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目的分析肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)在病毒增殖的动力学过程中不同时间点的病毒样品所具有的两种结构形式及免疫学特性,为疫苗的研发及质控提供参考。方法利用Opti Prep密度梯度离心获得EV71两种结构形式,电镜扫描观察两种结构形式的颗粒形态;采用病毒微量滴定法测定病毒两种结构形式的感染性滴度;EV71抗原生物素-亲和素酶联免疫(BA-ELISA)方法测定病毒两种结构形式的抗原含量;QRT-PCR法测定两种结构形式的病毒RNA含量;SDS-PAGE及Western blot鉴定病毒两种结构形式。将分离得到的空壳及实心病毒颗粒成分用甲醛灭活后,与Al(OH)3佐剂混合,对小鼠进行皮下多点注射,分别于初免28 d及二免7、14 d,经小鼠尾静脉采血,分离血清,采用微量中和试验法检测抗EV71中和抗体;将二免14 d后的雄、雌鼠合笼,生产后24 h内,用EV71FY-23对乳鼠进行颅内注射,10 d内观察乳鼠存活率。结果经Opti Prep密度梯度离心后,可获得两条沉降系数不同的病毒条带,位于上层的病毒结构成份基本以空心衣壳颗粒形式存在;下层病毒结构成分在感染前期主要为以实心颗粒形式存在,感染后期则以空壳和实心颗粒同时存在,两种结构形式均能被抗EV71特异血清识别。在病毒感染过程中,下层毒粒感染性滴度均比上层毒粒高2~3个log值;两种结构形式的抗原滴度均呈增加的趋势,但下层毒粒抗原滴度增加更为明显;病毒两种结构形式两层的RNA含量不同,下层毒粒中VP0均已裂解形成VP2和VP4,而上层毒粒中以VP0为主要成分。初免后28 d及二免后7、14 d,两种结构形式的EV71均诱导小鼠抗体阳转,但上层毒粒诱导的中和抗体效价及增长速度均明显低于下层毒粒(P均0.001)。病毒两种结构形式免疫小鼠产生的乳鼠免疫保护效率均为100%。结论 EV71的两种结构形式虽然具有差异,但作为病毒疫苗抗原用于免疫时,均具有免疫学意义。 相似文献
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1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染可导致口唇疱疹、生殖器疱疹、脑炎等症状,并可长期潜伏于神经系统。目前尚无干预手段能有效预防疱疹病毒原发感染以及控制疱疹病毒潜伏感染和复发性感染。疫苗依然被认为是控制病毒感染的理想方式。本文就HSV-1疫苗的研究进展作一综述。 相似文献
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接种两针甲肝减毒活疫苗的免疫效果 总被引:1,自引:0,他引:1
为进一步提高甲肝减毒活疫苗的免疫效果。我们进行了两针接种的效果观察。选某县农村小学的学生52人,年龄在6~12岁,均未接种甲肝减毒活疫苗或甲肝灭活疫苗,且HAV抗体阴性。采用医科院医学生物学研究所生产的甲肝减毒活疫苗(滴度控制在5.5LogCCID50/ml),按0、3个月免疫程序,每人在三角肌皮下接种两针,每针1ml。第2针接种7天HAV-IgG抗体阳转率为100%,抗体效价主要集中在1:8~1:32之间,占76.92%,GMT为1:14。另随机抽取免前HAV阳性儿童6人,经2针接种后,其中5人抗体增长2倍以上。经两外接种后,局部反应轻微,无发… 相似文献
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EV71抗原BA-ELISA检测方法的建立及应用 总被引:1,自引:1,他引:0
目的建立EV71抗原生物素-亲和素酶联免疫(BA-ELISA)检测方法,并进行验证及初步应用。方法以抗EV71抗体为包被抗体,利用生物素-亲和素系统建立双抗体夹心ELISA法,并对其灵敏度、特异性、准确性及精密性进行验证。采用该方法检测组织培养及临床样品中EV71抗原的含量。结果所建立的BA-ELISA法在EV71蛋白含量625~156.25ng/ml之间线性关系最佳,R2达0.9976,灵敏度为78.125~156.25ng;与包括CoxA16在内的42种肠道病毒及相关病毒均无交叉反应;检测10份EV71阳性样品和10份阴性样品,结果符合率均为100%;检测EV71原液和高、中浓度样品的变异系数分别为3.09%、6.69%和6.43%;可检出约103~104CCID50的活病毒及手足口病患者的大便悬液和部分咽拭子悬液中的病毒。结论用生物素标记EV71抗体与亲和素系统建立的双抗体夹心ELISA法具有较高的特异性、灵敏度、准确性和精密性,为临床检验及抗原分析提供了参考。 相似文献
