抗肝癌单链双功能抗体在Hut-78细胞系中的表达及体外杀伤活性

目的 用携带分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因（sFv-TNF-α）的重组逆转录病毒感染T细胞淋巴瘤Hut-78细胞，使其表达并分泌针对人肝癌细胞的sFv-TNF-α融合蛋白，观察转导的T细胞对体外培养肝癌细胞的杀伤作用。方法 用感染性重组病毒产生细胞C22（PA317/PST）产生的病毒上清转导入T细胞淋巴瘤Hut-78细胞，采用PCR，RT-PCR，细胞原位杂交及免疫组织化学染色等方法，对转导的Hut-78细胞进行DNA，mRNA及蛋白水平的分析。转导的Hut-78细胞分别与SMMC-7721，HHCC共培养，MTT法检测Hut/PST细胞表达产物对两种肝癌细胞的杀伤作用。结果 PCR，RT-PCR结果显示转导Hut细胞中扩增出外源目的基因对应的电泳条带，neo基因探针原位杂交显示转导细胞质内有较强的紫蓝色阳性反应信号，其阳性率约为95%，鼠抗人TNF-α多克隆抗体免疫组织化学染色，转导细胞质内有明确的棕黄色阳性反应信号，MTT法检测结果，分泌型抗肝癌单链双功能抗体对体外培养的两种肝癌细胞的杀伤率分别为15.4%和26.5%。结论 分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因可以在T细胞中整合并稳定表达，其分泌的表达产物对两种肝癌细胞均具有一定的亲合活性，并且具有一定的体外杀伤作用。     

Hemorrhagic fever with renal syndrome virus infection in livers studied by in situ hybridization and immunohistochemistry

ＨｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｆｅｖｅｒｗｉｔｈｒｅｎａｌｓｙｎｄｒｏｍｅｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎｌｉｖｅｒｓｓｔｕｄｉｅｄｂｙｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎａｎｄｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＹａｎｇＳｈｏｕｊｉｎｇ（杨守京）；Ｌ...     

抗体工程与病理学

结合抗肝癌基因工程抗体的制备，概述了抗体工程的工作内容及其与病理学的关系，抗体工程的主要目的之一是制备人的或接近人的，而能在病人体内应用的抗体，一方面它可以来源于单克隆抗体的改造，首先克隆出鼠抗体可变区的轻链及重链成为小抗体或重组成单链抗体及人鼠嵌合抗体等基因工程抗体。另一方面，也可以用免疫过的小鼠脾细胞或者人的淋巴细胞建立鼠、人抗体库，然后抗原从抗体库中筛选出鼠或人的各种类型抗体。鉴于抗体对靶细胞一般只起导向作用，要携带效应分子才发挥杀伤肿瘤细胞的作用或其它作用。常用的“弹头”有毒素及细胞因子等。所以必须将这种基因与抗体基因融合在一起才能表达有作用的融合蛋白。抗体工程还包括抗体的增效或抗体的成熟，以及对照人抗体的结构进行置换，使抗体人源化等。     

两株新的抗肝细胞肝癌单克隆抗体的制备及特异性鉴定

以外科手术切除的肝癌标本制备的细胞悬液和新建株的肝癌细胞为免疫原。籍多免疫除经致敢ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经２０次融合，从近１０，０００个融合孔中，筛选出两株（ＨＡＢ２５，ＨＡｂ２７）肝癌单克隆抗体，在９４例肝癌１４１例其他肝病组织，２６种正常组织，１２９例各组织系统的肝外恶性肿瘤组织上做了交叉反应，除ＨＡｂ２７与毛细胆管有弱的反应外，两株抗体与肝癌细胞结合的阳性率高（８３．１５％，８５．１１％），仅与     

汉坦病毒M RNA在隐性感染大鼠组织中的分布(论著)

目的：了解汉坦病毒ＭＲＮＡ在隐性感染大鼠各组织中的定位与分布情况。方法：以地高辛标记的汉坦病毒的ＭＲＮＡｃＤＮＡ为探针，与隐性感染大鼠的多种内脏组织进行原位分子杂交。结果：病毒ＭＲＮＡ主要分布在感染大鼠的肝脏，定位于受染细胞的胞浆，这与在死于流行性出血热的患者尸检组织中的分布有所不同。结论：（１）肝脏是鼠类最易受汉坦病毒侵犯与寄生的器官；（２）汉坦病毒感染大鼠与人的机理有所不同，这很可能是大鼠感染汉坦病毒后不发病的原因之一。     

