TNBS诱导炎症性肠病大鼠结肠神经元tau蛋白磷酸化以及COX-2表达的变化

目的:探讨三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)诱导炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)模型大鼠结肠神经元tau蛋白磷酸化和环氧合酶2(COX-2)表达的变化。方法:30只健康雄性成年Wistar大鼠随机分为对照组、IBD模型组和TNBS组,每组10只,IBD模型组以TNBS乙醇连续灌肠14 d造模,对照组和TNBS组分别以等量生理盐水和TNBS灌肠;观察大鼠的一般情况和结肠病理组织学改变,用anti-Hu作为神经元标志以免疫荧光法检测结肠黏膜下神经元的数量变化,免疫荧光双染色检测结肠黏膜下神经元COX-2和磷酸化tau231、tau262的表达变化。结果:与对照组比较,IBD模型组大鼠结肠黏膜下神经元数量明显减少(P0.05),神经元tau蛋白磷酸化程度明显升高(P0.05),而TNBS组大鼠神经元数量与对照组相比无显著差别;对照组和TNBS组大鼠结肠黏膜下神经元几乎不表达COX-2,IBD模型组大鼠结肠神经细胞胞核和胞浆中均有COX-2的表达,与对照组和TNBS组相比有显著差异(P0.05)。结论:TNBS乙醇诱导IBD模型大鼠结肠黏膜下神经元减少,可能与tau蛋白高度磷酸化及COX-2表达有关。     

p53异构体Δ133p53在不同胃组织中的表达及意义

目的探讨p53选择性剪接异构体Δ133p53的mRNA在胃癌、慢性萎缩性胃炎和慢性浅表性胃炎组织中的表达及意义。方法采用巢式逆转录多聚酶链反应检测Δ133p53在30例胃癌、30例慢性萎缩性胃炎和20例慢性浅表性胃炎组织中的表达。结果Δ133p53在胃癌、慢性萎缩性胃炎和慢性浅表性胃炎组织中的阳性表达率分别为70.0%、50.0%和25.0%,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论①Δ133p53的表达在胃癌、慢性萎缩性胃炎和慢性浅表性胃炎组织中呈逐渐明显下降趋势。②Δ133p53异构体可能对胃癌的发生发展及其诊断、治疗具有重要作用。     

梓醇对阿尔茨海默病大鼠模型大脑皮质保护作用

目的观察梓醇对阿尔茨海默病( AD)大鼠模型大脑皮质的保护作用。方法健康雄性 Wistar大鼠 36只,体质量范围为 250～300 g,随机数字表法分为 4组,每组 9只:健康对照组、模型组、梓醇小剂量组、梓醇大剂量组。除健康对照组大鼠外,其余组大鼠均行右侧脑室定位注射 β?淀粉样蛋白片段 25?35(Aβ25?35)和腹腔注射 D?半乳糖结合制备 AD模型,然后梓醇小剂量组大鼠注射梓醇 5 mg·kg-1·d-1,梓醇大剂量组大鼠注射梓醇 10 mg·kg-1·d-1,健康对照组和模型组大鼠注射等容积 0.9%氯化钠水溶液,连续腹腔注射给药 7d。Y?迷宫检测大鼠的学习指数,苏木精 ?伊红( HE)染色和透射电镜观察 AD大鼠皮层结构,免疫组织化学染色观察大脑皮质胆碱能毒蕈碱受体 M1亚型( M1受体)的表达,蛋白质印迹法( Western Blot)检测 M1受体蛋白的含量。结果实验过程中模型组大鼠死亡 1只,最终模型组 n＝8,其余组均 n＝9。与模型组比较,从造模后第 14天开始,梓醇显著提高了大鼠的学习指数(第 14天:小剂量组 t＝3.267,P＝0.030 9,大剂量组 t＝4.648,P＝0.009 7;第 21天:小剂量组 t＝5.010,P＝0.007 4,大剂量组 t＝4.614,P＝0.009 9)第 14天 4组大鼠的学习指数分别为( 5.6±0.2)(2.6±0.3)(3.7±0.5)(4.4±0.6);第 21天 4组大鼠的学习指数各组分别为( 6.3±0.8),,(4.1±0.5),(5.3±0.4),(5.8±0.8)。HE染色可,见模型组大,鼠大脑皮,质结构有损伤性表现,透射电镜检查见大脑皮质神经元细胞内线粒体、粗面内质网、核染色质等异常改变,梓醇干预组神经元的结构显著 改善。免疫组织化学染色可见模型组大鼠大脑皮质 M1受体染色浅,神经元数目减少, M1受体蛋白表达下调,梓醇能够显著上调 M1受体蛋白表达(与模型组比较,小剂量组 t＝3.983,P＝0.016 4;大剂量组 t＝6.694,P＝0.002 6)4组大鼠 M1受体蛋白表达分别为 100%,64.75%,74.63%,85.74%。结论梓醇能够改善 AD大鼠大脑皮质结构异常,升高 M1受体,表达。     