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目的比较单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus typeⅠ,HSV-Ⅰ)基因突变株M3株与水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)减毒活疫苗Oka株感染BALB/c小鼠的生物学特性。方法用不同剂量(103、104、105 PFU/只)的HSV-ⅠM3株及疫苗剂量的VZV Oka株以不同方式(腹腔、肌肉、鼻腔、足垫)感染小鼠后,对小鼠的急性临床反应、体重变化、病毒增殖、组织病理损伤及病毒重激活等生物学特性进行比较。结果 HSV-ⅠM3及VZV Oka组小鼠均未见弓背、倒毛、单侧眼失明等急性临床症状,体重均呈逐渐上升趋势;器官组织中病毒拷贝数均处于较低水平,且两组差异无统计学意义(P> 0. 05);小鼠脑组织出现轻微局部炎症细胞浸润、出血、胶质小结或无异常,两组差异较小,脊髓组织均未出现明显异常;神经组织与Vero细胞共培养,均未观察到细胞病变(CPE)。结论 HSV-ⅠM3株与VZV Oka株感染小鼠后的生物学特征无明显差异。 相似文献
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肠道病毒68型(enterovirus D68,EV-D68)于1962年首次分离自患有肺炎和支气管炎的住院儿童。EV-D68属于病毒科,肠道病毒属,肠道病毒D组。自被发现后有关EV-D68的报道甚少,至2005年后才开始大规模的暴发。北美于2014年暴发了有史以来最大规模的一次EV-D68流行。EV-D68感染儿童可引起咳嗽、喘息和血氧不足等急性呼吸道疾病。最近暴发的急性驰缓性麻痹也被怀疑与EV-D68感染相关。本文对EV-D68的生物学特征、流行病学、致病机制和临床特征等研究进展作一综述。 相似文献
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应用核酸探针检测甲型肝炎疫苗的滴度 总被引:1,自引:0,他引:1
应用甲型肝炎病毒(HAV)cDNA 片段作为探针,分别以同位素、异羟基洋地黄毒苷配基和生物素标记该探针,对甲肝疫苗病毒培养过程中不同时期、不同接种量的病毒浓度进行了滴定,并以 ELISA 作对照。结果表明,各种标记探针检测的灵敏度均高于 ELISA。而不同标记的探针检测的结果无显著差异。 相似文献
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利用HCV多表位复合抗原制备高效价抗体 总被引:2,自引:1,他引:2
目的利用HCV多表位复合抗原免疫家兔制备高效价抗HCV多克隆抗体,为改进丙型肝炎病毒抗原的诊断试剂盒提供必要条件。方法HCV多表位复合抗原与完全弗氏佐剂混合免疫家兔,获得高效价抗血清,经硫酸铵沉淀及PrintA/G亲和层析纯化。结果已获得效价大于1∶16000的抗HCV多克隆抗血清,经纯化后达电泳纯。该抗体能与HCVNS3、NS5及C抗原特异性结合。结论HCV多表位复合抗原具有较好的免疫原性,可用于改进HCV病毒抗原诊断试剂。 相似文献
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蛋白对HCV/HBV DNA疫苗的免疫增强作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨蛋白对HCV/HBV DNA疫苗的免疫增强作用。方法将构建的HCV/HBV真核表达载体pcDNA-PCXS和蛋白分别免疫BALB/c小鼠,用ELISA的方法检测抗-HBs和抗-HCV Ab;3H-TdR掺入法检测免疫小鼠T淋巴细胞增殖;51Cr释放法检测免疫小鼠特异性CTLs杀伤作用。结果DNA-蛋白组抗-HBs和抗-HCV抗体均较DNA组出现早,且抗体水平明显高,DNA-蛋白组的CTL应答水平也明显高于DNA组。结论蛋白能提高DNA疫苗的特异性体液和细胞免疫功能,为DNA疫苗的实际应用提供了一种新的策略。 相似文献
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目的分析不同批次的肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗(人二倍体细胞)全程免疫后免疫原性及安全性的一致性。方法检测3批EV71灭活疫苗成品的抗原含量、游离甲醛含量、铝含量、内毒素含量、抗生素残留量,并免疫动物检测异常毒力及效力。采用随机、双盲的方法,将3批疫苗于第0、28天分别免疫900名6~72月龄的受试人群。于接种前(第0天)、完成2剂疫苗接种后28天(第56天),采集静脉血,分离血清,采用微量细胞病变法检测EV71中和抗体(neutralizing antibody,Nab)效价;于每次接种后30 min内记录即时反应,每剂接种后0~7 d内记录各种征集性局部和全身症状,0~28 d内记录非征集性不良反应事件,并在整个观察期间报告严重不良反应事件。结果 3批EV71灭活疫苗成品的各项检定结果均在合格范围内。经2剂EV71灭活疫苗全程免疫后,20120101、20120102和20120203批疫苗受试者的抗体阳转率分别为98.00%、95.67%和98.67%,易感人群(Nab<1∶8)免后抗体阳转率分别为96.45%、92.44%和97.60%,非易感人群(Nab≥1∶8)免后抗体水平的4倍增长率分别为67.94%、65.63%和71.43%;免后抗体GMT分别为283.79、231.48和285.78,组间差异均无统计学意义(P均>0.05)。3批疫苗诱导的与疫苗相关的不良反应及严重不良反应事件,组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过比较3批疫苗的各项生产质量控制指标及其诱导的抗体水平,证实该疫苗的生产工艺较稳定。 相似文献