免疫磁性分离法纯化外周血CD34阳性细胞

有关造血干细胞的研究是目前实验血液学和临床血液学的核心内容。随着分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物化学及实验动物学的不断更新发展，人们对造血干细胞也就有了更深刻的理解。造血干细胞目前在形态还不能与淋巴细胞分开，故早期对造血干细胞的性能研究是在分离单个核细胞的基础上进行的。随着各种技术的迅猛发展，近几年对造血干细胞的研究多是在对其分离纯化的基础上进行的。细胞表面CD34抗原是分子量为110～120KD的高度糖基化Ⅰ型膜蛋白，是目前公认的一个造血干祖细胞标志，利用免疫磁珠(MACS)或流式细胞仪分离出CD34阳性细胞及其亚群可得到较纯的造血干祖细胞。     

rhTGF—β1对人白血病细胞系诱导分化的超微结构研究

以ＨＬ６０、Ｕ９３７细胞系为体外模型，应用透射电子显微镜技术，观察了重组人转化生长因子β１（ｒｈＴＧＦ－β１）对上两种人白血病细胞系超微结构的影响。结果显示Ｕ９３７细胞对ｒｈＴＧＦ－β１的反应比ＨＬ６０细胞敏感，经ｒｈＴＧＦ－β１６ｍｇ／ｍｌ作用４天后，Ｕ９３７细胞之胞核不规则，核仁减少或消失。出现较多的粗面质网，胞浆中可见吞噬小体，进一步证实ｒｈＴＧＦ－β１ＳＫ可诱导Ｕ９３７细胞向成熟分化，分化     

双色间期荧光原位杂交定量监测治疗中CML患者的肿瘤细胞负荷

目的　研究双色间期荧光原位杂交 (I-FISH)技术监测CML治疗过程中肿瘤细胞负荷的灵敏度及特异性。方法　应用I-FISH、常规细胞遗传学 (CCG)G显带技术和筑巢式逆转录聚合酶链式反应 (RT -PCR)技术对 2 0例治疗中CML患者骨髓中的肿瘤负荷进行检测。结果　对照组骨髓细胞假阳性率为 0 6 %～2 0 % ,分界值为 2 4 5 % ;2 0例患者经IFN -α治疗或骨髓移植后 9/18例(5 0 % )CCG检测到Ph( )细胞 ,阳性细胞率 16 7%～ 10 0 % ;结合正常分界值 ,16 /2 0例 (80 % )经I-FISH检测到BCR -ABL( )肿瘤细胞 ,阳性细胞率 2 8%～ 99 6 %。 16例患者行RT -PCR检查 ,13/16例 (81 3% )融合基因转录本阳性。结论　I -FISH技术可高度灵敏、特异地监测CML患者治疗过程中肿瘤细胞负荷的变化 ,与CCG及RT -PCR相比 ,检测所得结论更加科学、合理和具有说服力。     

流式细胞术测定血小板功能活性的初步体会

长 期以来 ,人们一直寻求建立一种较好的方法来检测血小板的活化状态 ,以了解体内血栓形成或血栓前状态及相关的出血性疾病的血小板的变化特征。随着流式细胞术的成熟及日益开发出各种荧光标记的单克隆抗体 ,目前已可以通过流式细胞术检测血小板功能活性。笔者对此有些初步体会与同行交流。1　资料与方法1.1　仪器与试剂仪器为美国BectonDeckison公司生产的FACS Calibur流式细胞仪。荧光素标记的单抗CD4 1、CD6 2 p、CD6 3、IgG1等均由深圳晶美试剂公司购得。ADP试剂为上海东风生化试剂公司产品。 2mMPBS与 1%多聚甲醛 -PBS为本室…     

造血干细胞移植治疗恶性血液病疗效分析

 目的　比较自体与异体造血干细胞移植 (HSCT)治疗白血病和非霍杰金氏淋巴瘤 (NHL)的疗效和移植相关死亡。方法　 2 2 2例白血病和NHL中 ,112例接受自体HSCT、110例接受异体HSCT ,其中38例急性早幼粒细胞白血病 (M3 )和 36例NHL均为自体HSCT。移植预处理方案包括 :14 9例TBI +Cy、2 3例改良Bucy、5 0例MACC方案。 结果　全部患者均获得造血重建 ,在自体与异体移植后白细胞>1.0× 10 9/L和血小板 >2 0× 10 9/L的时间 ,二组分别为 (14 .3± 6 .1)d和 (17.8± 9.2 )d与 (15 .1±4 .6 )d和 (19.6± 10 .3)d ,二组比较造血重建时间无差异 (P >0 .0 1)。非M3 白血病自体与异体移植后 5年估计无病生存率为 (5 2 .0± 5 .8) %和 (6 2 .4± 6 .2 ) %、复发率为 (44 .7%和 14 .5 % ) ,M3 白血病自体移植无病生存率 (93.6± 4 .4 ) %、复发率 5 .3% ,NHL自体移植无病生存率 (6 6 .3± 8.0 ) %、复发率 2 2...     

