牡蛎精氨酸激酶过敏原小鼠过敏模型的建立与分析

食物引起的过敏反应发病率正在增加,这对人们的健康构成了极大的威胁。为了评价牡蛎精氨酸激酶(arginine kinase, AK)过敏原的致敏性,利用AK口服灌胃和腹腔注射2种方式使BALB/c小鼠致敏。观察所有BALB/c小鼠的过敏反应、体重及血项指标情况,利用酶联免疫吸附法检测免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)的变化,使用苏木精-伊红及甲苯胺蓝染色观察脏器病变。结果表明,实验组小鼠都产生过敏反应,对照组无明显症状,实验组小鼠体重低于对照组,血液中细胞含量增加。此外,免疫期间实验组IgE含量都比对照组高,染色切片说明实验组小鼠组织出现较严重的损伤,空肠肥大细胞脱颗粒情况严重。该实验获得了牡蛎AK致敏血清,而且成功构建牡蛎AK的BALB/c小鼠过敏模型,为贝类过敏机制和临床免疫治疗提供了有意义的研究基础。     

牡蛎精氨酸激酶稳定性及同源性分析

目的鉴定从牡蛎中提取的天然蛋白精氨酸激酶(arginine kinase,AK),并了解其基本性质及同源性。方法利用硫酸铵盐析、阴离子交换从牡蛎中分离纯化出蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和圆二色(CD)光谱确定相对分子质量和二级结构,并研究其稳定性;用生物信息学软件对牡蛎AK和其他11种甲壳类、软体类动物过敏原的AK氨基酸序列进行比对,分析它们之间的同源性。结果分离纯化得到的相对分子量为40 kDa的天然蛋白为牡蛎AK,AK既不耐热也不耐强酸。牡蛎AK与软体类动物过敏原AK氨基酸序列的同源性较高,与甲壳类动物氨基酸序列的同源性在55%～60%之间。结论从牡蛎中提取得到天然AK,基本了解牡蛎AK的稳定性和同源性,并为牡蛎AK致敏性和致敏机制的全面研究打下基础。     

牡蛎蛋白饮料中潜在过敏原蛋白的原核表达及线性表位鉴定

目的:牡蛎存在致敏性是影响其作为饮料原料发展的主要原因,牡蛎中的肌浆钙结合蛋白(sarcoplasmic calcium-binding protein,SCP)在细胞和肌肉功能中起着至关重要的作用,已被确定为牡蛎中的过敏原。为研究该类过敏原的具体致敏性原理,对其线性表位进行鉴定。方法:以太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)的SCP氨基酸序列为基础,制备并鉴定了分子量为21 kDa的重组SCP(rSCP),并作为后续实验材料,建立了动物致敏模型进行实验。结果:rSCP与大鼠血清具有较强的IgE结合活性,过敏反应能引起大鼠脏器发生病变。最重要的是,五个表位肽首次通过间接竞争酶联免疫吸附实验(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)鉴定为线性免疫显性表位。结论:线性表位研究对于理解人类对牡蛎的超敏反应具有重要意义,可为判断牡蛎蛋白饮料的致敏性奠定理论基础,并有助于提供有效的预防措施和治疗方案,促进该类饮料产品的发展。