人IL-10基因重组复制缺陷型腺病毒DNA的构建

目的 构建人IL-10基因的重组腺病毒并进行体外表达和检测。方法从质粒pcDNA3IL-10的CMV启动子下游完整切下IL-10 cDNA的片段,将其定向插入Gateway载体,在克隆酶的作用下将阳性克隆质粒转入目的腺病毒载体。PacI酶线性化IL-10腺病毒DNA后阳离子质脂体转染293A细胞,获得人IL-10的复制缺陷型重组腺病毒。体外感染人胰腺癌细胞株Bxpc-3和大鼠胰腺细胞株AR-42J;Western blot检测人IL-10的表达。结果 成功地构建人IL-10重组腺病毒,病毒滴度达2×109PFU/mL。体外感染的细胞株均检测到IL-10的表达。结论 构建复制缺陷型重组腺病毒能够介导IL-10的基因表达,为细胞因子的抗炎冶疗奠定实验基础。     

α—促黑激素-绿脓杆菌外毒素融合蛋白的质粒构建与表达

黑色素瘤恶性程度高,目前尚无比较有效的防治手段。黑色素瘤表面存在大量的α-促黑激素(α-MSH)受体,由α-MSH和绿脓杆菌外毒素(作用于靶细胞肽链延伸因子Ⅱ使其失活而影响蛋白质合成,最终导致靶细胞死亡),构建成的基因重组免疫毒素将能特异地杀伤靶细胞一黑瘤细胞。本实验采用PCR技术,获得α-MSH和PE40(绿脓杆菌外毒素缺失细胞结合功能区域,从而避免免疫毒素     

腺病毒介导的肿瘤血管靶向的体外自杀基因治疗研究

本工作在血管内皮细胞中分别建立了HSV-tk/GCV和EC-cd/5-FC自杀基因系统,用于抑制实体肿瘤中血管生成的研究.构建含自杀基因的重组腺病毒AdCMVtk和AdCMVcd,滴度均1×10~(12)pfu/ml.病毒感染小鼠血管内皮细胞lGll(MOI=100),并鉴定自杀基因的表达,测定原药对它们的杀伤.生长抑制试验表明,GCV对lGll/Ad-tk细胞杀伤的IG_(50)为0.2μmol/ L,5-FC对lGll/Ad-cd细胞杀伤的IC_(50)为20μmol/L.电镜下显示被原药杀伤的血管内皮细胞有明显的细胞凋亡现象.同时混合细胞实验证明两系统均存在明显的旁杀伤效应.从而在体外水平证明了HSV-tk/GCV和EC-cd/5-FC自杀基因系统杀伤增生血管内皮细胞的有效性.     

携带lipocalin 2基因的溶瘤腺病毒对胰腺癌细胞生长的体外抑制作用

目的构建携带人lipocalin 2基因且删除E1B55基因的溶瘤腺病毒,研究其体外对胰腺癌细胞生长的抑制作用。方法利用RT-PCR技术获得lipocalin 2基因并克隆至pCA13质粒,构建pCA13-lipocalin 2。用BglⅡ从pCA13-lipocalin 2酶切出包含CMV启动子及lipocalin 2的表达框,将该表达框亚克隆入质粒pZD55,获得pZD55-lipocalin 2。将pZD55-lipocalin 2与pBHGE3共转染293个细胞,重组产生携带lipocalin 2的溶瘤腺病毒ZD55-lipocalin 2。经PCR和Western blot鉴定正确后,体外采用结晶紫染色和MTT法,观察其对胰腺癌细胞生长的抑制作用。结果ZD55-lipocalin 2能在PANC-1细胞中增殖复制并表达lipocalin 2蛋白,结晶紫染色和MTT法观察到该溶瘤腺病毒能明显抑制PANC-1细胞生长。结论成功构建了携带人lipocalin 2的溶瘤腺病毒,其能明显抑制胰腺癌细胞生长,为胰腺癌治疗提供新策略。     

LPAK细胞对裸鼠人胃癌的抗瘤作用

LPAK细胞(Lymphokine and PHA Activated Killer cells,LPAK)在体外实验中对Raji细胞和SGC-7901胃癌细胞均有较强的杀伤活性. LPAK细胞对裸鼠SGC-7901胃癌亦有显著的抗瘤作用,抑瘤率达84.6±8.6%.     

