PBL教学模式在病原生物学理论教学中的应用

PBL 教学法是一种源自西方,近年来引入我国全新教学模式,它主要培养学生的自学能力,发展学生综合思考能力和解决实际问题能.本文作者总结了中国医科大学病原生物学教研室三年来在理论课教学中采用PBL教学模式的实践经验,通过样本成绩分析证明了 PBL 教学方法对于提高学生综合思考能力很有帮助,同时在意见反馈结果中也显示学生对于 PBL 教学模式有很高的热情,可以很好地发挥学生的主观能动性.     

抗汉坦病毒NP scFv基因表达及生物活性分析

诱导已构建的重组质粒pGEX-6P—1—scFv原核表达抗汉坦病毒核衣壳蛋白单链抗体,并用酶免疫实验检测单链抗体生物活性。用IPTG诱导重组原核表达质粒pGEX-6P-1-scFv表达抗汉坦病毒NP单链抗体融合蛋白,经亲和层析纯化,并应用SDS—PAGE电泳检测单链抗体融合蛋白,应用酶免疫实验检测抗NP单链抗体生物学活性。SDS—PAGE电泳检测显示,原核重组质粒pGEX-6P-1-scFv已表达分子量约为56ku的单链抗体融合蛋白;酶免疫实验检测显示,单链抗体具有与汉坦病毒NP抗原特异性结合的生物学活性。结果表明,已构建的原核表达重组质粒pGEX-6P-1-scFv,能够成功表达具有与汉坦病毒NP抗原特异性结合生物学活性的单链抗体。     

抑制麻疹病毒体外复制的效应性小干扰RNA的鉴定

为了鉴定抑制麻疹病毒体外复制的靶向Rab9GTPase基因效应性小干扰RNA（siRNA）,根据。iRNA设计原则和Rab9GTPase基因的mRNA序列,设计并化学合成8对靶向Rab9GTPase基因的siRNAs和1对阴性对照siRNA,经脂质体法转染Vero—E6细胞株,转染10h后感染麻疹病毒Edmonston株。通过逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测转染后细胞内Rab9GTPasemRNA水平;通过标准蚀斑试验检测麻疹病毒滴度。同对照组相比,8对靶向Rab9GTPase基因siRNAs中的2对（Rab9-4和Rab9—7）,以时间和剂量依赖性的方式显著地抑制细胞内Rab9GTPasemRNA表达和麻疹病毒的复制（抑制率高达90％以上）,其他的siRNAs对细胞内Rab9GTPasemRNA表达和麻疹病毒的复制的抑制性效应则低于50％。结果表明,Rab9-4和Rab9—7是体外抑制麻疹病毒复制的最有效的siRNAs,这些siRNAs靶序列能被用来深入研究RNA干扰治疗麻疹病毒感染的可能性。     

伯氏疟原虫PbPH表达特点和单克隆抗体传播阻断效应研究

制备抗PbPH单克隆抗体(mAb),检测伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)PbPH的表达特点和传播阻断能力。主要通过蛋白免疫印迹(Western blot, WB)和间接免疫荧光法(Indirect immunofluoscent assay, IFA),确定PbPH的表达阶段以及抗PbPH单克隆抗体的特异性。1×10~6个P.berghei感染雌性BALB/c小鼠3 d后,尾静脉收集感染小鼠的血液,与鼠源的抗PbPH单克隆抗体/PBS对照,按照不同的稀释倍数(1?5、1?10、1?50)进行混合培养,观察15 min后,伯氏疟原虫配子体出丝中心数及24 h后动合子形成数的变化。WB和IFA检测抗PbPH单克隆抗体可以识别雌雄配子体、雄配子、雌配子/合子、retort和动合子的表面抗原。体外传播阻断实验中,与PBS对照组相比,在加入不同浓度(1?5、1?10)的抗PbPH单克隆抗体培养后,配子体出丝中心数分别减少了41.7%、32.7%,差异具有统计学意义(P0.05);动合子形成数分别减少了45.1%、14.8%,差异具有统计学意义(P0.05)。抗PbPH单克隆抗体可以有效阻断体外配子体出丝中心和动合子的形成,从而影响伯氏疟原虫在蚊体内的进一步发育和继续传播。     

