近交系小鼠H-2基因的PCR检测方法

目的建立快速、灵敏、简便的H-2基因检测方法。方法针对近交系小鼠的H-2D区和H-2K区序列,设计两对特异性引物,分别进行DNA扩增,扩增产物通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,确定H-2基因型。结果通过PCR反应扩增小鼠H-2D区和H-2K区的基因产物,可以区分不同的近交系小鼠的H-2基因型,进而可以区分出不同品系的近交系小鼠。结论利用分子生物学方法进行近交系小鼠遗传学检测,弥补了过去各种方法的不足,并且PCR方法还具备快速、简便、成本低廉、便于普遍推广并易于和国际接轨等优点。所以通过PCR方法可以进行小鼠H-2基因型检测。     

实验动物中绿脓杆菌检测能力验证的结果与分析

目的：对全国实验动物质量检测实验室进行绿脓杆菌检测能力的验证。方法由 CNAS组织,中国食品药品检定研究院负责协调及实施,向全国参与本次能力验证的实验动物质量检测单位分发“实验动物粪便中绿脓杆菌检测”样品,并在规定的时限内反馈检测结果及报告。结果本次能力验证共有全国20个实验动物质检实验室参加,收到反馈结果和报告共19份。结果满意的实验室有16个,占80%;结果不满意的实验室有4个,占20%。结论国内实验动物质检单位整体具备可靠的绿脓杆菌检测能力,并进一步促进了参与实验室对实验动物病原菌检测能力的提高。     

SPF级和普通级新西兰家兔遗传背景差异的探讨

目的 比较普通级家兔与SPF级家兔在9个同工酶的异同，为分析不同基因背景的家兔对热原检测等实验的影响提供依据。方法 利用同工酶醋纤膜电泳法对分别来自北京科宇实验动物养殖场40只普通级家兔和来自中科院（上海）实验动物中心的40只SPF级家兔进行ADH等九个生化位点进行检测。结果 乙醇脱氢酶（ADH）6个生化位点呈多态性。SPF新西兰家兔与普通级家兔不同，在Gpd1位点普通级家兔发现有c型基因，而SPF家兔没有此基因；在Idh1位点发现普通级家兔有ab型基因，而SPF级家兔没有此基因型。在ES、GPD-1、MPI-13个生化位点，单基因的百分率分别为82．5％（Esb）、88．75％（Gpd—1a）和70．％（Mpi-la）。结论 SPF家兔与普通级家兔之间在基因多态性和基因频率方面存在显著不同，因此建议在热源检测等试验中注意种群的选择，应该考虑SPF家兔因多态基因的下降对试验产生的影响。     

日本动物实验替代法研究

自从1959年W．M．S．Russell和R．L．Burch提出动物实验的替代、减少和优化(3R)的理论以来，国外的3R研究发展迅速，取得了一批有意义的成果，达到了较高的水平。我国近些年来积极开展3R研究，从国家层面支持了一些研究项目，取得了一定进展，对动物实验替代研究、动物福利提出了发展思路和实施方案，以应对加入WTO后的技术壁垒。从世界上看，3R研究主要集中在欧美等发达国家，亚洲主要是日本等国在开展这方面的研究。为了借鉴国外的研究经验，特别是亚洲近邻的成功之处，     

裸鼠巴斯德氏菌病的诊断

目的对某实验动物中心裸鼠发病死亡的原因进行诊断。方法对发病裸鼠进行病理组织学和细菌学检查以及血清学试验。结果根据临床症状、病理剖检、细菌分离培养、生化鉴定和血清凝集试验，确诊为嗜肺巴斯德氏菌感染导致的细菌性疾病。药敏试验结果表明，分离菌株对阿莫西林／克拉维酸、阿奇霉素、复方新诺明敏感，而对红霉素已经产生耐药性。结论为巴斯德氏菌病原鉴定与疾病诊断提供了科学依据。     

肝螺杆菌鞭毛蛋白B基因的克隆和序列测定

目的 对肝螺杆菌BJ 0801鞭毛蛋白B(flagellin B,fla B)基因进行扩增、克隆和序列测定,以探讨其功能.方法 根据已公布的肝螺杆菌ATCC 51449序列,设计合成一对引物,以肝螺杆菌BJ 0801株DNA为模板,扩增fla B基因片段,与pGEM-T载体连接并转化感受态E.coliDH5α,提取的重组质粒经双酶切、PCR、电泳鉴定并进行序列测定.结果 目的 基因片段长度为1 545 bp,与已公布的肝螺杆菌ATCC 51449核苷酸同源性达99%.结论 成功克隆出肝螺杆菌BJ 0801鞭毛蛋白B基因序列,为进一步研究该基因的功能奠定了基础.     

