棉铃虫Hsp70的多克隆抗体制备及鉴定

HSPs(热休克蛋白)是机体在不利环境条件刺激下合成的一类蛋白质,在进化上高度保守,普遍存在于生物体,其中Hsp70是最为保守的成员。研究发现,昆虫滞育过程中普遍存在Hsp70表达上调的现象。然而,现有的研究均是在基因水平的检测结果。为了能从蛋白水平检测棉铃虫中Hsp70的表达,本研究制备了棉铃虫Hsp70的多克隆抗体。构建了hsp70的原核表达载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,重组蛋白经镍柱纯化后免疫兔子,制备了棉铃虫Hsp70的多克隆抗体。抗体的效价较高,达到了1∶256 000,此外Western结果表明,制备的抗体能检测出热诱导的Hsp70蛋白。本研究制备了高效价且较为特异的Hsp70对克隆抗体,该抗体为后续从蛋白水平研究棉铃虫滞育过程中Hsp70的表达及其分子机制奠定了基础。     

经皮穴位电刺激联合全身麻醉对腹腔镜结直肠癌根治术患者炎性因子、T细胞亚群和认知功能的影响

摘要 目的：探讨经皮穴位电刺激（TEAS）联合全身麻醉对腹腔镜结直肠癌根治术患者炎性因子、T细胞亚群和认知功能的影响。方法：选取2018年6月~2019年9月期间我院收治的行腹腔镜结直肠癌根治术患者90例,根据随机数字表法分为对照组（n=45）和研究组（n=45）,对照组给予全身麻醉处理,研究组在对照组的基础上联合TEAS,比较两组患者炎性因子、T细胞亚群、认知功能及疼痛情况。结果：研究组术后1 d、术后5 d白介素-6（IL-6）、白介素-1（IL-1）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）低于对照组（P<0.05）。研究组术后1 d、术后5 d CD3⁺、CD4⁺/CD8⁺、CD4⁺高于对照组,CD8+则低于对照组（P<0.05）。研究组术后1 d、术后3 d、术后5 d、术后7 d简易智力状态检查表（MMSE）评分高于对照组（P<0.05）。研究组术后6 h、术后12 h、术后24 h、术后48 h视觉模拟评分法（VAS）评分低于对照组（P<0.05）。两组术后5 d、术后7 d认知功能障碍（POCD）发生率比较差异无统计学意义（P>0.05）;研究组术后1 d、术后3dPOCD发生率低于对照组（P<0.05）。结论：TEAS联合全身麻醉治疗腹腔镜结直肠癌根治术患者,可降低炎性反应,减轻免疫抑制,同时还可降低对机体认知功能的损害。     

产气荚膜梭菌促进黑腹果蝇的生长和发育

【目的】黑腹果蝇Drosophila melanogaster肠道中栖生着众多微生物,通过分离和研究其内共生菌,以研究肠道菌群的多态性和作用。【方法】利用Hungate滚管技术从黑腹果蝇成虫肠道分离厌氧细菌;通过记录果蝇的发育历期和生长速率,检测该细菌对果蝇发育和生长的影响。【结果】首次从黑腹果蝇肠道内分离到一株产气荚膜梭菌Clostridium perfringens。该菌能够有效地定植到果蝇肠道内,是果蝇肠道共生菌。产气荚膜梭菌显著地缩短无菌果蝇的发育历期,将无菌果蝇成蛹天数由20 d缩短到8.1 d,羽化天数由30 d缩短到12.7 d。该菌还可以提高果蝇生长速率。【结论】本研究揭示了产气荚膜梭菌是果蝇的内共生菌,可以通过提高生长速率而有效地促进果蝇的生长和发育。     

