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目的制备绿色荧光蛋白(GFP)兔多克隆抗体。方法选取GFP免疫原性较强、保守性低的98~117位氨基酸序列,利用F-moc法固相合成该段序列,经高效液相色谱纯化,MALDI-TOF-MS鉴定合成多肽的分子量后,与匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联,免疫新西兰雄兔,制备抗血清,并进行Western blot鉴定。结果合成的GFP多肽经MALDI-TOF-MS分析,分子量为2497.9,与理论值相符。1∶200稀释的抗血清与转染pEGFP-N1质粒的HeLa细胞表达的增强型GFP在相对分子质量27000处有清晰的杂交信号出现。结论已成功制备了特异性较好的GFP兔多克隆抗体。 相似文献
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