人原发性肝癌基因的实验研究───肿瘤坏死因子基因的初步应用

将含人肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）ｃＤＮＡ的不同逆转录病毒载体（ＬＮＳ－ｔｎｆα、Ｌ－ｔｎｆαＳＮ及ＬＮＣ－ｔｎｆα）和质粒型真核细胞载体（ｐＳＶＫ３－ｔｎｆα），分别用磷酸钙法导入肝癌细胞ＳＭＭＣ－７７２１中，观察ＴＮＦ的表达水平。结果：重组质粒型表达载体ｐＳＶＫ３－ｔｎｆα表达好，２４小时开始分泌ＴＮＦα（５０Ｕ／ｍｌ），４８～７２小时达最高值（９０Ｕ／ｍｌ），９６小时后下降（４０Ｕ／ｍｌ）。将ｐＳＶＫ３－ｔｎｆα重组ＤＮＡ用磷酸钙包裹后直接进行瘤内注射，发现裸鼠外周血ＴＮＦα水平有一过性增高，３周后测量瘤体大小，发现实验组的肿瘤体积明显小于对照组（２．５±１．６ｃｍ比３．２±１．８ｃｍ，ｎ＝６，Ｐ＜０．０５），实验组荷瘤裸鼠的生存时间亦明显延长（４４．０±３．３ｄ比２８．２±２．０ｄ，ｎ＝６，Ｐ＜０．０１）。结果表明，应用ＴＮＦα基因转移进行肝癌的基因治疗是一条值得探索的途径。     

人TNFα基因转染的人肝癌细胞稳定高表达克隆SMMC7721-TNF体外抗瘤活性及其可能机制的初步研究

应用逆转录病毒载体介导人TNFα基因感染人肝癌细胞株SMMC7721，经G418筛选获得一稳定高表达SMMC7721-TNF，观察SMMC7721-TNF细胞及其培养液上清对SMMC7721和BEL7404肝癌细胞的抗瘤效应，结果表明SMMC7721-TNFα细胞本身对两种细胞均无明显的杀伤作用，但其培养液上清对这两种细胞均具有明显的抑制作用，     

局部应用白介素-2治疗恶性肿瘤的观察

白介素-2是目前被认为颇有前途的肿瘤生物免疫治疗因子之一，近年来的临床实践取得了令人瞩目的疗效。上海华新生物高技术有限公司和军事医科院四环生物工程制品厂生产的注射用重组白介素-2(rIL-2)，在中山医大肿瘤医院管忠震、何友兼教授等牵头组织的10多家医院协作组大力协助下，于1994年初完成了159例临床试验并取得卫生部试生产批文，同年9月开始Ⅲ期临床验证，扩大临床应用。     

白细胞介素—2结构功能的研究现状

白细胞介素一2（IL－2）是由活化的T细胞产生的重要细胞免疫因子。它具有显著的免疫增强作用，不仅自身可促进T细胞增殖分化和B细胞分泌抗体，增强NK细胞的杀伤力，还可与其它细胞因子如IFN－Y、TNF等一起发挥免疫功能，因而在肿瘤和感染性疾病等的治疗上已经得到广泛应用。IL－2的各种作用只有与效应细胞表面其特异的受体（IL－2R）结合后才能得以发挥，因此IL－2分子自身的结构与功能关系及其与受体间的相互作用机理是IL－2研究中的重要课题。这些研究不仅看利于阐明其具体细节，也是研制各种新型IL－2，更好地用于临床治疗相关…     

癌症靶向治疗的最新进展

癌症治疗,关键在于“靶向”。癌症本身就是“靶标”,各种生物治疗方法必须遵循“有的放矢”,高效、准确地命中癌靶标,在杀伤癌细胞的同时基本上不或很少损伤正常组织细胞。实现癌症靶向治疗的方法主要有靶向基因———病毒治疗、抗体治疗、RNA干扰技术、肿瘤干细胞、小分子靶向