环氧合酶-2反义寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞周期的影响

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)反义寡核苷酸抑制Hela细胞增殖的机制及其临床意义。方法2004年5月至2005年5月在温州医学院附属一院将Hela细胞用MEM培养基培养,像差倒置显微镜下观察细胞的增殖情况。Hela细胞分4组培养:正常对照组、反义寡核苷酸(ASODNS)转染组、正义寡核苷酸(SODNS)转染组、脂质体处理组。细胞转染后48h,采用流式细胞仪检测各组细胞周期的变化。结果反义寡核苷酸转染组细胞的增殖受到了显著抑制,ASODNS处理的细胞与其它组比较,G2/M期细胞[(10.75±0.24)%]所占比例增高明显(P<0.05),S期细胞[(10.13±0.04)%]比例明显减少,差异有显著性意义(P<0.05),而G0/G1期[(79.12±0.06)%]无统计学意义的改变。结论ASODNS对Hela细胞的增殖具有抑制作用,其抑制机制可能与引起细胞周期再分布,降低S期细胞比例及阻滞细胞G2/M期有关。     

环氧合酶-2反义寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响

目的研究COX-2反义寡核苷酸(AS-ODNs)对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响。方法体外设计、合成针对COX-2的反义寡核苷酸,并转染宫颈癌Hela细胞,应用细胞蛋白印记法(West-blot)测定转染COX-2反义寡核苷酸后Hela细胞COX-2基因蛋白的表达变化,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测(MTT)COX-2反义寡核苷酸转染后Hela细胞对顺铂敏感性的变化。结果转染针对COX-2的反义寡核苷酸后,在24、48和72h,Hela细胞COX-2蛋白的表达水平下降;在转染48h后,Hela细胞对顺铂的半数抑制量从(10.475±1.713)μg/ml提高到(0.194±0.021)μg/ml,Hela细胞对顺铂的敏感性增加了53.88倍。结论COX-2反义寡核苷酸能增加宫颈癌Hela细胞对顺铂的敏感性。     

NS-398对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响

目的 研究环氧合酶-2（COX-2）特异性抑制剂NS-398对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响.方法 用含NS-398和顺铂的细胞培养液作用于Hela细胞,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测作用后的Hela细胞对顺铂敏感性的变化;采用流式细胞仪分别检测经过NS-398和顺铂作用的细胞与顺铂联合单独作用的细胞的COX-2蛋白表达情况.结果 NS-398和顺铂联合作用后的Hela细胞COX-2表达量较顺铂单独作用后的减少,差异有统计学意义（P〈0.05）;在转染48h后,Hela细胞对顺铂的半数抑制量（IC50值）从（10.475±1.713）μg/ml提高到（0.194±0.021）μg/ml,Hela细胞对顺铂的敏感性增加了53.88倍.结论 NS-398能增加宫颈癌Hela细胞对顺铂的敏感性.     

塞来昔布抑制宫颈癌Hela细胞的研究

目的 研究塞来昔布对宫颈癌Hela细胞的抑制作用及其抑制机制,探讨塞来昔布对宫颈癌的治疗意义.方法 Hela细胞分以下3组培养:Hela细胞对照组(A),仅用常规培养液(MEM)培养.塞来昔布设置2个浓度亚组,10 μmol/l(B1)、50 μmol/l(B2)在作用48h后用倒置相差显微镜观察各组细胞增殖状态,并用流式细胞仪检测COX-2蛋白的表达情况.结果 与对照组相比,经塞来昔布作用的细胞形态和生长状态都有改变,细胞相对增长缓慢,随浓度的增长,细胞数呈递减的趋势;随着塞来昔布浓度的增加,COX-2蛋白的表达量明显减少,有显著性差异.结论 塞来昔布可能通过抑制COX-2蛋白的表达抑制宫颈癌Hela细胞的增殖.     

环氧合酶-2反义寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用

目的研究COX-2反义寡核苷酸(AS-ODNs)对宫颈癌Hela细胞的抑制作用.方法Hela细胞分以下6组培养:Hela细胞对照组(A),仅用常规培养液培养Opitin-MEM/MEM;正义组(B):加入正义COX-2核苷酸至终浓度10μmol/l+lipofectin+Opitin-MEM;脂质体组(C)lipofectin+Opitin-MEM.每组设4个复孔;反义寡核苷酸转染组(D)设置3个浓度亚组,分别转染AS-ODNs至终浓度为5 μmol/l(D1)、10μmol/1(D2)、15 μmol/l(D3);在转染后24、48、72、96、120小时采用MTT方法检测各组细胞增殖状态,根据测得的OD值画细胞生长曲线.结果(1)与其他组相比,经AS-ODNs的细胞形态和生长状态都有明显改变,可见细胞生长状态差,增长缓慢该组细胞OD值与其它组比较,差异显著(P＜0.01);(2)根据各组细胞的OD值,绘制细胞生长曲线,可见对照组、正义组、脂质体组生长曲线呈明显上升的趋势;AS-ODNs作用的三个亚组则呈下降趋势,且随浓度的增高,细胞生长曲线下降幅度增大,其抑制效果与作用时间有关,转染后48～72小时抑制效果最强,如果不行AS-ODNs补充,120小时抑制效果基本消失.结论COX-2反义寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞的增殖具有抑制作用.     

