大豆分离蛋白与染料木素共价交联对蛋白表征和结构的影响

探究大豆分离蛋白和染料木素的共价交联对蛋白表征和结构的影响。制备大豆分离蛋白与不同质量浓度染料木素（0、1.2、1.5、2.0 mg/mL）的共价复合物,通过探究粒径、Zeta电位、浊度、表面疏水性分析蛋白体系的表征变化,并采用紫外分光光度计、荧光分光光度计、傅里叶变换红外光谱仪分析蛋白体系的结构变化。结果表明：大豆分离蛋白与染料木素共价复合后,蛋白的中位径由135.6 μm最低减小至98.0 μm,Zeta电位绝对值由15.0 mV最高增大至21.4 mV,表面疏水性由216.0最低减小至115.5,总巯基含量由31.5 μmol/g最低减小至20.4 μmol/g。与对照组相比,共价复合物的浊度增加,并且实验组中SPI-Ge-1.2组低于SPI-Ge-1.5组和SPI-Ge-2.0组。光谱分析表明染料木素对大豆分离蛋白有猝灭效果,二者共价交联后蛋白质的色氨酸与酪氨酸残基所处的微环境疏水性减少,蛋白质二级结构中α-螺旋含量增多、β-折叠含量减少、β-转角含量增多、无规卷曲含量减少,并且加入1.2 mg/mL的染料木素对大豆分离蛋白的表征特征和结构影响效果更好。本研究结果表明在大豆分离蛋白中加入染料木素后,二者的共价交联能够影响蛋白的表征与结构。     

基于Exo III信号放大的荧光适配体传感器检测Kunitz型大豆胰蛋白酶抑制因子

Kunitz型大豆胰蛋白酶抑制因子（Kunitz Soybean Trypsin Inhibitor，KTI）是一种很关键的抗营养因子，不仅对动物消化系统和生长发育有不良影响，还制约各个行业对大豆的利用率，因此快速有效的检测方法是非常必要的。该研究建立一种基于核酸外切酶III（Exonuclease III，Exo III）和碳纳米颗粒（Carbon Nanoparticles，CNPs）的信号辅助放大荧光传感体系用于KTI的检测。具体体系包括KTI适配体（Aptamer，APT）、互补链（Complementary DNA，cDNA）、信号探针（Signal Probe，SP）、Exo III和CNPs共5个部分。通过可行性分析和CNPs浓度优化试验，测得KTI在100~600 ng/mL范围内呈线性相关，检测限为12.59 ng/mL。以豆浆作为样品，采用加标回收测得回收率为97.42%~102.85%，RSD在0.61%~2.36%之间，该方法可对实际样品中的KTI进行测定。