莱茵衣藻IFT25的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备

IFT25是维持纤毛运动和感知所必须元件纤毛内运输蛋白IFT复合物B中的重要组分之一,探索IFT25尤其在模式生物莱茵衣藻中的作用机制具有重要作用。作者采用经济和简单的方法,制备莱茵衣藻IFT25的兔源多克隆抗体。将ift25分别连接到pMAL-c2X-和pET-28a(+)-载体上,转入大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导大量表达,并经亲和纯化后蛋白质纯度超过90%。通过颈背部皮下多次免疫8周龄大的新西兰大白兔,制备多克隆抗体,取第五次免疫后血清用ELISA测定效价超过128 000。抗血清依次经过Protein A和硝酸纤维素膜纯化后,用Western blotting检测抗体特异性,结果表明制备的抗体可以特异性识别莱茵衣藻中的IFT25,为IFT25作用机制的阐明和纤毛相关疾病的诊断提供了重要理论和方法支持。     

两种采收期香菇营养品质和抗氧化能力比较

采收期是影响香菇营养品质、耐贮品质和抗氧化品质的主要因素之一。以两个商业采收期(未开伞成熟度与开伞成熟度)的香菇为试验材料,对比两种香菇的单菇重、菌盖直径和组织部位比重,测定组织水分、可溶性固形物、可溶性总糖、维生素C、可溶性蛋白质和8种必需矿物质元素含量,以及15℃贮藏过程中可溶性总糖和可溶性蛋白质含量的变化,同时测定香菇子实体清除超氧阴离子、羟自由基及DPPH自由基的能力。结果表明,与开伞成熟度香菇相比,未开伞成熟度香菇具有较高的单菇重和较强的清除DPPH自由基的能力,且可溶性固形物、可溶性总糖和7种必需矿物质元素(除Se外)含量较高,体现出较高的营养价值和抗氧化能力。此外,在贮藏期间未开伞成熟度香菇的可溶性总糖和可溶性蛋白质含量始终高于开伞成熟度香菇,表现出更好地耐贮藏性。建议商业采收期多在未开伞时期采收。     

抗菌肽应用于食品中的研究现状及面临的挑战

食品安全问题一直为人们所关注,其中微生物污染是导致食品腐败变质的主要原因。抗菌肽来源广泛,抑菌谱广,杀菌速度快,可以较好地控制食品中腐败微生物的滋生;对pH值、蛋白酶和热处理有较好的稳定性,在成分复杂的食品体系中有一定的适用性;由于其抑菌机理特殊,不易产生耐药性;部分具有抗氧化和提高免疫力等多种功能,对人体具有一定的保健作用。抗菌肽的以上特点满足了人们对新型防腐保鲜剂的多种需求,有望在食品工业上发挥重大作用。因此,在抗菌肽的生物学功能以及抗菌肽保鲜机理简单介绍的基础上,对抗菌肽应用于不同食品中的研究现况进行详细综述,最后对抗菌肽在食品中应用目前存在的问题和发展方向提供了思考。     

ε-聚赖氨酸在果蔬采后贮藏保鲜中的应用研究进展

ε-聚赖氨酸（ε-polylysine,ε-PL）是一种天然、安全性高的阳离子多肽,具有抑菌谱广、水溶性好、热稳定性好等诸多的优点,中国、日本、韩国等国已经批准其作为安全的食品防腐剂。近来,越来越多研究发现,ε-PL能够显著抑制果蔬中多种常见病原菌,已经被广泛应用于果蔬的防腐保鲜研究。尤其ε-PL与其它抗菌剂、保鲜剂、物理保鲜方法进行联合使用后,能有效协同增强其保鲜效果。该文根据近年来国内外的研究,就ε-PL对果蔬中常见病原菌的抑制作用,以及其单独或与其它保鲜方法联合应用于采后果蔬保鲜中的现状进行了综述,并讨论了其未来应用研究的前景,以期为ε-PL在果蔬采后保鲜中的深入研究及应用提供参考。     

不同复合涂膜在采后双孢蘑菇贮藏保鲜中的应用

双孢蘑菇（Agaricus bisporus）因味道鲜美且营养价值高而受到大众喜爱,但易发生褐变、开伞和子实体软化等现象,失去商品价值,因此开发合适的双孢蘑菇保鲜方法显得尤为重要。该文以魔芋胶+卡拉胶、魔芋胶+卡拉胶+乳酸链球菌素（nisin）+ε-聚赖氨酸（ε-polylysine,ε-PL）、蒸馏水处理,分别作为复合涂膜组、抑菌剂复合涂膜组和对照组,研究不同处理对双孢蘑菇采后贮藏品质及抗氧化能力的影响。结果显示,抑菌剂复合涂膜组蘑菇在贮藏6 d内均没有腐烂,整体贮藏品质优于其它两组,开伞率、呼吸速率、失重率、多酚氧化酶活性、硬度下降速率及可溶性蛋白下降程度均低于其它两组。此外,抑菌剂复合涂膜处理明显增强双孢蘑菇体内抗氧化相关酶的活性,抑制丙二醛的累积。以上结果表明,抑菌剂复合涂膜处理有利于采后双孢蘑菇的品质保持。     