人端粒酶逆转录酶启动子DNA甲基化在卵巢良恶性肿瘤组织中的表达差异

目的探讨卵巢良、恶性肿瘤组织中人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子DNA甲基化的表达差异。方法收集15例卵巢恶性肿瘤患者术中新鲜肿瘤组织标本,设为实验组;另取15例卵巢良性肿瘤患者术中新鲜肿瘤组织标本,设为对照组;培养Hela细胞3组,作为实验阳性结果对照组。所有实验组织及细胞标本均提取DNA,进行甲基化特异性聚合酶链式反应,以Hela细胞甲基化结果作为阳性对照组,比较3组hTERT启动子DNA甲基化阳性率。结果实验组甲基化阳性率为73.3%（11/15）,对照组甲基化阳性率为26.7%（4/15）,阳性对照组甲基化阳性率为100.0%（3/3）。实验组甲基化阳性率明显高于对照组,差异有统计学意义（P=0.027）。结论与卵巢良性肿瘤组织比较,卵巢恶性肿瘤组织hTERT启动子DNA甲基化率明显增高。     

环氧合酶-2及其抑制剂与妇科肿瘤相关性研究进展

环氧合酶-2(COX-2)在妇科肿瘤中呈高表达,尤其在腺癌中,COX-2在促进肿瘤的浸润生长和转移,诱导化疗、放疗抵抗等方面都有相关性.应用COX-2抑制剂不但可抑制肿瘤的生长,而且结合其他方法可提高治疗效果、延长生存时间,因此,COX-2有可能成为妇科肿瘤治疗研究的新靶体.     

COX-2反义寡核苷酸抑制宫颈癌Hela细胞的研究

目的：通过研究环氧合酶-2（COX-2）反义寡核苷酸（AS-ODNs）对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制及对其抑制原理进行分析,探讨COX-2 AS-ODNs对宫颈癌的治疗意义.方法：Hela细胞分6组培养：对照组（A）、正义寡核苷酸（SODNS）组（B）、脂质体组（C）及反义寡核苷酸组 （D）设3个亚组.MTT实验检测细胞的增殖情况;在转染后48 h,RT-PCR法检测COX-2 mRNA的表达水平,Western blot检测COX-2蛋白的表达,流式细胞仪测定细胞周期的变化.结果：与其他组比较,AS-ODNs转染的细胞增殖缓慢,且随着AS-ODNs的浓度增加细胞增殖指数有下降的趋势,COX-2 mRNA及蛋白表达明显下调,表达量随AS-ODNs转染浓度的增加而减少,细胞周期S期细胞比例明显减少,G2/M及G0/G1期细胞所占比例增多,P ＜0.05.结论：COX-2反义寡核苷酸对Hela细胞的增殖有抑制作用;其抑制机制可能与抑制COX-2转录与翻译及细胞周期再分布有关.     

沉默ADRB2基因对卵巢上皮性癌细胞生物学特性及顺铂敏感性的影响

目的 探讨下调β2型肾上腺素受体(beta-2 adrenergic receptor,ADRB2)基因表达对卵巢上皮性癌细胞顺铂敏感性以及细胞增殖、凋亡的影响及机制。 方法 以人卵巢癌细胞株SKOV3/DDP为研究对象,采用小RNA干扰技术沉默ADRB2的表达,实验分为4组:ADRB2 shRNA1感染组、ADRB2 shRNA2感染组、阴性对照shRNA感染组、未感染的SKOV3/DDP细胞作为空白对照组。采用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40 μmol/L)顺铂作用后,采用CCK-8法检测4组卵巢癌细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测4组细胞的凋亡率,Western blot法检测4组卵巢癌细胞中caspase-9、Bcl-2及Bax蛋白的表达,采用单因素方差分析进行比较。 结果 不同浓度的顺铂处理后,4组细胞的生长抑制率均逐渐升高,且呈剂量依赖性。2组ADRB2 shRNA感染细胞的顺铂耐药IC50分别为(29±8)μmol/L和(32±11)μmol/L,明显低于阴性对照组[(104±15)μmol/L,P<0.01]和空白对照组[(112±10)μmol/L,P<0.01];4组细胞的凋亡率逐渐增加,且呈剂量依赖性。2组ADRB2 shRNA感染细胞的凋亡率均明显高于阴性对照组(P<0.01)。4组细胞的caspase-9、Bax蛋白的表达水平逐渐增加,且呈浓度依赖性,2组ADRB2 shRNA感染细胞的caspase-9、Bax蛋白水平均明显高于阴性对照组(均P<0.05)。4组细胞的Bcl-2蛋白的表达水平逐渐降低,且呈浓度依赖性,2组ADRB2 shRNA感染细胞的Bcl-2蛋白水平均明显低于阴性对照组(均P<0.05)。 结论 顺铂诱导可使ADRB2基因下调的顺铂耐药卵巢癌细胞的增殖减少、凋亡增加,其可能机制为通过调节caspase-9、Bcl-2和Bax凋亡家族蛋白的表达,从而增加细胞对顺铂的敏感性。      

环氧合酶-2及其抑制剂与妇科肿瘤相关性研究进展

环氧合酶-2(COX-2)在妇科肿瘤中呈高表达，尤其在腺癌中，COX-2在促进肿瘤的浸润生长和转移，诱导化疗、放疗抵抗等方面都有相关性。应用COX-2抑制剂不但可抑制肿瘤的生长，而且结合其他方法可提高治疗效果、延长生存时间，因此，COX-2有可能成为妇科肿瘤治疗研究的新靶体。