产肌醇酿酒酵母基因工程菌的构建

【目的】过表达酿酒酵母肌醇合成关键酶基因INO1,促进肌醇合成,构建能够分泌肌醇的基因工程菌株。【方法】构建r DNA介导的INO1基因多拷贝整合表达载体p URIH,电转化酿酒酵母Y01菌株,构建工程菌株YI2-1和YI2-2,荧光定量PCR方法分析INO1基因表达量。敲除Kan MX抗性基因,HPLC检测重组菌发酵液中肌醇含量。【结果】获得INO1基因过表达菌株YI2-1和YI2-2,YI2-1的INO1基因表达量是出发菌Y01的16.235倍。敲除Kan MX抗性基因的菌株命名为YI2-1△KP,初步检测YI2-1△KP产肌醇量为627 mg/L。【结论】r DNA介导的INO1基因多拷贝整合表达载体p URIH能够有效地过表达目的基因;过表达菌株合成的肌醇不仅能满足自身的需要,而且能够向胞外分泌,具有潜在的工业应用价值。     

超声波辅助大米草总黄酮提取及抗氧化活性研究

应用超声波技术,以大米草为原料提取黄酮类化合物,设计正交实验,研究乙醇浓度、料液比、超声处理温度和提取时间对总黄酮提取效果的影响,分析得出最佳提取工艺条件。并测定大米草黄酮体外抗氧化活性。结果表明:大米草总黄酮提取的最佳工艺条件为:乙醇浓度80%,提取时间20 min,料液比1∶30(g·mL-1),提取温度45℃。影响大米草黄酮提取率的主次因素是:料液比乙醇浓度提取温度提取时间。大米草黄酮总抗氧化活性和抗超氧阴离子活力随着浓度的增加逐渐增加,呈明显的量效关系,并且能有效清除氧化脂质(MDA)。     

超声波辅助大米草总黄酮提取及抗氧化活性研究北大核心CSCD

应用超声波技术,以大米草为原料提取黄酮类化合物,设计正交实验,研究乙醇浓度、料液比、超声处理温度和提取时间对总黄酮提取效果的影响,分析得出最佳提取工艺条件。并测定大米草黄酮体外抗氧化活性。结果表明:大米草总黄酮提取的最佳工艺条件为:乙醇浓度80%,提取时间20 min,料液比1∶30(g·mL-1),提取温度45℃。影响大米草黄酮提取率的主次因素是:料液比>乙醇浓度>提取温度>提取时间。大米草黄酮总抗氧化活性和抗超氧阴离子活力随着浓度的增加逐渐增加,呈明显的量效关系,并且能有效清除氧化脂质(MDA)。     

代谢工程改造酿酒酵母合成肌醇

【目的】肌醇别名环己六醇,是一种具有生物活性的糖醇,在医药、食品和饲料等领域具有重要的应用价值。为获得生产肌醇的微生物细胞工厂,通过代谢工程改造,构建生产肌醇的酿酒酵母工程菌株。【方法】对酿酒酵母肌醇合成途径的正负调控同时改造,过表达肌醇-3-磷酸合成酶基因ino1,敲除肌醇生物合成的转录抑制子基因opi1和抗性基因kan MX,获得重组菌。利用气相色谱法检测重组菌发酵液中肌醇含量。【结果】构建了生物安全性的产肌醇基因工程菌株,摇瓶培养产量为1.021 g/L。【结论】通过过表达ino1和敲除opi1来改造酿酒酵母,能够有效提高重组菌的肌醇产量,为下一步的微生物发酵法产肌醇的工业应用奠定基础。