产磷脂酶D工程菌构建及发酵条件优化

该研究构建产磷脂酶D（phospholipase D,PLD）的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）工程菌,比较4个单启动子（PHpaII、Pylb(F4)、P2069m、P43）对PLD酶活的影响,摇瓶发酵表明启动子PHpaII酶活最高,为0.32 U/mL。进一步以此工程菌作为发酵菌株,通过单因素试验和响应面试验,对该菌株产PLD的发酵条件进行优化。结果表明最佳产酶条件为接种量2.5 mL/dL、发酵温度37℃、硫酸铵质量浓度0.8 g/dL、甘油质量浓度1.94 g/dL、酵母粉质量浓度1.93 g/dL,在此发酵条件下发酵12.5 h,PLD的酶活达到0.85 U/mL,比出发菌株提高62.5%。同时,以环戊基甲醚作为有机相,柠檬酸-柠檬酸钠为水相,利用双相反应体系合成磷脂酰葡萄糖苷（phosphatidyl-glucose,PtdGlc）、磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine,PS）和磷脂酰甘油（phosphatidylglycerol,PG）,转化率分别为94.8%、94.0%和87.1%。结果表明,该研究构建的枯草芽孢杆菌工程菌经过发酵条件优化后,制备的PLD具有较好的转酯活性,显示出良好的应用潜力。     

枯草芽孢杆菌固态发酵虾头制剂对小鼠生长与肠道菌群影响研究

该研究利用枯草芽孢杆菌对虾头进行发酵转化,探究枯草芽孢杆菌固态发酵虾头制剂对小鼠生长指标和肠道菌群的影响。将小鼠分为维持饲料对照组（NC）、维持饲料+0.1%未发酵虾头对照组（MC）和维持饲料+0.1%发酵虾头制剂干预组（MH）,进行8周饲喂实验。实验结果显示,未发酵与发酵虾头均具有诱食性,MC组与NC组相比体脂率增加,而MH组较NC组体脂率则显著降低62.9%,同时MH组脾脏指数也显著提高35.7%;与NC组相比,MC、MH组肠道菌群中罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）、约氏乳杆菌（Lactobacillus johnsonii）等有益微生物相对丰度增加,且MH组的益生效果更好。结果分析表明,虾头具有诱食性,直接饲喂未发酵虾头会增加小鼠的体脂率,但饲喂枯草芽孢杆菌发酵虾头制剂则可显著降低小鼠的体脂率,同时维持日粮中添加0.1%发酵虾头制剂具有增加小鼠肠道内乳酸菌等有益微生物相对丰度和提高小鼠免疫力的效果。     

粘质沙雷氏菌利用蔗糖和柠檬酸铵生产2，3-丁二醇的研究

研究了几种无机氮源对粘质沙雷氏菌发酵生物量和产物2,3-丁二醇形成的影响,在确定柠檬酸铵为无机氮源的基础上,利用响应面法(RSM)对柠檬酸铵和硫酸锰的浓度进行了优化,得出了最佳浓度,并以此最优成分进行了摇瓶发酵和分批补料发酵.在摇瓶发酵中,110 g·L-1的蔗糖最终被转化成44 g·L-1的2,3-丁二醇,转化率为0.4 g·g-1,产率为1.13 g·L-1·h-1;在分批补料发酵中,共有166 g·L-1的蔗糖被消耗,2,3-丁二醇的最高浓度为81.2 g·L-1,乙偶姻的浓度为7.7 g·L-1,2,3-丁二醇转化率达到0.489 g·g-1,产率达到1.7 g·L-1·h-1.     

固态枯草芽孢杆菌菌剂的制备工艺研究

本研究利用实验室筛选的高活性益生菌株Bacillus subtilis OKF-004进行液态发酵培养,通过单因素实验和正交试验探究了最适形成芽孢的液态发酵培养基组分与培养条件,并将所得菌液通过鼓风干燥制备成菌剂,优化确定了制备菌剂的工艺。以包含2.5%玉米淀粉、3%豆粕、2%葡萄糖的培养基在初始pH为6.5、装液量30 mL(250 mL锥形瓶中)、温度32℃、接种量7%的条件下培养时,枯草芽孢杆菌最适合形成芽孢,芽孢数最高可达到1.1×1010 CFU/mL;离心后将菌泥与浓度5%的保护剂甘油以1:7 g/mL的比例复溶制成菌悬液,以虾头粉末作为烘干载体,将载体与菌悬液以2:3 g/mL的比例混合后,于50℃鼓风烘干6 h,所得菌剂存活率最高,可达140.91%。本文研究的液态发酵培养、鼓风干燥的固态微生物菌剂制备方法具有过程简便、成本低廉、节省能源的特点,适合工业化生产。     