三乙醇胺对碱性磷酸酶活性的影响

为了测定三乙醇胺对碱性磷酸酶活性的影响 ,采用经典酶学方法观察了三乙醇胺对溶液 AL P的抑制类型 ,并将 ALP用 Sepharose4B-CNBr固定化 ,再测定其抑制作用。结果显示 ,三乙醇胺对溶液 AL P的抑制作用属混合型抑制作用 ,其 Ki=0 .0 2 4mmol/l;Ki =0 .0 0 6 5 mmol/l ;对固定化酶仍起抑制作用 ,其表观 Kmapp为 3.13mmol/l,高于无抑制剂的 Kmapp2 .6 3mmol/l     

二十二碳六烯酸-磷脂对小鼠睡眠的改善作用

目的：研究二十二碳六烯酸-磷脂（ DHA-PC ）对小鼠睡眠的改善作用。方法小鼠随机分为正常对照组、溶剂对照组、DHA鱼油＋卵磷脂联合用药（DHA＋Lecithin）（60＋200）mg/kg（阳性对照）、DHA-PC 50、100、200 mg/kg组,每组10只。正常对照组小鼠自由饮食饮水,溶剂对照组小鼠按0．2 ml/10 g的体积灌胃给予生理盐水, DHA＋Lecithin（60＋200）mg/kg组和DHA-PC 50、100、200 mg/kg组小鼠均按0．2 ml/10 g的体积灌胃给药,1次/d,连续30 d。通过测定小鼠直接睡眠时间、戊巴比妥钠诱导睡眠时间、阈下剂量睡眠发生率及巴比妥钠诱导睡眠潜伏时间,观察DHA-PC对小鼠睡眠的作用。结果3种剂量的DHA-PC对小鼠体质量均无影响。直接睡眠实验结果表明,3种剂量的DHA-PC对小鼠直接睡眠无影响。戊巴比妥钠诱导睡眠实验结果表明, DHA-PC 50、100、200 mg/kg组小鼠戊巴比妥钠诱导睡眠时间分别为（56．2±13．7）,（57．9±25．4）及（64．1±18．4）min,明显高于溶剂对照组（32．9±10．8） min （ P ＜0．05）;DHA ＋Lecithin （60＋200） mg/kg 组小鼠的戊巴比妥钠睡眠时间为（38．6±11．7）min,高于溶剂对照组小鼠（32．9±10．8）min,但无明显差异;DHA-PC 200mg/kg组明显高于DHA＋Lecithin （60＋200）mg/kg组（P＜0．05）。协同戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验结果表明,DHA-PC 200 mg/kg组小鼠协同戊巴比妥钠阈下剂量催眠入睡率（70％）明显高于溶剂对照组（10％）（P＜0．05）;DHA＋Lecithin （60＋200） mg/kg组小鼠协同戊巴比妥钠阈下剂量催眠入睡率（60％）明显高于溶剂对照组（10％）（ P＜0．05）。巴比妥钠诱导睡眠潜伏期实验结果表明,DHA-PC 200 mg/kg和DHA＋Lecithin （60＋200） mg/kg组小鼠巴比妥钠诱导睡眠潜伏时间分别为（22．9±4．1）和（19．5±2．7）min,明显低于溶剂对照组（31．3±6．9）min（P＜0．01）,且DHA＋Leci-thin（60＋200）mg/kg组小鼠巴比妥钠诱导睡眠潜伏时间为（19．5±2．7）min,明显低于DHA-PC 50和100 mg/kg组,二者分别为（27．3±2．4）和（26．9±4．2）min。结论 DHA-PC具有改善小鼠睡眠的作用。     

十二指肠空肠旁路术对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞功能恢复的作用

目的:研究十二指肠空肠旁路手术(duodenal jejunal bypass sugery,DJB)对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛β细胞功能恢复的影响。方法:采用高糖高脂饮食联合小剂量STZ腹腔注射建立T2DM动物模型,将成模大鼠随机分为T2DM组(T2DM-C)和T2DM手术组(T2DM-DJB),普通饮食大鼠为空白对照组(WC)。分别检测3组大鼠基础代谢指标、空腹血糖(FBG)、空腹血清胰岛素(FINS)和胰岛素抵抗指数(HOMAIR)。术后20周处死大鼠,留取胰腺组织放入4%多聚甲醛中固定。用HE染色、免疫荧光双标法和电镜检测胰岛病理学形态、胰岛β细胞和α细胞比例变化和胰岛超微结构。结果:术后T2DM-DJB组大鼠体重和饮食量较术前无明显改变,T2DM-DJB组与T2DM-C组比较血糖和胰岛素水平明显下降,胰岛素抵抗得到改善;术后HE染色示胰岛形态恢复良好;免疫荧光示胰岛β细胞所占胰岛比例较T2DM-C组升高;电镜示胰岛β细胞超微结构得到改善。结论:DJB手术改善T2DM大鼠葡萄糖代谢和胰岛素抵抗,缓解胰岛β细胞凋亡,改善胰岛β细胞功能。     

