HBV preS/S基因克隆及其在酿酒酵母中的表达

目的:探索利用酿酒酵母系统表达乙型肝炎病毒(HBV)preS／S基因。方法:利用PCR技 术,以HBV病毒DNA为模板,体外扩增HBV preS／S基因。然后构建重组表达载体pESC-preS／S。 用LiAc法转化酿酒酵母YPH50,选取重组菌进行培养,并诱导表达外源蛋白。提取蛋白浓缩后 进行SDS-PAGE分析,并经Western blot分析鉴定。结果:实验结果表明重组菌能够表达HBV preS／S蛋白。结论:利用酿酒酵母系统可成功表达HBV preS／S基因,为制备新型预防性疫苗提供 条件。     

哺乳动物中基因持续表达的策略

人类遗传病的治疗越来越依赖于基因水平上的治疗,但外源基因不能在哺乳动物中持续表达的缺陷严重阻碍了这一手段的快速发展。含有转座子载体的染色体基因组整合,裸露质粒DNA转化到肝脏的压力输送,或是在质粒载体中插入真核基因的顺式作用元件如内含子、3’端非翻译区、EBV序列等,都可以在一定程度上赋于外源基因以长期持续的表达,这些策略对于基因治疗的发展具有重要的意义。 Abstract: Gene therapy holds great promises to a variety of inherited diseases. However, the limitations on extended and consistent foreign gene expression has severely hampered the development of applicable gene therapy approaches. Technologies are reviewed here including transponson integration, biolistic measures that pulse the naked plasmid into living organs, or the integration of eukaryotic cis elements into introns, 3′ untranslated regions, or the integration of the EBV sequences, which could assist in the prolonged gene expression of the introduced foreign genes. These strategies may significantly promote the progresses of gene therapy.     

人乳头瘤病毒(HPV)基因芯片的研究

探讨将基因芯片与限制性显示技术相结合对HPV进行基因检测和分型的方法。分离HPV6,11,16和18型的基因片段作为探针,纯化后应用PixSys 5500点样仪将其打印在氨基包被的玻片上制作HPV基因芯片,对HPV样品进行荧光标记后与芯片杂交,经清洗和干燥后对芯片进行扫描和结果分析。对HPV基因检测芯片的制作与检测的实验条件进行了初步研究,并对应用HPV基因芯片进行分型做了初步探讨。建立的检测芯片实验方法可行,并且显示了在HPV分型中的应用前景。     

TAT蛋白介导外源物质进入细胞的作用机制探讨

来源于人类免疫缺陷病毒HIV-1的反式激活因子(trans-activator,TAT)蛋白能够有效的介导多肽、蛋白质、基因以及一些其它的物质进入细胞。它以低亲和力与细胞上的受体相结合,通过破坏细胞质膜,以非内吞途径转导外源物质进入细胞内部。     

信号肽对外源蛋白分泌效率的影响

信号肽在引导外源蛋白分泌过程中具有重要作用,本文从信号肽疏水性结构、构建分泌型载体以及分泌增强子、定位信号等几个方面介绍了信号肽对外源蛋白分泌效率的影响,在大量生产以酵母为表达宿主的治疗性蛋白方面具有广泛的应用前景。     

鼠疫耶尔森菌基因组研究进展

鼠疫耶尔森菌的全基因组序列已测定完成,在染色体上有4000多个编码序列和149个假基因,并含有大量的插入序列,3个毒性质粒上也含有诸多与致病性有关的基因,本主要就鼠疫耶尔森菌的染色体及质粒pYV/pCD1,pFra/pMT1和PST／pPCP1的基因结构,组成特征和已知的毒性基因定位等方面的研究作一综述。     

实时荧光定量PCR技术在转基因食品检测领域中的应用

随着基因工程技术在农业生产中应用的深入,越来越多具有改良特征的转基因植物在全球范围内得到广泛种植,随之而来的转基因食品也迅猛发展,转基因产品大规模商业化引起了对安全性问题的担忧。为保证转基因产品标签制度的顺利实施,建立快速、准确、高通量的定量检测方法十分必要。我们综述了国内外转基因食品检测技术的研究进展,重点阐述了实时荧光定量PCR技术在转基因食品检测领域中的应用,并展望了通过构建质粒标准分子的方法来实现对更多转基因植物品系的定量检测。     

波形蛋白、核纤层蛋白与排核关系的研究

以网织红细胞与K_(582)细胞融合形成的胞质体杂种细胞K-RRneo为研究对象,对Vimentin、Lamin蛋白与K-RRneo细胞分化排核的关系进行了研究。结果表明:随着K-RRneo细胞的分化,Vimentin mRNA、Lamin蛋白表达明显降低,与我们整装电镜观察及Western印迹分析所得到的结论相一致,证实了薛社普提出的Vimentin、Lamin蛋白在红系细胞分化排核中所起的作用,为最终阐明红系细胞分化排核机制提供了新线索。     

应用限制性显示技术制备HCV cDNA诊断基因芯片的初步研究

制备丙型肝炎病毒 (HCV)检测芯片并进行验证、初步检测质量评价。采用限制性显示 (Restrictiondisplay ,RD)技术制备芯片探针 ,从载体pCV_J4L6S中切出HCV全长cDNA ,Sau3AⅠ酶消化 ,所得的限制性片段进行RD_PCR扩增 ,经聚丙烯酰胺电泳 (PAGE)结合银染法进行分离。切胶回收后作 3次PCR ,得到较纯净的HCVcDNA限制性片段。扩增后的产物克隆至pMD18_T载体进行快速鉴定。将筛选出的限制性片段打印在氨基修饰的玻片上制备成检测芯片进行杂交验证分析 ,对芯片检测进行优化、初步的质量评估。运用RD技术 ,得到 2 4个 2 0 0～ 80 0bp、大小均一的基因片段 ,序列分析表明 ,均属于HCV特异基因 ,可以作为诊断芯片探针 ;杂交、测序结果显示 ,芯片检测的敏感性、特异性、准确度、重复性、线性等指标均佳。利用RD技术制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方法 ;制备的诊断芯片可以用于检测HCVRNA ,具有敏感、检测结果较为可靠的优点。     

兔网织红细胞与K562细胞胞杂交体（K—RRneo）核基质—中间纤维体系…

本文利用脂质体转基因技术与细胞融合相结合的方法所建立的杂交细胞为研究对象,采用选择性多步抽提配合整装电镜及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析等技术,系统观察了兔网织红细胞,人红白血病Ｋ５６２细胞及两者融合形成的胞质杂交体Ｋ－ＲＲｎｅｏ细胞的核基质－中间纤维体系结构,着重分析比较了它们之间的胞质波形蛋白纤维成分的变化。实验结果表明：Ｋ５６２细胞的中间纤维为放射状分布,核纤层为网层状,兔网织红细胞胞质中间纤维胞质