中大剂量阿糖胞苷强化巩固治疗急性髓系白血病15例

目的 观察中大剂量阿糖胞苷作为急性髓系白血病(AML)缓解后强化治疗方案的临床疗效及其对自体外周造血干细胞采集及造血重建的影响;观察染色体核型分析结果 与临床预后的关系.方法 15例AML患者缓解后予中大剂量阿糖胞苷强化治疗;此后有3例患者接受异基因造血干细胞移植(allo-SCT),7例接受自体外周造血干细胞移植(APBSCT).结果 2例在CR1期行非血缘allo-SCT,日前均无病生存,1例在复发期行单倍型allo-SCT,在+110天复发;7例行APBSCT的患者中3例无病生存,另外4例复发;未行移植的5例患者均死亡.7例接受APBSCT的患者采集的中位MNC 7.33×108/kg,中位CD+34细胞6.9×106/kg,中性粒细胞>0.5×109/L的中位时间+11天,血小板>20×109/L的中位时间+13大.具有预后良好核型的患者3例,2例无病生存;具有预后不良核型的患者4例,2例行allo-SCT,1例行APBSCT,目前均无病生存,另外1例死亡;具有预后中等核型的患者共6例,其中1例联合APBSCT,目前无病生存,其余患者均死亡.结论 中大剂量阿糖胞苷不联合造血干细胞移植作为AML缓解后强化治疗患者复发率较高,具有预后中等和不良染色体核型的患者行allo-SCT可能改善预后;采用中大剂量阿糖胞苷巩固强化治疗的患者均能采集到足够的造血干细胞并能造血重建.     

腺相关病毒与变异体DHFR和GFP重组载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达

全身化疗仍然是目前治疗恶性肿瘤的主要手段之一,而化疗对骨髓造血的抑制严重影响治疗肿瘤的疗效。将耐药基因导入造血干细胞可以保护机体的造血,从而提高对化疗敏感肿瘤患者对化疗药物的耐受性,增大化疗药物的剂量,缩短化疗间隔时间提高疗效。腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)能稳定整合宿主细胞染色体中、感染静止期细胞和无致病性等优点,已成为基因治疗中的热点载体。变异体二氢     

银丹心泰滴丸联合美托洛尔治疗室上性心律失常的临床疗效观察

目的观察银丹心泰滴丸联合美托洛尔治疗室上性心律失常的临床疗效。方法选取2011—2013年深圳市光明新区人民医院心内科收治的室上性心律失常患者120例,将其随机分为观察组和对照组,各60例。在常规治疗的基础上,对照组给予美托洛尔治疗,观察组给予银丹心泰滴丸联合美托洛尔治疗,均治疗8周。比较两组患者临床疗效、治疗前后心率变异性时域指标〔相邻RR间期相差大于50 ms的个数占总数的百分比(PNN50)、正常相邻心动周期差值的均方的平方根(rMSSD)、RR间期平均值标准差(SDANN)、全程每5 minNN间期标准差的平均值(SDNNindex)及24 h全部心动周期的标准差(SDNN)〕及治疗期间不良反应发生情况。结果观察组患者有效率为90%(54/60),高于对照组的85%(51/60)。治疗前两组患者PNN50、rMSSD、SDANN及SDNN比较,差异无统计学意义(P0.05);治疗后观察组患者上述指标均高于对照组(P0.05)。两组患者治疗期间均未发生严重不良反应。结论银丹心泰滴丸联合美托洛尔治疗室上性心律失常临床疗效显著,能有效改善患者心率变异程度且安全性高。     

头孢吡肟治疗中性粒细胞减少伴发热115例临床观察

感染是血液系统恶性疾病的首要并发症，尤其是在大剂量化疗后中性粒细胞缺乏的状态下，各种细菌感染的发生率及其耐药率之高已经严重影响了白血病的预后。如何选择有效的抗生素进行经验性治疗已引起了广泛的关注。本研究通过对头孢吡肟（马斯平）治疗恶性血液病患者中性粒细胞减少伴发热的疗效观察，旨在为化疗合并感染抗生素的合理选择提供有价值的经验。     

重组绿色荧光蛋白腺相关病毒载体转染293细胞和CD34^＋细胞

目的研究重组绿色荧光蛋白腺相关病毒载体分别转染293细胞(人胚肾细胞)和人CD34^ 细胞后绿色荧光蛋白的表达情况。方法用CS-3000血细胞分离机分离骨髓单个核细胞，免疫磁性分离仪纯化CD34^ 细胞，重组绿色荧光蛋白腺相关病毒载体分别转染两种细胞，并通过荧光显微镜、流式细胞仪对绿色荧光蛋白的表达进行分析。结果荧光显微镜下两种细胞均可见绿色荧光蛋白表达，流式细胞仪于一定时间内检测293细胞的基因转导效率最高为32．8％，CD34^ 细胞的基因转导效率最高为25％．在所观察的时间内，转染率呈先升高后降低趋势。结论重组绿色荧光蛋白腺相关病毒载体能转染293和CD34^ 细胞，绿色荧光蛋白基因可作为良好的报告基因，为将来的干细胞基因治疗打下良好基础。