榛蘑与菌丝体中蜜环菌素的超声波辅助提取条件优化及其提取物中化合物分析

目的:为分析榛蘑与菌丝体中化合物差异,本研究以东北野生榛蘑子实体和液态菌丝体为研究对象,探究蜜环菌素的最佳提取工艺条件,并对提取物中化合物进行分析。方法:以提取物得率和蜜环菌素含量为指标,采用超声波细胞破碎辅助石油醚进行萃取,通过单因素实验和正交试验对提取工艺参数进行优化;采用超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）技术,对液态菌丝体和榛蘑子实体中化合物进行分析和鉴定。结果:确定最佳提取工艺条件为料液比1:20 g/mL,超声波功率300 W,超声时间20 min,溶剂回流时间50 min,在该条件下液态菌丝体提取物得率为26.8%,蜜环菌素含量为0.74 mg/g;液态菌丝体和榛蘑子实体中化合物分别为305和592个。解析出16种蜜环菌素类和5种疑似蜜环菌素碎片物质,其中菌丝体中含有15种蜜环菌素和3种碎片,总含量分别为2.551和0.588 μg/mL;子实体中含有7种蜜环菌素和4种碎片,总含量分别为2.413和2.124 μg/mL。两者同有组分有6种蜜环菌素和2种碎片;液态菌丝体独有9种蜜环菌素和1种碎片为:10-dehydroxymelleoloede、蜜环菌辛素、Arnamiol、蜜环菌壬素、A52a、4-dehydroxyarmillarin、蜜环菌丙素、（4R,5S,7R,9S,13R）-2’,5-epoxy-4-dehydroxyarmillarin、4’-demethoxyarmillaribin以及碎片C;榛蘑子实体独有1种蜜环菌素和2种碎片为:Melledonal以及碎片D和E。结论:液态菌丝体蜜环菌素类化合物多于子实体中,为开发辅助功能食品及药物提供参考。     

猴头菌子实体与液态发酵菌丝体活性成分差异及其在改善胃部疾病中的应用进展

猴头菌是传统的食药两用菌,具有猴头菌多糖、猴头菌素、猴头菌酮、麦角甾醇等多种活性成分,对胃炎、胃溃疡、胃癌等胃部疾病具有有益调节作用。猴头菌有子实体和菌丝体两种形态,菌丝体又分为固态发酵菌丝体与液态发酵菌丝体两种形式。本文主要对比阐述了猴头菌子实体与液态发酵菌丝体活性成分差异以及它们在改善胃部疾病中相关研究成果,以期为猴头菌液态发酵菌丝体规模化、工业化、自动化生产,以及功能食品和食用菌基天然药物的开发提供依据和参考。     

野生牛肝菌内生真菌分离鉴定及其生物学特性

采用组织分离法从黄皮疣柄牛肝菌、小美牛肝菌、双色牛肝菌的子实体中,分离纯化获得4株内生真菌,经菌落、菌丝、孢子形态学观察及rDNA ITS分子生物学鉴定,结果显示:菌株LCTG-12为盖姆斯木霉(Trichoderma gamsii)、LCCK-6为克鲁伊假丝酵母(Candida kruisii)、BSHC-18为黄瘤孢菌(Hypomyces chrysospermus)、BBFO-10为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysprum)。对4株内生真菌生物学特性进行研究,其中盖姆斯木霉菌丝生长速度较快,在CPDA培养基上,25 ℃培养5 d菌丝长满平板;液态培养时,该菌株在25 ℃、摇床转速160 r/min、pH5.5、8 d,可获得菌丝干基生物量4.13 g/L。平板对峙实验结果:盖姆斯木霉LCTG-12对黄瘤孢菌BSHC-18和尖孢镰刀菌BBFO-10菌丝生长均有拮抗作用,并且,黄瘤孢菌BSHC-18和尖孢镰刀菌BBFO-10两者之间也具有拮抗作用,表明牛肝菌内生真菌中盖姆斯木霉对腐败菌具有拮抗作用,可为生物防腐提供优良的菌株。     

盖姆斯木霉分离鉴定及菌丝体发酵条件的研究

在对野生牛肝菌分离母种菌丝的过程中获得1株内生真菌（Trg-12）,经对其菌落、菌丝、孢子形态显微镜观察及rDNA内转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）序列分子生物学鉴定,明确其为盖姆斯木霉（Trichoderma gamsii）。进一步对菌株在综合马铃薯液态培养基中的菌丝量进行研究,采用L9（34）正交试验设计,接种量5%,发酵时间8 d时,对装液量、摇床转速、初始pH值及培养温度进行优化,结果显示：250 mL三角瓶装液量100 mL,摇床转速160 r/min,初始pH6,培养温度29℃,菌丝量为4.43 g/L。用平板对峙培养法测定该菌株与牛肝菌常见腐败菌尖孢镰刀菌和黄瘤孢菌的抑制率分别为（53.7±1.9）%和（74.7±1.6）%,表明牛肝菌内生真菌盖姆斯木霉Trg-12对腐败菌具有拮抗作用,可为生物防治提供优良的菌株。     

野生牛肝菌纯种分离及液态培养促三萜类物质合成的诱导剂优化研究

目的:为获得牛肝菌人工纯菌株,提高液态培养菌丝及产三萜类物质的能力。方法:以云南鲜野生牛肝菌子实体为研究对象,采用组织分离法进行母体纯菌株分离并鉴定;以金属离子Ca²⁺、亚油酸及香菇水提物作为诱导剂,研究其对液态菌丝体中三萜类物质含量的影响。结果:经多次分离纯化获得1株纯菌种NG-3,经rDNA-ITS分子生物学鉴定,NG-3为暗褐网柄牛肝菌(Phlebopus portentosus);对NG-3菌丝体进行SEM观察,在培养8～16 d时,出现具有结实能力的锁状联合形态菌丝。对3种诱导剂进行了响应面法优化,得到的结果为Ca²⁺浓度12 mmol/L、亚油酸量4%、香菇水提物浓度150 mg/100 mL,此时三萜含量为6.77 mg/g,比未加诱导剂三萜含量提高了76.00%。结论:3种诱导剂复合使用能够促进三萜类物质合成,提高其含量,为解决野生资源不足、实现牛肝菌功能产品产业化提供技术参数。