GLP-1诱导的自噬对糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用

目的 研究GLP-1通过调控mTOR信号通路诱导的自噬对糖尿病大鼠视网膜病变是否存在保护作用。 方法 建立符合要求的糖尿病视网膜病变大鼠模型,分为模型组、胰岛素组和GLP-1组,每组6只,于造模后即刻、4周、8周、12周测定大鼠空腹血糖水平,12周后处死,取视网膜组织行HE染色,免疫组化法测LC3、P53的表达,超氧化物歧化酶法测定血清氧化应激产物ROS、MDA的含量,Western blotting法测定mTOR蛋白表达。 结果 与模型组相比,胰岛素组和GLP-1组可以明显降低空腹血糖,差异有统计学意义,而两组内比较差异无统计学意义。HE染色显示模型组视网膜神经节细胞排列紊乱,细胞减少或缺失,而胰岛素组和GLP-1组视网膜神经节细胞排列较规整,数量无明显减少,接近正常。免疫组化显示GLP-1组LC3、P53蛋白表达较其他组升高分别为(2.34±0.13,0.46±0.03),与各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。GLP-1组氧化应激产物ROS、MDA含量分别为(74.68±4.08,55.60±1.50),较其他组减少,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blotting法测定GLP-1组mTOR蛋白含量下降(0.43±0.04),与各组间比较差异有统计学意义(F=105.447,P<0.05)。 结论 GLP-1可能通过调控mTOR信号通路,激活自噬,减少视网膜氧化应激损伤,从而达到保护视网膜的作用。     

依达拉奉对间歇低氧损伤后大鼠脑组织自噬及凋亡的影响

目的 探讨依达拉奉对间歇低氧损伤后大鼠脑组织自噬及凋亡的影响。方法 采用随机数字表法将96只Wistar大鼠分为对照组、5%间歇低氧(IH)组及依达拉奉(ED)组,每组又分为1 d、3 d、7 d、14 d 4个时间点,每个时间大鼠8只。透射电镜观察大鼠海马CA1区神经细胞的超微结构;免疫组织化学法观察大鼠神经细胞自噬效应蛋白(beclin)-1、微管相关蛋白1轻链(LC)3-Ⅱ蛋白的表达;原位末端标记法记录大鼠神经细胞的凋亡情况。结果 电镜下对照组神经细胞形态正常,染色质均匀,线粒体、高尔基体等细胞器结构正常;与对照组比较,5%IH组从间歇低氧损伤3 d开始逐渐出现神经元变形肿胀,核膜模糊,染色质密度欠均匀,线粒体空泡化、嵴出现断裂,激活溶酶体,出现自噬小体,随着低氧时间的延长,损伤越重;与5%IH组比较,ED组各个时间点神经元超微结构损伤减轻,自噬小体数目增多。对照组神经细胞beclin-1、LC3-Ⅱ的表达较少,各个时间点差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,5%IH组及ED组各个时间点beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达显著增多(P<0.05);与5%I...     

还原型谷胱甘肽调控Nrf2/iNOS信号对DR大鼠视网膜的保护机制

目的 探讨还原型谷胱甘肽调控Nrf2/iNOS信号对DR大鼠视网膜的保护机制.方法 选取48只SD大鼠,随机分成健康组、病变组、他汀组、甘肽组,每组均为12只大鼠,除健康组外其余组别均建立糖尿病视网膜病变大鼠模型,建模成功后健康组与病变组不进行用药,他汀组大鼠给予辛伐他汀灌胃,甘肽组大鼠采用还原型谷胱甘肽干预,各组大鼠...     

