注装用改性B炸药渗油性的试验研究

通过中大口径榴弹战斗部注装改性B炸药后产生疵病的原因分析、实弹观察、注装过程物理特性及失效分析,参照TNT标准的渗油性试验方法,对原材料特性、制造工艺、长期储存所经历的任务剖面的综合分析及以相关试验为基础确定试验边界条件,提出改性B炸药的渗油性综合比较试验方案并进行检测,依此提出渗油性试验和工艺控制参数,为科学合理的评估注装弹药使用寿命周期提供试验依据.     

分枝杆菌Mycobacterium Neoaurum NwIB-013-甾酮-Δ1-脱氢酶基因的克隆表达

通过分析已知两种分枝杆菌的3-甾酮-△1-脱氢酶(kstD)碱基保守序列,设计简并引物,以甾醇降解菌株Mycobacterium neoaurum NwIB-01的DNA作模板,得到一个kstD基因片段,通过染色体走读,得到其完整的阅读框.以pUC18为异源表达载体,构建pTQ002表达质粒,在E.coli DH5α中...     

两种组成型启动子PermE*和PSau3A在变铅青链霉菌中的启动效果比较

红霉素抗性启动子PermE*和来源于链霉菌核基因组片段的PSau3A启动子均属于链霉菌组成型强启动子,分别将它们插入大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒pNW-S1的SD序列和转录起始位点之间,构建成两个稳定的组成型表达质粒:pNW-S3和pNW-S4。以磷脂酰丝氨酸合成酶PSS基因为报道基因,以蛋白表达水平评价这两个启动子在变铅青链霉菌TK24中的表达效果。结果表明,在两株组成型表达重组菌中,PSS均得到了高效表达,具有在链霉菌系统中高效表达外源基因的功能,其中PermE*的启动效率略高于PSau3A。     

烟曲霉Aspergillus Fumigatus 3-甾酮-Δ~1-脱氢酶基因的克隆、异源表达和活性鉴定

微生物转化在甾体药物合成中起着不可替代的作用,其中C1,2位脱氢是最为重要的反应类型。以烟曲霉（A.fumigatus）为出发菌株,运用同源序列比对从烟曲霉酸基因簇中钓取出kstDF序列。该基因与玫瑰色热微菌（Ther-momicrobium roseum）DSM 5159的kstD一致性为51%。构建pET28a（＋）-kstDF表达载体,转化大肠杆菌（Escherichiacoli）BL21（λDE3）,获得高表达重组子菌株。经IPTG诱导、SDS-PAGE电泳分析,发现高温（37℃）有利于KstDF蛋白表达,低温（20℃）有利于酶活的保持。该重组菌显示出良好的甾体转化能力,在12 h内完全转化13.3 mg.L-1雄甾-4-烯-3,17-二酮,为构建高效转化3-酮基-4-烯类固醇的基因工程菌奠定了基础。     

两种合成絮凝剂在处理染料废水中的比较

以羧甲基壳聚糖和羧甲基壳聚糖铁(Ⅲ)为絮凝剂处理染料废水,试验研究了其对染料废水的絮凝性能、脱色性能.初步考察了pH、投加量、搅拌时间与沉降时间等影响絮凝效果的因素,Fe3+的引入增加了合成絮凝剂处理染料废水的絮凝作用.在羧甲基壳聚糖处理染料红、黄、兰、黑废水的脱色实验中,脱色率达到76.3％～3.5％,COD去除率为...     

