下调LRH1 对骨肉瘤细胞生长和Wnt/β-catenin 信号通路的影响

目的：探讨下调肝受体类似物1(LRH1)对骨肉瘤U2OS细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。方法：采用RT-qPCR和Western blot分别检测人骨肉瘤细胞U2OS和成骨细胞hFOB1.19中LRH1 mRNA和蛋白表达差异;将体外培养的U2OS细胞分为对照组（Ctrl）、阴性对照（NC）-siRNA组和LRH1-siRNA组,RT-qPCR检测各组U2OS细胞中LRH1 mRNA表达,MTT、流式细胞术、Transwell小室和划痕实验分别检测各组U2OS细胞增殖活力、细胞周期分布情况、穿膜细胞数和划痕愈合率,Western blot检测各组U2OS细胞中LRH1和Wnt/β连环蛋白（β-catenin）信号通路相关蛋白β-catenin、细胞周期素D1(CyclinD1)、c-Myc、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达。结果：与hFOB1.19细胞相比,U2OS细胞中LRH1 mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）;与NC-siRNA组相比,LRH1-siRNA组U2OS细胞中LRH1 mRNA表达、细胞增殖活力、S期细胞占比、穿膜细胞数、划痕愈合率和LRH1、β-...     

百里酚调控STAT3-铁死亡负调节轴抑制SW480细胞的增殖及作用机制研究

目的：基于STAT3-FNR轴探究百里酚对人结直肠癌SW480细胞增殖的影响及作用机制。方法：MTT法检测百里酚对SW480细胞的增殖抑制率;结晶紫染色检测百里酚对SW480细胞克隆形成能力的影响;Calcein AM活细胞荧光探针检测细胞活力;透射电镜检测SW480细胞的线粒体形态;JC-1线粒体膜电位荧光探针检测SW480细胞的线粒体膜电位;试剂盒检测百里酚对SW480细胞ROS、MDA、Fe(Ⅱ)及GSH水平的影响;qRT-PCR检测百里酚对SW480细胞STAT3-FNR轴相关mRNA表达的影响;Western Blot检测百里酚对SW480细胞STAT3-FNR轴相关蛋白表达的影响。结果：百里酚呈时间和浓度依赖性地抑制SW480细胞增殖和克隆形成能力(P<0.05或P<0.01),同时伴随着细胞活力的降低;百里酚处理的细胞呈现出线粒体形状不规则化、线粒体减小、线粒体膜密度和膜电位改变等多种铁死亡早期形态;百里酚呈浓度依赖性地升高SW480细胞中铁死亡重要指标ROS、MDA及Fe(Ⅱ)水平,降低GSH水平和STAT3、GPX4、FTH1、SLC7A11 mRNA及蛋...     

蒲公英甾醇对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的增殖、 迁移和凋亡及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨蒲公英甾醇对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)的增殖、迁移和凋亡及TLR4/NF-κB信号通路的影响和机制研究。方法 CCK-8检测蒲公英甾醇的毒性;ELISA法检测MH7A细胞中炎性介质的分泌水平;EDU检测MH7A细胞的增殖能力;Transwell法检测MH7A细胞的迁移能力;细胞流式术检测MH7A细胞的凋亡能力;Western blot法检测MH7A细胞中TLR4、p-NF-κB p65和NF-κB p65蛋白的表达情况。结果 蒲公英甾醇的最佳作用浓度为5、10、15μg/ml;经LPS诱导后,蒲公英甾醇对MH7A细胞炎性因子的分泌量有抑制作用(P<0.05);与LPS组比较,不同浓度的蒲公英甾醇使MH7A细胞的增殖能力和迁移能力下降,凋亡率提高(P均<0.05);Western blot法检测结果显示,与LPS组比较,不同浓度蒲公甾醇使TLR4蛋白表达降低,NF-κB p65的磷酸化程度降低(P均<0.05)。结论 蒲公英甾醇能降低MH7A细胞的增殖能力、迁移能力并诱导其凋亡,可能与其降低TLR4和NF-κB p65的磷酸化程度有关。     