肾综合征出血热内分泌组织中的病毒抗原、病变及其关系

作者应用免疫细胞化学法研究了HFRS尸检内分泌及其有关组织中病毒抗原的分布,病毒抗原阳性细胞与病变的关系,病变的类型及病毒感染对胰腺内胰岛素表达的影响,所用的一抗有抗肾综合征出血热(HFRS)病毒糖蛋白(G_2),核蛋白(NP)及血凝素(HA)抗原的单克隆抗体(15种)和多克隆抗体(PAb)以及抗胰岛素(INS)单克隆抗体。结果显示,内分泌组织中有两种染色形态的病毒抗原,一种是胞浆弥漫染色的抗原,为G_2,NP或HA阳性,阳性细胞弥漫分布,另一种是以病毒包涵体(IB)形式出现的颗粒性抗原,MAbs染色多为实性,PAb染色多为空泡状。在9例胰腺组织中,有4例几乎在所有腺上皮细胞和少数胰岛细胞均为IB阳性,但PAb染色可在胰岛细胞中显示出空泡状IB。在其它内分泌组织中,IB只在少数细胞中出现。抗原阳性细胞很少出现坏死,但在脑垂体及肾上腺灶性或片状凝固性坏死区域也有弥漫性抗原阳性及IB存在。胰腺组织的胰岛素染色显示,除1例胰岛INS强阳性,其余8例均有明显的INS染色减弱及阳性细胞减少的表现。结果提示,内分泌组织中有两种病变,即以IB为特征的病毒直接感染引起的细胞病变,是病毒的弱致病变作用,该病变可能对细胞的内分泌功能产生影响;另一种病变是组织的灶性或大片性同步性凝固性坏死,是继发于病毒感染后的出血和休克,该病变会     

流行性出血热流产婴儿与胎盘的病理变化及巨噬细胞内抗原定位

妊娠6~ 个月孕妇感染流行性出血热(EHF),临床有典型的EHF的发病过程。第23病日血清学检测孕妇外周血EHF-IgG(卅)、IgM(-),第24病日流产一女婴,抽取脐带血检测EHF-IgG(卅),流产女婴心血检测EHF-IgG(卅),IgM(-)。病理:肾小球上皮细胞肿胀,上皮细胞足突融合、坏死,毛细血管基底膜皱缩,肾小管上皮细胞线粒体肥大,间质内大单核细胞浸润。肺间质细胞增生、水肿、毛细血管基底膜不规则增厚,肺泡壁Ⅱ型细胞增多。肝细胞肿胀,胞浆内查见包涵体样物质,有多核肝巨细胞,地依红染色阴性。胎盘母体面、脐带、肺、肝间质内大单核细胞、中性粒细胞浸润。EHF-MCAb荧光直接法染色、PAP、ABC等免疫组化染色,在巨噬细胞浆内均为阳性反应,从而证实母体感染EHF可以经胎盘感染给胎儿,其传播方式可能是通过巨噬细胞系统。     

Pathological changes and viral antigen distribution in the lymphatic tissue of Patients with epidemic hemorrhagic fever

Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ａｎｄ　ｖｉｒａｌ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｙｍｐｈａｔｉｃ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　Ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｅｐｉｄｅｍｉｃ　ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ　ｆｅｖｅｒＬｉｕＹａｎ...     

肝癌细胞内表达抗肝癌单链抗体

0引言细胞内抗体（intrabody）技术是近几年来完善的一种新的基因治疗策略[1]。细胞内抗体具有结合、灭活肿瘤细胞癌蛋白、诱导细胞凋亡的作用[2]。未见有关在肝癌细胞内表达抗肝癌单链抗体的研究报道。本研究在肝癌细胞内表达抗肝癌单链抗体，观察单链抗体在肝癌细胞内表达对肝癌细胞的影响。1方法抗人肝癌单链抗体基因由本室制备。该基因长700加，由重链可变区基因和轻链可变区基因I－inker（Gly4Ser）。连结组成，重链5’端含有EcoRI酶切位点和A”l’G启始码，删除了轻链可变区分端57个碱基，轻链3’端含有一个Sail酶切位点。将含有…     

慢性乙型肝炎肝内HBV DNA和HBsAg的双标记定位研究

应用原位杂交和免疫组化PAP法双标记技术,结合病人乙型肝炎(乙肝)病毒血清学标志物检测结果,研究了31例慢性乙肝病人肝穿刺组织中乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)和HBsAg的分布及意义。结果显示,肝组织内检出HBV DNA 23例,HBsAg 26例,二者同时检出者21例。从同组病人肝组织内HBV DNA和HBsAg双标检测结果与其乙肝病毒血清学标志物检测结果的比较来看,肝组织内HBV DNA和HBsAg同时阳性很可能表明HBV正处于复制及表达的活动状态。