2003-2008年我国实验猴BV抗体检测结果及抗体水平变化规律的分析

目的 对近年来我国实验猴BV(猴疱疹病毒Ⅰ型)抗体检测结果进行比较分析,以了解我国实验猴BV感染情况及其抗体水平变化规律,为我国实验猴质量控制及标准化提供依据.方法 根据国标中ELISA方法,对2003～2008年我国11个单位送检的2个品种猴血清进行BV抗体检测,并对检测结果进行统计分析.结果 检测的4612份猴血清中,有1843份BV抗体呈阳性,阳性率为39.96%;6年中检测猴群BV抗体阳性率基本在30%～50%.幼年(≤2岁)、青年(2.1～4.0岁)、成年(4.1～6.5岁)、老年(≥6.5岁)4个不同年龄段猴BV感染率分别为26.28%、31.53%、53.74%、87.27%.不同年龄感染率差异显著(P＜0.01).雌猴BV感染率(35.91%)高于雄猴(34.93%),但两者差异不显著(P＞0.05).结论 不同年龄猴BV感染率不同,随着年龄的增长BV感染率升高.     

普通环境长爪沙鼠呼吸道菌群的分离鉴定

目的调查普通环境长爪沙鼠呼吸道细菌及支原体携带情况,为制定长爪沙鼠微生物学等级标准提供依据。方法对普通环境饲养的65只长爪沙鼠进行解剖,取气管分泌物接种血琼脂,分别放入普通培养箱和5%CO2培养箱中培养48 h,分离菌株后同时进行生化分析和PCR测序鉴定,以期准确判断分离菌株所属菌属;气管浸液提取DNA,用支原体特异性引物进行PCR检测,并分别计算检出率。结果本研究共检出22种细菌及支原体。不同细菌、支原体感染率相差很大,阳性率在1.5%(1/65)到64.6%(42/65)之间,其中部分细菌为大鼠和小鼠致病菌。结论本研究为长爪沙鼠的微生物学等级标准的制定提供了参考数据。     

肝螺杆菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法的建立及应用研究

目的 建立特异、敏感、快速检测肝螺杆菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法.方法 针对肝螺杆菌flaB 基因的保守区设计特异性引物和探针,建立肝螺杆菌TaqMan MGB探针实时荧光定最PCR方检测方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性.对2008-2011年期间采集的1081份临床样本中的肝螺杆菌进行检测,同时进行分离培养和常规PCR检测.结果 建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对肝螺杆菌的检测具有高度的特异性,对幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、泰泽氏菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均无交叉反应,检测的灵敏度达8.3拷贝.标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.227,TaqManMGB探针实时荧光定量PCR效率为100％.对1081份临床样本进行检测,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规PCR均能检出86份肝螺杆菌阳性样本,而细菌分离培养则仅检出4份阳性.结果显示,建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比细菌分离培养方法更敏感,能够直接从临床样本中检出肝螺杆菌DNA,检测时间仅为2h.结论 研究建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法具有可靠、特异、敏感的特点,适用于肝螺杆菌的快速检测.     

封闭群斑马鱼的遗传生化标记研究

目的通过研究对RR-B、RW-H、BY-F三个近交系和非选育剑尾鱼的研究比较,建立近交系剑尾鱼的遗传生化标记检测技术。方法依照国标GB／T14927.1-2008的遗传操作规程优化实验条件,对三个近交品系及非选育群剑尾鱼的不同组织的6个遗传生化位点进行研究,以得到其遗传生化图谱。结果在6个生化位点中,同一品系剑尾鱼同工酶存在组织特异性,多数同工酶在肝中活性较强。同一生化位点在不同品系间存在差异。RR-B系在葡萄糖磷酸异构酶（Gpi）、6-磷酸葡萄糖脱氢酶（Gpd）位点表现出特异性条带,RW-H系在过氧化氢酶（Ce）位点表现出特异性条带。同一生化位点在各品系内表现较为一致,而在非选育剑尾鱼中在上述三个生化位点表现出多态性。在酯酶（ES）、碱性磷酸酶（AKP）、乳酸脱氢酶（LDH）位点,各品系谱带不易区分其差异。结论建立了剑尾鱼近交系生化标记检测技术,可望用于近交系剑尾鱼的遗传质量监测。