油套管特殊螺纹接头抗粘扣自润滑涂层性能研究

以API标准P110钢级材质为基体材料,采用喷涂方法制备自润滑涂层。自润滑涂层以聚酰胺酰亚胺-环氧树脂为黏结剂,添加固体润滑剂二硫化钼和聚四氟乙烯。利用涂层附着力测定仪、摩擦磨损试验机,研究二硫化钼和聚四氟乙烯含量对涂层附着力、摩擦学特性的影响。试验结果表明:当聚酰胺酰亚胺-环氧树脂中改性二硫化钼的含量为30%(质量分数)、聚四氟乙烯含量为7%(质量分数)时,固化温度为280～300℃,保温时间为10～15 min,自润滑涂层具有良好的附着力、摩擦磨损性能,可满足油套管特殊螺纹接头的抗粘扣性能。     

壳聚糖酶的基因克隆表达及酶学性质研究

作者从NCBI数据库中挖掘到来源于Butyrivibrio sp. MC2013的壳聚糖酶基因,命名为BUT,该壳聚糖酶基因大小为903 bp,编码301个氨基酸。通过NCBI数据库和进化树比对发现,该壳聚糖酶（BUT）属糖苷水解酶46家族（后简称GH-46）,与其它壳聚糖酶相似度为59%,是一种新型的壳聚糖酶。序列经密码子优化后进行全基因序列合成,与表达载体pET21a（+）连接构建重组质粒pET-21a-BUT,转入大肠杆菌E. coli BL21（DE3）表达宿主,进行诱导表达。所得重组壳聚糖酶通过Ni-NTA亲和层析进行纯化,SDS-PAGE确定其蛋白分子量为35 kDa,DNS法测定其酶活为146.0 U/mg。对BUT酶的酶学性质进行探究,结果表明BUT酶最适温度和pH分别为45 ℃、8.0,在中性偏碱性条件下稳定性较强。Mn2+对其酶活力具有促进作用,SDS、Fe3+、Cu2+、Zn2+等的抑制作用极强。通过TLC对其水解产物分析发现,BUT水解壳聚糖的产物是壳二糖、壳三糖和壳四糖。     

油套管双头螺纹接头开发试验研究

介绍了一种油套管双头螺纹接头的开发过程.双头螺纹的上扣速度是常规螺纹接头的两倍以上,可以大幅提高下井效率.结合具体产品规格对双头螺纹接头进行了有限元分析、加工工艺研究以及实物性能试验.分析结果表明,双头螺纹接头应力分布均匀,上扣速度快,接头性能满足使用要求,证明了双头螺纹形式的合理性.     

H(N,M,n)分布期望值的新求法

建立了超几何分布的模型．在对随机变量进行分解的基础上,利用数学期望的性质给出了求超几何分布期望值的新方法．     

高盐稀态牡蛎酿造酱油的开发与品质分析

以豆粕、小麦及牡蛎酶解液为原料,采用高盐稀态发酵工艺,研发具有甜香风味的功能性牡蛎酱油,并将其与对照酱油的感官品质、氨基酸含量及风味成分进行了分析比较。结果表明,在牡蛎酶解液添加量为25%时,牡蛎酱油的氨基态氮含量达1.2 g/100 mL。牡蛎酱油较对照酱油在海鲜风味方面更为突出,同时在鲜度、香气方面以及整体评价也更佳。牡蛎酱油和对照酱油均鉴定出6种鲜味氨基酸,但牡蛎酱油的鲜味氨基酸含量（41.8%）高于对照酱油（40.5%）;牡蛎酱油中牛磺酸含量高达36.7 mg/100 g,约为对照酱油的13.6倍。牡蛎酱油的挥发性风味物质中醇类、呋喃类相对含量较高,分别为59.5%、20.7%,从而赋予其香浓而独特的风味。