,miRNA靶基因与细胞分化、细胞黏附、细胞迁移、细胞增殖、细胞分泌和细胞间相互作用等密切相关,其中,异常表达的miR-200b/c和miR-141等miRNA通过抑制其靶基因,影响TGF-β信号通路、IL-6信号通路,进而影响CAF的侵袭和转移。结论人乳腺癌微环境CAF的miRNA表达谱发生显著变化,CAF细胞中异常表达miRNA可能参与了NF向CAF的转化,并与CAF细胞的增殖、黏附、侵袭、转移有密切关系。     

革兰阴性杆菌对亚胺培南耐药率的变迁

目的调查革兰阴性杆菌对亚胺培南耐药率的变化。方法收集2007年1月-2008年12月从住院患者各种临床标本中分离的革兰阴性杆菌,采用MicroScan NC31、NC33鉴定药敏复合板进行鉴定和药敏试验,对结果进行回顾性调查。结果共分离出革兰阴性杆菌4658株,肠杆菌科细菌1709株,占36.7%;非发酵菌2949株,占63.3%;分离率前5位的病原菌依次是铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌和洋葱伯克霍尔德菌;肠杆菌科细菌对亚胺培南的耐药率非常低,均<2.0%;嗜麦芽寡养单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌对亚胺培南的耐药率分别为98.3%、62.4%、30.5%、10.1%。结论临床分离的革兰阴性杆菌以非发酵菌为主,亚胺培南对肠杆菌科细菌具有非常强的体外抗菌活性,对非发酵菌的体外抗菌活性较差,铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌对亚胺培南的耐药率呈较大幅度上升。     

重症监护病房感染患者鲍氏不动杆菌耐药性分析

目的 了解内科重症监护病房(ICU)感染患者鲍氏不动杆菌(ABA)耐药谱的变化,指导内科ICU合理用药.方法 收集2007年1月-2008年12月从内科ICU患者不同标本分离的鲍氏不动杆菌,采用MicroScanNC31、NC33鉴定药敏复合板进行鉴定和药敏试验,按美国临床实验室标准化研究所(CLSI)标准对常用抗菌药物进行耐药性分析.结果 共分离出78株鲍氏不动杆菌,主要来源于痰液,占70.5%;ABA对亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率分别为6.4%、0;对氨苄西林的耐药率是79.5%;对庆大霉素等其他13种药物的耐药率在53.8%～71.8%,在16种抗菌药物药敏试验中,哌拉西林/他唑巴坦耐药率为0,氨苄西林敏感率上升外,对其他14种药物耐药率均明显上升;血液中ABA对除哌拉西林/他唑巴坦以外的15种抗菌药物耐药率均明显比痰中ABA耐药率高.结论 ICU鲍氏不动杆菌耐药现象严重,应注意鲍氏不动杆菌耐药性的监测.     

医院感染肺炎克雷伯菌的分布及耐药性分析

目的探讨医院感染肺炎克雷伯菌(KPN)在临床标本中的分布及耐药性,为临床医师合理用药提供科学依据。方法采用微量稀释法对临床送检标本分离的KPN进行药敏试验,分析其耐药性。结果 420株KPN主要分布在重症监护病房(ICU)、呼吸内科、普外一科、中医康复科和内分泌科等科室;主要来源于痰液,占49.5%;KPN对亚胺培南的敏感率为98.6%,对哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/克拉维酸、头孢西丁、头孢吡肟、头孢他啶、左氧氟沙星、氨曲南、加替沙星、庆大霉素等的耐药率为70.0%~89.0%,对替卡西林/克拉维酸、妥布霉素、环丙沙星、头孢噻肟、头孢曲松、头孢唑林、氨苄西林/舒巴坦、头孢呋辛、四环素、哌拉西林、头孢噻吩、甲氧苄啶、呋喃妥因等的敏感率为30.0%~69.0%;对氨苄西林的敏感率仅为4.8%;24种抗菌药物药敏试验中,8种药物敏感率略微上升,13种药物敏感率略微下降,3种药物敏感率下降较多。结论医院肺炎克雷伯菌耐药控制较好,临床应继续根据药敏结果合理使用抗菌药物。     