饶阳工区微生物控制油井结蜡技术及其现场应用

简述了微生物清防蜡原理及菌种筛选。所用菌种为已商品化的4种兼性厌氧的烃氧化菌，生存温度0－100℃，生长温度20－60℃，最佳生长温度30－45℃，40℃时在饶阳3口井的原油中培养40h，菌数达到峰值，培养80h后菌数仍保持高值。将一种实验菌与3口井的原油在35－40℃培养48h后，原油45℃粘度降低20％－30％，凝固点降低2－3℃，动、静态防蜡率达93％－97％。介绍了微生物清防蜡的选井原则、工艺程序和方法。10口试验井停止热洗和化学清防蜡，每隔30d通过油套环空将50－150kg菌液稀释后注入井筒泵下，油井功图正常，抽油机电流稳定中有所降低，有5口井产油量略有增加。该技术经济上可行。     

分枝杆菌Mycobacterium Neoaurum NwIB-01 3-甾酮-Δ~1-脱氢酶基因的克隆表达

通过分析已知两种分枝杆菌的3-甾酮-Δ1-脱氢酶（kstD）碱基保守序列,设计简并引物,以甾醇降解菌株Mycobacterium neoaurumNwIB-01的DNA作模板,得到一个kstD基因片段,通过染色体走读,得到其完整的阅读框。以pUC18为异源表达载体,构建pTQ002表达质粒,在E.coliDH5α中对kstD进行了胞内活性表达,测定Mycobacteri-um neoaurumNwIB-01 kstD酶活为（0.37±0.05）U.mL-1,约为原酶活的一半,为构建高效转化生成3-酮基-1,4-二烯类固醇的基因工程菌奠定了基础。     

蛋白组学差异揭示黑曲霉（Aspergillus niger）高产柠檬酸的分子机制

黑曲霉（Aspergillus niger）YX-1217是一株典型的柠檬酸高产菌株,基于二维聚丙烯酰胺凝胶电泳（2-DE）对黑曲霉YX-1217 和退化菌株YX-1217G的胞外分泌蛋白进行比较,同时利用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术比较了两株菌的胞内蛋白差 异,揭示黑曲霉YX-1217高产柠檬酸的分子机制。 结果显示,菌株黑曲霉YX-1217G的胞外蛋白数量和浓度均显著低于菌株黑曲霉 YX-1217（P＜0.05）,通过质谱鉴定了6个黑曲霉YX-1217高表达蛋白;利用iTRAQ技术共鉴定到3 553个蛋白,将差异蛋白按照京都基 因与基因组百科全书（KEGG）代谢数据库进行分类,发现与柠檬酸生物合成相关的酶在菌株黑曲霉YX-1217中的表达量显著高于退 化菌株（P＜0.05）,这些蛋白的高效表达是菌株黑曲霉YX-1217高产柠檬酸的原因之一,为开发柠檬酸或其他有机酸的高产菌株提供 新的思路和观点。     

烟曲霉Aspergillus Fumigatus3-甾酮-Δ1-脱氢酶基因的克隆、异源表达和活性鉴定

微生物转化在甾体药物合成中起着不可替代的作用,其中C1,2位脱氢是最为重要的反应类型.以烟曲霉(A.fumigatus)为出发菌株,运用同源序列比对从烟曲霉酸基因簇中钓取出kstDF序列.该基因与玫瑰色热微菌(Thermomicrobium roseum)DSM5159的kstD一致性为51%.构建pET28a(+)-...     

朱黄青霉α-1,6-葡聚糖酶在毕赤酵母GS115中的异源表达

目的构建毕赤酵母基因工程菌,以实现朱黄青霉α-1,6-葡聚糖酶的异源高效表达。方法人工合成朱黄青霉HI-4的α-1,6-葡聚糖酶基因ZHdex,克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K,电转入毕赤酵母GS115。甲醇诱导目的蛋白表达。结果成功在毕赤酵母GS115中对ZHdex基因进行表达,SDS-PAGE表明重组毕赤酵母在66×103附近有目的蛋白表达,与理论值一致。在摇瓶水平,甲醇诱导培养120 h后,α-1,6-葡聚糖酶的最高酶活达28.79 U/mL,蛋白质浓度为0.56 mg/mL。结论获得一株重组毕赤酵母GS115-ZHdex,其产物具备α-1,6-葡聚糖酶活性,成功地实现朱黄青霉α-1,6-葡聚糖酶的异源高效表达。