人源抗汉坦病毒核衣壳蛋白T7噬菌体抗体库的构建

构建人源T7噬菌体单链抗体(scFv)库筛选抗汉坦病毒核衣壳蛋白(NP)抗体。从肾综合征出血热恢复期患者外周血淋巴细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA第一条链,PCR分别扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),经重叠延伸拼接(SOE)PCR组成scFv基因,并将其与T7噬菌体载体的2个臂相连接。体外包装后,在宿主菌BLT5403中,扩增重组噬菌体抗体库。以基因工程表达NP进行4轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选,酶免疫实验检测抗体活性。所建抗体库库容为1.35×107,扩增后初级库滴度为2.12×1010pfu/mL。以NP抗原筛选后抗体出现特异性富集,经酶免疫实验鉴定,得到2株与NP抗原特异结合的噬菌体抗体。结果表明,研究成功构建了人源抗NP蛋白T7噬菌体抗体库。     

PBL教学模式在病原生物学、免疫学及感染病学课程整合改革中的探索与实践

探讨问题导向教学(PBL)方法在病原生物学、免疫学及感染病学课程整合改革中的教学效果及意义。以中国医科大学2009级七年制临床系学生240人为研究对象,随机分为实验组和对照组各120人。实验组采用PBL教学方法,教学内容采用病原生物学、免疫学及感染病学整合,对照组采用传统教学方法,教学内容为传统病原生物学课程,2组由相同教师授课,采用期末考试和教学效果自评调查问卷的方式评价教学效果。实验组与对照组相比,期末考试成绩无统计学差异(P>0.05),但病例分析题成绩有统计学差异(P<0.01)。2种学生的自评调查问卷中,实验组的自学能力、团队协作能力及发现问题解决问题的能力均显著高于对照组(P均<0.01)。PBL教学模式能有效提高教学质量,具有一定的示范及推广价值。     

疟疾疫苗研究进展及前景

疟疾肆虐,对全球公共卫生健康提出了严峻的挑战,疫苗作为一个关键性的预防策略,为消除疟疾提供了新的机遇。随着现代科技的高速发展,科学家们针对疟疾疫苗的研究正如火如荼进行着,其中红细胞前期疟疾疫苗、红细胞内期疟疾疫苗、传播阻断疫苗以及多抗原、多表位重组疟疾疫苗和多阶段融合蛋白疟疾疫苗等的相关研究已取得了重大进展。虽目前尚未有任何一种疟疾疫苗获得上市许可,未来作为可以拯救生命的优质、高效的抗疟疫苗或将成为根除疟疾不可替代的工具。     

RNA干扰抑制麻疹病毒体外复制的实验研究

为了研究短发夹RNA(shRNA)介导的RNA干扰对麻疹病毒体外复制的抑制作用,构建靶向与麻疹病毒复制密切相关的宿主细胞基因Rab9 GTPase基因特异性shRNA表达载体,分别转染Vero-E6和B95a细胞后感染麻疹病毒Edmonston株和野生株。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western-blot)检测转染细胞内Rab9 GTPase基因表达水平;标准蚀斑试验测定麻疹病毒滴度。结果显示转染细胞内Rab9 GTPase mRNA和蛋白质的表达水平同对照组相比明显降低,标准蚀斑试验显示麻疹病毒的复制受到显著抑制,抑制率达到90%以上。结果表明载体介导的shRNAs能通过特异性下调Rab9 GTPase基因表达抑制麻疹病毒体外复制,Rab9 GTPase可能成为治疗麻疹病毒感染的RNA干扰靶。