HPV16型免疫胶体金诊断试纸条的制备

建立一种快速、准确、简便检测高危型人乳头瘤病毒16型的胶体金诊断试纸条,以用于宫颈癌的早期筛查。用柠檬酸三钠还原法制备了酒红色的30 nm胶体金颗粒,胶体金颗粒标记的单抗的实际标记量为6μg/mL。选用了2种稳定剂BSA和PEG20000获得了稳定的金标抗体溶液。实验结果表明:第7种样品垫处理液和第7种结合垫处理液处理样品垫和结合垫组装的试纸条效果最好;试纸条检测HPV16E6蛋白为阳性,检测HPV16L1蛋白为阴性。     

一起鸭疫里默氏杆菌病的诊治

针对鸭疫里默氏杆菌病传染快,死亡率高,往往造成严重经济损失的情况,分离鉴定出该病病原菌.用分离出来的菌株制成油乳剂灭活疫苗,配合药敏试验筛选的敏感抗生素进行治疗与预防,可迅速控制病情.     

模拟胃环境中丝素蛋白复合材料的溶蚀机制

以聚乙二醇为增塑剂,通过水相共混法制备了不同比例的丝素蛋白/聚乙烯醇/聚乙二醇复合材料。利用红外光谱对复合材料进行了结构表征,并通过失重试验、红外光谱(FTIR)、X-射线衍射(XRD)、扫描电镜(SEM)对复合材料在模拟胃环境中的溶蚀机制进行了研究。结果表明,丝素蛋白/聚乙烯醇/聚乙二醇复合材料的溶蚀降解首先从丝素蛋白的溶出、分解,并形成细微孔道开始,然后胃液通过细微孔道逐步深入并溶蚀聚乙二醇和聚乙烯醇。该丝素蛋白/聚乙烯醇/聚乙二醇复合材料具有潜在的药物缓释应用前景。     

醛化鸡红细胞吸附释放结合NP-40法纯化新城疫病毒蛋白

采用醛化鸡红细胞吸附释放结合NP-40法纯化鸡胚尿囊液中的新城疫病毒蛋白.通过收集纯化的新城疫病毒,并测定新城疫病毒血凝效价和进行9%SDS-PAGE电泳,以测定新城疫病毒蛋白的纯度.用该方法纯化的新城疫病毒血凝效价为1∶256,进行9%SDS-PAGE电泳后,发现得到的新城疫病毒蛋白不含鸡胚尿囊液蛋白,是纯度较高的新城疫病毒蛋白.以上结果表明,醛化鸡红细胞吸附释放法结合NP-40法是一种经济实用、操作简便,并有较高纯化效率的方法.     

胶体金免疫层析法快速诊断禽流感

建立了一种简便、快速、准确检测动物禽流感病毒(AIV)的胶体金免疫层析法(GICA).具体内容包括制备胶体金标记抗AIV单克隆抗体和羊抗AIV抗体,结合垫和样品垫的处理,组装免疫层析试纸条.检测动物AIV,进行敏感性和特异性评定.结果表明:测试条灵敏度可达10 ng/ml.与进口禽流感胶体金免疫层析试剂条比较,符合率达100%.本方法具有特异性强、灵敏度高、简便快速的特点,可用于禽流感的早期诊断.     

HPV16 E6基因原核表达质粒的构建

对构建HPV16 E6基因的原核表达质粒pET28a(+)-HPV16 E6进行研究.从宫颈癌细胞株CaSki细胞中提取的的DNA基因组为模板,设计一对特异性引物,用PCR法扩增出HPV16E6基因片段.HPV16E6基因片段和质粒pET28a(+)经NcoⅠ和HindⅢ双酶切后用T4 DNA连接酶连接.构建的重组质粒pET28a(+)-HPV16 E6转化大肠杆菌DH5α,经PCR鉴定和酶切鉴定筛选出阳性克隆,将阳性克隆的质粒转化到大肠杆菌BL21 Star-DE3 Plyss中,构建了HPV16 E6基因原核表达质粒pET28a(+)-HPV16E6.HPV16E6基因原核表达质粒pET28a(+)-HPV16 E6的构建为HPV16 E6重组蛋白的制备和为宫颈组织HPV16型感染的早期诊断和相关治疗性疫苗的研制奠定了物质基础.     

玉米秸秆固体发酵剂的研制

研制了一种发酵玉米秸秆的固体发酵剂。选择能够发酵玉米秸秆的主要微生物菌种,进行分离、纯化、增菌、扩大培养。采用平板菌落计数法进行微生物计数。根据微贮的微生物菌种的选择原则,将这几种微生物混合配制成5个不同比例的发酵剂。将这些发酵剂加入玉米秸秆中,对其发酵后的营养成分进行了研究,得到了最佳的发酵剂比例。     

禽流感病毒M2e基因与鸡IgGFc基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化

将含禽流感病毒M2蛋白膜外区(M2e)且偶联了鸡IgG Fc片段的重组质粒pET32a(+)的大肠杆菌,用终浓度为0.5 mmol/LIPTG在37℃下诱导表达,获得了包涵体表达的目的蛋白。Western-blotting试验表明,M2e能与兔抗禽流感H5阳性血清发生反应,且在47kD处出现一条特异性条带,具有良好的免疫学活性.表达产物通过His-Ni2+柱亲和层析后,得到了较好的纯化效果。本实验为进一步研究M2蛋白的生物学活性、检测方法及通用疫苗的开发奠定了基础。     

蛋鸡大肠杆菌诱发卵黄性腹膜炎的诊治

重庆潼南某场鸡群出现以蛋鸡腹部膨大为明显特征的死亡,取发病鸡群的典型病例经临床诊断、病理观察及实验室鉴别诊断,确诊为大肠杆菌病。分离出该鸡场的流行菌株制成油剂灭活苗,给鸡群按照0.3 mL/羽的量进行免疫,发病率迅速下降,控制了疫情,保护率可达95%。诊治结果还表明疫苗是安全的。