基于转录组测序的创伤早期小鼠腹腔巨噬细胞差异表达基因的分析及验证

目的 研究严重创伤后小鼠腹腔巨噬细胞基因表达谱的动态变化规律并分析验证其相关生物学功能。方法 构建6周左右20～22g的雄性C57BL/6小鼠骨折+失血的严重创伤模型，随机分为对照组和三个严重创伤组(TH2h、TH6h、TH12h),每组10只。在双下肢股骨骨折+眼球40%失血后2、6、12h后提取腹腔巨噬细胞的RNA进行转录组测序。所得序列经质控后，利用差异分析软件DEGseq筛选出差异表达基因，使用Venn分析得到目标差异表达基因集。对目标差异表达基因进行GO富集分析。选择GO中干扰素诱导(interfer on-induced, Ifi)相关的差异表达基因，采用聚类分析这些Ifi相关基因的表达模式，进一步使用定量PCR法检测其mRNA的表达，以验证测序的准确性。结果 与对照组相比，TH2h组有903个差异表达基因，TH6h组有1337个差异表达基因，TH12h组有1720个差异表达基因。Venn分析表明，3组中共存在313个差异表达基因，GO功能富集分析发现313个基因主要富集于GO条目下的“生物进程”中，富集程度最大的是“对干扰素β的细胞响应”。选择Ifi相关基因(Ifi35、...     

增强创伤后小鼠巨噬细胞的芳香烃受体表达对炎症因子水平和杀菌能力的影响

目的探讨严重创伤后小鼠腹腔巨噬细胞(PM)中芳香烃受体(AhR)的表达规律并分析增强创伤后PM的AhR表达对炎症因子水平和杀菌能力的影响。方法采用实验研究方法。取40只6～8周龄雄性C57BL/6J小鼠(小鼠周龄、性别、品系下同), 按随机数字表法(分组方法下同)分为对照组、创伤后2 h组、创伤后6 h组、创伤后12 h组, 每组10只。将后3组小鼠构建骨折+失血的严重创伤模型, 对照组小鼠不做处理。分别在未创伤和创伤后2、6、12 h时, 提取对照组、创伤后2 h组、创伤后6 h组、创伤后12 h组小鼠原代PM(提取细胞下同), 分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量反转录PCR法检测AhR的蛋白和mRNA表达, 采用转录组测序分析AhR信号通路相关分子的基因表达。取20只小鼠分为对照组、创伤后6 h组, 每组10只, 提取PM后, 采用免疫沉淀法检测AhR泛素化水平。取12只小鼠, 分为单纯二甲基亚砜(DMSO)组、创伤后6 h+DMSO组、单纯MG-132组、创伤后6 h+MG-132组, 每组3只, 并行相应处理后, 提取PM, 采用蛋白质印迹法检测AhR蛋白的表达。取20只小鼠构...     

血清microRNA-374b-5p水平预测多发性创伤患者下肢深静脉血栓风险的价值

目的 探究血清microRNA-374b-5p(miR-374b-5p)水平对多发性创伤患者并发下肢深静脉血栓（DVT）的价值。方法 选取2020年1月—2021年12月在海南医学院第二附属医院就诊的192例多发伤患者作为研究对象。根据是否并发下肢DVT将多发伤并发DVT患者作为DVT组、多发伤非DVT患者作为对照组，分别有63、129例。比较两组患者年龄、性别、体重指数（BMI）等人口统计学指标，分析D-二聚体（D-Dimer）、纤维蛋白原（FIB）、纤维蛋白原降解产物（FDP）、凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）及血小板计数（PLT）等凝血指标。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测两组患者血清miR-374b-5p的表达，分析其与各临床指标的相关性。通过多因素Logistic回归分析血清miR-374b-5p是否为多发伤并发DVT的独立危险因素。绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析miR-374b-5p对多发伤患者并发DVT的预测效能。结果 DVT组ISS评分、下肢骨折占比、D-Dime较对照组高（P <0.05）。DVT组血清miR-374b-5p相对表达量...