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端粒酶是由端粒酶反转录酶和端粒酶RNA构成,端粒酶RNA中含有端粒合成所需的模板序列.现仅获得了拟南芥的端粒酶RNA序列.为了建立快速有效的富集植物端粒酶的方法并克隆水稻的端粒酶RNA序列,研究中使用不同浓度的PEG6000选择性的沉淀端粒酶萃取液中的杂蛋白.结果表明当PEG6000浓度为4%时,端粒酶活力最高,并可以有效降低核糖体28S rRNA和18S rRNA的干扰.从端粒酶蛋白液中提取RNA,并在其3′端连接接头,在模板区设计上游引物,PCR扩增获得一条292 bp的未知片段,其中含有端粒模板序列5'-AAACCCTAA-3′.将该片段及拟南芥端粒酶RNA的转录调控区进行序列比对分析发现,两者具有类似的转录调控元件.因此,初步判定292bp的目的片段为水稻端粒酶RNA的模板下游序列. 相似文献
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端粒是真核生物线性染色体末端的特殊结构,一定长度的端粒在维持真核生物遗传信息完整性和染色体结构稳定性中起重要作用.建立一种简单快捷定量测定水稻单个端粒绝对长度的方法对研究水稻各个染色体端粒具有积极的意义.研究将特殊接头连接到水稻染色体端粒的G-overhang末端,并利用近端粒区域的特定引物以及下游接头引物,通过PCR技术,获得所需鉴定的端粒,结合DNA凝胶电泳成像分析系统,定量检测水稻单个端粒的长度.结果显示本方法可以通过少量水稻基因组DNA有效测定单个端的粒长度. 相似文献