采收期对香菇耐贮特性及抗氧化酶系统的影响

以两种商业采收期(未开伞成熟度与开伞成熟度)的香菇(Lentinus edodes)为实验材料,研究其在15℃贮藏过程中开伞度、质量损失率、呼吸强度、水分含量、抗坏血酸含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性的变化。整个贮藏中,开伞成熟度香菇伞盖直径变化率、呼吸速率分别是未开伞成熟度香菇的1.5～2.5、1.2～1.8 倍;贮藏至第7 天时,水分含量仅为未开伞成熟度香菇的0.5 倍,抗坏血酸含量下降量比未开伞成熟度香菇高出21.8%;并且贮藏期间,未开伞成熟度香菇的SOD、POD 及CAT 活性始终高于开伞成熟度香菇(P ＜ 0.05)。结果表明,与开伞成成熟度香菇相比,未开伞成熟度香菇具有较好的耐贮性品质及较高的抗氧化能力。     

双孢蘑菇中一种4R型MYB转录因子的基因克隆和生物信息学分析

MYB转录因子广泛存在于真核生物中,在植物的生长发育、逆境胁迫等过程中发挥重要作用。与植物相比,对食用菌中MYB转录因子的研究有限。为探究MYB转录因子在食用菌中的生物学功能,对前期转录组发现的一个编码双孢蘑菇（Agaricus bisporus）MYB转录因子的基因进行克隆和生物信息学分析。结果表明,该基因编码区长1 209 bp,翻译402个氨基酸;编码的蛋白分子量为45.95 kDa,等电点9.17,是一种不存在跨膜结构、不含信号肽的亲水性蛋白,具有4个高度保守的SANT结构域,属于4R型MYB转录因子,与白环蘑（Leucoagaricus）中的4RMYB转录因子亲缘关系最近;二级结构预测显示以无规则卷曲和α-螺旋结构为主;亚细胞定位分析显示该转录因子位于细胞核中;此外启动子序列分析表明,该基因启动子区域含有多个与生物抗逆应答、激素响应等相关的顺式作用元件。     

双孢菇采后感官品质变化的因素分析与保鲜技术研究进展

感官品质是判断双孢菇商品价值的首要因素。本文综合分析了双孢菇采后贮藏中4 种典型感官品质变化(失水、褐变、开伞及质地变化)的原因及其影响因素,总结了双孢菇现有的保鲜技术,并提出了当前保鲜技术存在的问题与解决方向。     

双孢蘑菇中AbbHLH的表达、纯化及多克隆抗体制备

碱性螺旋-环-螺旋（basic helix-loop-helix,bHLH）转录因子在真核生物中广泛存在,是数量较多的转录因子家族之一。该文首次克隆并鉴定双孢蘑菇中的一个AbbHLH（Agaricus bisporus basic helix-loop-helix）转录因子,建立原核表达载体pET-28a（+）-AbbHLH并将其转至E.coli BL21（DE3）感受态细胞中诱导表达,得到主要以包涵体形式存在的6×His-AbbHLH重组蛋白,经纯化与复性后得到纯度超过80%的抗原蛋白。用制备的抗原蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接酶联免疫吸附测定法测定结果表明抗体血清的效价可达102 400。将抗体血清依次经Protein A及CNBr亲和纯化后,用Western Blotting检测抗体特异性,结果表明该抗体能够特异性识别双孢蘑菇中的AbbHLH蛋白。     

基于同位素标记的相对和绝对定量技术筛选双孢蘑菇采后开伞相关差异蛋白

目的 筛选双孢蘑菇采后开伞相关差异蛋白,探究双孢蘑菇采后开伞的分子机制。方法 选用贮藏前(0d)和刚破膜开伞(6d)的双孢蘑菇子实体为实验材料,通过同位素标记的相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)蛋白质组学技术筛选与双孢蘑菇采后破膜开伞相关的差异表达蛋白,并通过GO分析、KEGG通路富集分析等生物信息学手段对差异表达蛋白进行分析鉴定。结果 贮藏0 d和6 d的两组双孢蘑菇样品中共鉴定到差异表达蛋白808个,包括285个上调蛋白和523个下调蛋白。与基因组数据库比对发现,筛选到的差异蛋白仅有38个被注释,且注释蛋白主要与精氨酸代谢、核酸代谢、糖代谢和氧化反应等生物学过程密切相关。GO功能和KEGG通路富集显示开伞相关差异蛋白主要富集在质膜细胞结构中,参与氰基氨基酸代谢、苯丙烷生物合成、糖代谢、精氨酸与脯氨酸代谢等途径。结论 差异蛋白涉及的信号途径和代谢过程,特别是精氨酸代谢过程,在双孢蘑菇采后开伞过程发挥重要的调控作用。