血presepsin对院内成人脓毒血症诊断价值的荟萃分析

摘要：目的：探讨血presepsin（sCD14-ST）水平对住院成人患者脓毒血症的诊断价值。 方法：系统检索1990年1月到2014年10月间Cochrane 图书馆、荷兰医学文摘（EMBASE）、PubMed数据库、中国期刊全文数据库（CNKI）、万方数据库、维普数据库和中国生物医学文献数据库中的文献,按照诊断试验研究的纳入排除标准筛选文献,提取研究对象、研究设计和结局等信息。采用Meta Disc 1.4软件对提取数据进行研究间异质性分析和效应量的综合定量评价,并绘制受试者工作特征曲线（SROC）。 结果：最终纳入文献8篇,包含研究对象共2 066例,试验组1 255例,对照组811例。研究间具有较大异质性,采用随机效应模型进行荟萃（meta）分析。血presepsin诊断院内成人脓毒血症的综合定量指标分别为：敏感性78%（95%CI：75%~80%）,特异性77%（95%CI：74%~79%）,阳性似然比3.83（95%CI：2.60~5.65）,阴性似然比0.21（95%CI：0.14~0.31）,诊断比值比19.24（95%CI：10.62~34.86）。SROC曲线下面积（AUC）为0.862 9,Q指数为0.793 5。 结论：血presepsin对住院成人患者脓毒血症具有中等诊断价值。临床应用时需结合临床表现以及联合其他诊断指标,以进一步提高脓毒血症诊断的敏感性和特异性。     

转录因子Twist基因慢病毒质粒构建及其促进乳腺肿瘤上皮细胞MCF-7上皮间质转化

目的：构建转录因子Twist基因的慢病毒质粒,其高表达促进乳腺肿瘤上皮细胞MCF-7上皮间质转化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）。方法：pcDNA3/myc-tagged-Twist质粒扩增并亚克隆至载体pLVX-puro中构建成pLVX-puro-myc-tagged-Twist慢病毒质粒。将其转染人胚肾细胞HEK293T,收取病毒上清感染乳腺癌MCF-7细胞。免疫荧光法和蛋白质印迹法（Western blot）检测转录因子Twist 蛋白、上皮标志蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）、间质标志蛋白波形蛋白（Vimentin）的表达。Transwell法检测细胞侵袭能力。结果：pLVX-puro-myc-tagged-Twist慢病毒质粒酶切及测序结果完全正确;相对于对照细胞（MCF-7-Vector细胞）,转染Twist基因的MCF-7细胞（MCF-7-Twist细胞）Twist蛋白、间质标志蛋白Vimentin表达水平明显升高,上皮标志蛋白E-cadherin表达水平明显降低（P<0.05）,侵袭能力显著增强（P<0.05）。结论：pLVX-puro-myc-tagged-Twist慢病毒质粒构建成功,转录因子Twist通过MCF-7细胞上皮间质转化促进了乳腺肿瘤侵袭能力增强。     

呼吸内科病房感染铜绿假单胞菌的耐药分析

目的 了解医院呼吸内科病房患者感染铜绿假单胞菌耐药谱的变化,指导呼吸内科合理用药. 方法 收集2007年1月-2008年12月呼吸内科送检的感染患者标本,分离铜绿假单胞菌,分析各类标本分离的铜绿假单胞菌构成比;采用MicroScan NC31、NC33鉴定药敏复合板进行鉴定和药敏试验,按美国临床实验室标准化研究所标准对常用的25种抗菌药物进行耐药性分析. 结果 共分离出196株铜绿假单胞菌,主要来源于痰液,占96.4%,铜绿假单胞菌对加替沙星较敏感,敏感率为100.0%;对头孢噻肟、头孢曲松的敏感率在10.0%～15.0%;对头孢他啶等其他11种药物的敏感率在60.0%～85.0%;14种抗菌药物中4种抗菌药物敏感率下降9种抗菌敏感率略有上升,加替沙星尚未出现耐药现象. 结论 医院呼吸内科铜绿假单胞菌耐药情况控制较好,临床应继续根据药敏结果合理使用抗菌药物.