胰激肽原酶对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及机制

目的研究注射用胰激肽原酶对慢性高眼压大鼠眼压及视网膜神经节细胞( RGCs)的保护作用。方法 SD大鼠 30只,按随机数字表法分为空白组、模型组、治疗组,每组 10只。模型组和治疗组用巩膜静脉烧灼法制作慢性高眼压大鼠模型,造模成功 1周后,治疗组给予胰激肽原酶( 0.8 U)治疗,而空白组、模型组给予腹腔注射等剂量 0.9%氯化钠溶液( 0.2 mL),均每天 1次,连续 2周。监测大鼠眼压的变化并记录数据。苏木精 ?伊红(HE)染色观察 RGCs形态, DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL)测定 RGCs凋亡情况,免疫组织化学染色法测定细胞凋亡相关基因 B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)、 Bcl?2相关 X蛋白( Bax)的含量。结果造模前眼压各组无明显变化( F＝0.152,P＞0.05),造模后模型组［术后 1周:(32.85±2.06)mmHg,术后 2周:(33.27±2.24)mmHg,术后 3周( 33.00±1.09)mmHg］与治疗组［术后 1周:(32.77±2.07)mmHg,术后 2周:(31.68±2.20)mmHg,术后 3周(30.09±2.52)mmHg］眼压均升高,与空白组［术后 1周:(15.44±1.02)mmHg,术后 2周:(15.21±1.41)mmHg,术后 3周( 14.90±1.32)mmHg］比较差异有统计学意义( F＝355.429,F＝427.714,F＝315.063;均 P＜0.001)。 HE染色示空白组视网膜各层结构清晰,模型组 RGCs排列不规整,细胞缺失,有空泡形成。治疗组细胞排列稍不规整,细胞少量缺失。 TUNEL示空白组偶见凋亡细胞,模型组凋亡细胞增多,治疗组凋亡细胞减少,组间比较差异有统计学意义( F＝796.179,P＜0.001)。免疫组化示模型组 Bcl?2、Bax表达均有所增强,而治疗组较模型组 Bcl?2表达增强, Bax表达明显减弱,各组间比较差异有统计学意义( F＝389.728,F＝525.331;均 P＜0.01)。结论胰激肽原酶可以缓慢降低眼压,还可能通过升高 Bcl?2,降低 Bax的表达抑制 RGCs凋亡,达到保护视神经的目的。     

银杏叶提取物对视网膜病变应用的研究进展

银杏（ Ginkgo Biloba Linn ）属裸子植物银杏科,其叶和果具有重要的生理作用和药用价值。银杏叶提取物（ EGB）是一种药理作用广泛、不良反应少的天然药物,其在心脑血管、外周血液循环障碍性等疾病方面的疗效已得到了充分的肯定。近年来,眼底视网膜疾病的患病率在我国呈快速上升发展趋势,银杏叶提取物在眼科中的应用也取得了很大的进展。现在就银杏叶提取物的药理作用及其在视网膜疾病中的应用做一综述。     

内眦韧带减张修复在下泪小管断裂中的疗效分析

目的 探讨内眦韧带减张修复在外伤性下泪小管断裂合并内眦韧带断裂患者中的应用效果。 方法 回顾性分析华北理工大学附属医院2014 年9 月-2016 年9 月收治的32 例（32 眼）下泪小管断裂合并 内眦韧带断裂患者,术中内眦韧带均采用4-0 缝线减张修复,植入泪道支撑管,8-0 可吸收缝线吻合泪小管断 端,6-0 可吸收缝线缝合皮肤及结膜。术后2 ～ 3 个月拔管,随访6 ～ 12 个月。观察泪道通畅情况及溢泪症状。 结果 治愈29 例,好转2 例,无效1 例。治愈达93.7%,总有效率达96.8%。主要并发症为泪小点撕裂2 例（6.25%）。 结论 采用减张修复法修复内眦韧带,可以为泪小管断端创造低张力的愈合环境,使泪小管断端对合整齐,效 果显著。     

慢病毒介导miR-34a表达对视网膜母细胞瘤自噬的影响及机制研究

目的　探讨慢病毒介导miR-34a表达对视网膜母细胞瘤自噬的影响并对其机制进行研究。方法　取对数生长期的Y79细胞，将转染miR-34a的慢病毒载体、转染高迁移率族蛋白1（high mobility group protein 1，HMGB1）载体、共转染miR-34a+HMGB1的慢病毒载体及培养液接种至Y79细胞构建转染miR-34a细胞系。按照接种载体分组，将Y79细胞株分为4组，分别为转染miR-34a组、转染HMGB1组、共转染miR-34a+HMGB1组及阴性对照组。用qRT-PCR检测miR-34a的表达，采用Capase3检测试剂盒检测Caspase3活性。采用流式细胞仪及单丹磺酰尸胺（monodansyl cadaverin，MDC）试剂盒在488 nm荧光下检测MDC荧光率，利用透射电子显微镜观察自噬超微结构。结果　miR-34a转染结果显示，转染miR-34a组miR-34a的相对表达量（2.04±0.46）显著高于阴性对照组（1.03±0.21）（P<0.05），共转染miR-34a+HMGB1组的HMGB1的相对表达量（0.42±0.08）显著低于转染HMGB1组（1.08±0.16），差异有统计学意义（P<0.05）。Caspase3活性测试显示，转染miR-34a组Caspase3活性（10.75±2.87）明显高于阴性对照组（3.48±0.74），转染HMGB1组Caspase3活性（2.46±0.94）低于共转染miR-34a+HMGB1组（6.21±1.74），差异有统计学意义（P<0.05）。流式细胞仪检测结果显示，转染miR-34a组MDC阳性率（56.94%）明显高于阴性对照组（2.15%），共转染miR-34a+HMGB1组的MDC阳性率（43.11%）明显高于转染HMGB1组（10.32%）（P<0.05）。透射电子显微镜观察自噬超微结构显示，阴性对照组无明显改变，共转染miR-34a+HMGB1组可见Y79细胞双层膜结构，转染miR-34a组可见自噬溶酶体结构。结论　miR-34a促进视网膜母细胞瘤的自噬凋亡，其机制可能为抑制HMGB1的表达。     

