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目的建立重组人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)疫苗原液中昆虫细胞宿主DNA残留的地高辛探针杂交检测方法。方法抽提昆虫细胞sf9基因组DNA,经分子筛纯化后作为阳性对照品;分别以1 000~5 000 bp和100~1 000 bp的基因组DNA超声随机小片段为模板,制备地高辛探针,与阳性对照进行杂交试验。同时验证方法的检测范围、灵敏度和特异性,并采用该方法对3批重组EV71 VLPs疫苗原液中宿主DNA残留量进行测定。结果纯化后DNA样品浓度为47. 5 ng/μL,A260/A280值为1. 86,可作为阳性对照。以100~1 000 bp DNA超声随机小片段作为模板,探针标记效率更高,杂交显色更清晰。该法检测范围为10 pg^10 ng,灵敏度达1 pg,特异性强。3批重组EV71 VLPs疫苗原液中每人份剂量的宿主细胞DNA残留均<50 pg。结论本实验建立的方法特异性强,灵敏度高,可用于重组EV71 VLPs疫苗制备过程中的原液检定及质量控制。 相似文献
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目的获得高效、稳定表达含有HIV-1主要结构蛋白gag、pol和env的病毒样颗粒的293细胞系。方法选择合适的真核细胞表达质粒与带有抗性基因的载体,共转染293真核细胞,用含有抗性的培养基筛选出稳定表达细胞株。结果HIV-1的gag、pol和env蛋白均在293细胞中获得了表达,且不同代次的293细胞中蛋白表达情况无明显差异。结论成功筛选了稳定表达HIV-1病毒样颗粒的293细胞系,为进一步开发艾滋病疫苗奠定了基础。 相似文献
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ＧＷＸ１－５００－１中频无心感应熔炼炉液压系统谷铁军１前言ＧＷＸ１－５００－１中频无心感应熔炼炉容量为１ｔ，功率５００ｋＷ，频率１ｋＨｚ，变频机组电源，其传动部分采用液压系统。为满足该炉的使用特点及炼钢工艺要求，该液压系统具有变速控制浇钢，炉盖升降与... 相似文献
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一、概述该机由清洗和夫刺两部分组成，使用在单联或多联换向阀阀体滑阀孔精加工后道工序。要求在不破坏滑阀孔几何精度和粗糙度的前提下，将阀孔沉割槽边线微小金属毛利及槽内研磨粉除掉。这是多年来未彻底解决的工艺难题。机械部基础件局1984年组织全国液压件行业厂搞治脏治漏（内腹腔、外渗漏）攻关，在锦州液压件总厂召开了现场会。为解决上述难题，设计研制了该专机，在现场会上衣机得到全国同行业厂专家们的一致肯定并建议推广。二、结构特点及原理1、清洗机简述清洗机对精铰、研磨或征磨后的滑阀孔是在去刺的同时进行清洗的，这就将… 相似文献
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目的建立快速测定肺炎链球菌表面抗原PsaA-PspA融合蛋白含量的双抗夹心ELISA方法,并进行验证。方法制备PsaA-PspA抗原,确定PsaA单抗和PsaA-PspA兔多抗的最佳工作浓度,建立双抗夹心ELISA方法。对方法的抗原特异性、精密性和准确性进行验证,并分析变性抗原对测定的影响。结果单抗和兔多抗最佳稀释倍数为1∶500和1∶10 000。建立的双抗夹心ELISA法检测PsaA-PspA抗原的浓度范围为70~560 ng/m L,R~2为0.993 8;该方法不适用于其他抗原的测定,但可用于鉴定抗原是否变性;该方法检测不同批次PsaA-PspA抗原的批内平均变异系数(CV)为4.9%,批间平均CV为19%,平均回收率为88.98%。结论建立的双抗夹心ELISA方法特异性、精密性和准确性良好,可用于PsaA-PspA融合蛋白浓度的检测,且可检测抗原是否变性。 相似文献