皮肤T细胞淋巴瘤相关抗原5在肿瘤细胞株中的表达

目的：探讨皮肤T细胞淋巴瘤相关抗原5（cTAGE5）在肿瘤细胞株中的表达及其在肿瘤发生发展中的生物学作用。方法细胞免疫荧光化学检测cTAGE5来源于人的肿瘤细胞株的表达。取阳性表达cTAGE5的人卵巢透明细胞癌ES-2细胞,分为正常对照组、脂质体对照组、siRNA转染组、表柔比星（终浓度1×10－6 mol／L）对照组,平板克隆形成试验和MTT法观察cTAGE5对细胞生长增殖能力的影响,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果cTAGE5 在乳腺癌、肺癌、卵巢癌均有表达,而在胃癌和肝癌肿瘤细胞中表达不明显。与正常对照组比较,siRNA转染组的肿瘤细胞增殖生长抑制（P ＜0．01）,细胞迁移能力降低（P ＜0．01）,表柔比星对照组也显示肿瘤细胞增殖抑制（P ＜0．01）,细胞迁移能力降低（P ＜0．01）。结论 cTAGE5 在不同组织来源的肿瘤细胞株表达存在差异,siRNA 干扰cTAGE5 表达可有效抑制肿瘤细胞的增殖和迁移能力。     

CRF、UCN1和CRFR1在肠易激综合征大鼠结肠中变化的研究

目的探讨CRF、UCN1、CRFR1在IBS大鼠结肠中的表达变化及其在肠易激综合征发病机制中的作用。方法选用健康雄性成年Wistar大鼠,分为对照组、急性应激组(急性束缚1h)、慢性应激组(21d不可预知轻度应激)、慢急性联合应激组(在慢性应激的基础上给予急性束缚应激)。观测不同应激状态下大鼠的体重变化、排便颗粒、糖水消耗、敞箱实验的表现,对模型进行再评价。采用RT-PCR方法检测各组大鼠结肠中CRF、UCN1、CRFR1的表达水平的变化。结果各指标显示该造模的大鼠符合IBS的内脏敏感机制,可用于IBS发病机制的研究,经RT-PCR方法检测,CRF、UCN1、CRFR1在各应激组中的表达较对照组均升高(P<0.01)。结论 CRF、UCN1、CRFR1与应激引起的功能性肠道疾病中的结肠功能改变相关。     

GPI-CTLA4Ig嵌合分子的构建和在CHO-dhfr-细胞膜上的表达

目的：研制GPI锚定修饰的新型免疫抑制分子GPI—CTLA4Ig。方法：通过将从促衰变因子(DAF)来源的GPI修饰性信号序列与CTLA4Ig嵌合，获得CPI修饰的CTLA4Ig分子。将编码GPI—CTLA4Ig嵌合分子的基因克隆到真核表达载体pCI—dhfr中，并用脂质体法转染CHO—dhfr^-细胞，用氨甲喋呤(MTX)进行筛选。重组蛋白的表达用RT—PCR、ELISA、细胞免疫荧光和Western blot进行鉴定。最后采用Protein A亲和层析纯化。结果：构建了GPI—CTLA4Ig嵌合分子，并在CHO—dhfr^-细胞膜上稳定表达。结论：GPI修饰的CTLA4Ig分子有可能作为新型的免疫抑制剂用于器官移植中，抑制移植排斥反应。     

猪肺血管紧张素转换酶的制备

目的利用猪肺制备血管紧张素转换酶 (ACE)。方法将新鲜猪肺匀浆 ,6 0 0 0×g离心 30min后 ,经 1 .6～ 2 .6mol/L (NH4 ) 2 SO4 分级沉淀 ,SephadexG 2 0 0 ,QHyperD离子交换色谱 ,得到经SDS PAGE显示一条带的ACE纯品。结果猪肺 30 0g可制备出ACE 1 1 .2 5mg,活力回收率为 2 0 .70 % ,比活力为 1 4 80 .0u/mg,较组织匀浆上清提纯提高 42 8.99倍。结论此法结果较理想 ,可用于较大规模制备ACE