急性高眼压大鼠外侧膝状体神经元细胞自噬与凋亡的关系

目的 研究急性高眼压大鼠外侧膝状体神经元细胞自噬与凋亡的关系。 方法 健康SD大鼠90只,分为假手术组、实验组及3-MA干预组,每组30只,每组又分5个亚时间组,每亚时间组6只。假手术组仅给予前房穿刺,实验组及3-MA组采用前房持续灌注法制作急性青光眼大鼠模型,3-MA组给予3-MA 10 μL玻璃体注射。每组分别于6 h、12 h、24 h、3 d、5 d处死动物,外侧膝状体石蜡切片行免疫组化法检测LC3-Ⅱ及Beclin-1表达量的变化,TUNEL检测神经元凋亡水平,比较自噬与凋亡因子的表达量变化。 结果 实验组LC3-Ⅱ及Beclin-1阳性细胞表达在6 h出现,24 h表达达高峰,之后逐渐回归至较低水平。3-MA组得到了相似曲线,但各组表达量均低于实验组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。TUNEL检测凋亡细胞表达在6 h均呈低表达,12 h少量表达,3 d时表达量达峰值,5 d仍可见较高表达,实验组在24 h之后各时间表达量低于3-MA组,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 大鼠急性高眼压可以导致外侧膝状体神经元自噬与凋亡表达的发生,自噬可能对神经元细胞起到保护作用。     

下泪小管断裂吻合术中内眦韧带减张修复的应用效果

目的　探讨外伤性下泪小管断裂吻合术中预置内眦韧带减张缝线的应用效果。方法　采用回顾性研究法,收集2014年9月至2016年9月我院眼科收治的32例（32眼）下泪小管断裂合并内眦韧带断裂的病例,找到鼻侧断端后先将内眦韧带断端间预置4-0缝线,确认伤口断端对位满意后,松开预置缝线植入泪道支撑管,8-0可吸收缝线吻合泪小管断端,6-0可吸收缝线缝合皮肤等。术后2～3个月拔管,随访6～12个月,观察泪道通畅情况及溢泪等症状。结果　治愈29眼,好转2眼,无效1眼;治愈率达90.62%,有效率达96.88%。术后泪小点撕裂2眼（6.25%）,内眦切迹1眼（3.12%）。结论　采用减张修复法修复内眦韧带,可以为泪小管断端创造低张力的愈合环境,使泪小管断端对合整齐,效果显著。     

京尼平苷对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖及血管生成的影响及机制研究

目的 研究京尼平苷(Gen)对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(hRVECs)增殖、迁移及血管形成能力的影响,并探讨其作用机制。方法 采用不同浓度(0、1、5、10、20、40、80 mg·L^-1)Gen干预hRVECs 24 h, CCK-8检测Gen对hRVECs细胞增殖活性的影响。将hRVECs分为对照组,高糖(25 mmol·L^-1)组,Gen低、中、高浓度(5、10、20 mg·L^-1)组,贝伐珠单抗(BEV,250μg·L^-1)组和Gen高浓度+BEV(250μg·L^-1)组。CCK-8检测细胞增殖活性;划痕实验检测细胞迁移能力;体外成管实验检测细胞成管能力;Western blot检测细胞中血管内皮生长因子-A(VEGF-A)、可溶性VEGF受体-1(sFlt-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)等蛋白表达水平。结果 与0 mg·L^-1 Gen比较,1、5、10、20、40、80 mg·L^-1