培美曲塞联合顺铂对老年Ⅲ~Ⅳ期非小细胞肺癌患者血清CEA，CYFRA21-1，p-ERK，VEGF 及AnnexinⅡ水平的影响

目的:探讨培美曲塞联合顺铂对老年Ⅲ~Ⅳ期非小细胞肺癌患者血清癌胚抗原(CEA),细胞角质素片段抗原21-1(CYFRA21-1),磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK),血管内皮生长因子(VEGF)及膜联蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)水平的影响。方法:120例老年Ⅲ~Ⅳ期非小细胞肺癌患者按抽签法分为对照组(n=60)与观察组(n=60),对照组予以多西紫衫醇联合顺铂治疗,观察组予以培美曲塞联合顺铂治疗,比较两组CEA,CYFRA21-1,p-ERK,VEGF,AnnexinⅡ,基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及转化生长因子β1(TGF-β1),NK细胞,CD3~+,CD4~+,临床疗效和不良反应。结果:治疗后,观察组CEA,CYFRA21-1,p-ERK,VEGF,AnnexinⅡ,MMP-2及TGF-β1低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。观察组NK细胞,CD3~+及CD4~+高于对照组(P0.05)。观察组临床疗效、不良反应均优于对照组(P0.05)。结论:培美曲塞联合顺铂化疗可降低老年Ⅲ~Ⅳ期非小细胞肺癌患者血清CEA,CYFRA21-1,p-ERK,VEGF及AnnexinⅡ水平,控制肿瘤进展,值得推广。     

盐地碱蓬开发前景广阔

盐地碱蓬开发前景广阔邵秋玲李玉娟盐地碱蓬（Ｓｕａｅｄａｓａｌｓａ）为藜科、碱蓬属一年生草本植物,俗名“黄须菜”。它广泛分布于我国的东北、内蒙古、河北、山东、江苏等地。在山东绝大部分分布于黄河三角洲的滨海盐碱地上,仅位于黄河入海口的东营市就有几百万亩的...     

生物体内形形色色的G蛋白

G蛋白是一类可与GTP和GDP结合的蛋白,结合GTP时具有活性,结合GDP时为非活性状态,通过G蛋白活性和非活性状态的变化来打开或关闭细胞内某一过程,因此G蛋白也被称为分子开关。对存在于生物体内的一些G蛋白进行了简要的介绍。     

棉铃虫中HSF1的分子克隆、选择性剪接及亚细胞定位研究

昆虫滞育过程中热休克蛋白的表达调节机制尚不明确,一个重要的原因是缺乏对其转录调控因子(热休克因子HSF1)的研究。因此,本文重点研究HSF1以期为阐明滞育昆虫中的热休克蛋白的调控机制打下基础,进而为开发新型的棉铃虫防治策略提供依据。首先,从棉铃虫中克隆了HSF1基因,对棉铃虫HSF1基因序列分析及进化树构建。随后在棉铃虫不同组织中发现了HSF1的7个选择性剪接体。最后,鉴定并分析棉铃虫中的7个HSF1的选择性剪接体,并对它们的亚细胞定位进行了研究。结果表明:棉铃虫HSF1基因的全长c DNA序列全长2 275 bp,编码一个655 aa的蛋白质,预测其分子量为72. 26 k Da,命名为Har-HSF1 (Gen Bank登录号为KP307027)。根据预测的蛋白质序列进行分析,表明棉铃虫HSF1蛋白包含4个经典的功能域:DNA结合域DBD,疏水性的七肽重复域HR-A/B,疏水性的七肽重复域HR-C以及C末端反式激活结构域CTAD。这些说明HSF1蛋白是一个在生物进化上非常保守的蛋白质。此外,发现了HSF1的7个选择性剪接体,命名为HSF1-A到HSF1-G。亚细胞定位研究表明所有的选择性剪接体都定位在细胞核中,这为它们调节靶基因提供了便利。本研究可以为进一步研究滞育昆虫中热休克蛋白的分子调控机制打下了基础。     

过量表达柳树两个SVP1s基因提高拟南芥抗盐胁迫能力

在拟南芥、水稻等草本植物中,人们对位于液泡膜上质子泵焦磷酸酶（VPase）进行了较为深入的研究,其通过水解焦磷酸释放的能量将H+从细胞质泵入液泡中,从而驱动Na+、K+等的运输,避免了细胞质中因过量的Na+、K+造成的伤害,保护了细胞的正常功能．但是木本植物如柳树中的VP1基因（SVP1)的功能尚未见报道．本研究检测了两个SVP1s同源基因在柳树L0911不同的组织（器官）中以及昼夜条件（以叶片为代表组织）下的表达模式,同时,分析了过量表达SVP1s拟南芥T3转基因株系的耐盐特性. 结果表明：SVP1.1在韧皮部中表达最高,而SVP1.2在韧皮部和新生枝条是其在根部的4～5倍;叶片中两个SVP1s在白天稳定表达,18∶00后逐渐下降,在黑暗条件下,随着暗处理时间的延长SVP1.2增幅较大;在盐胁迫条件下,SVP1s转基因拟南芥T3株系种子萌发率,叶片中与活性氧清除相关的酶,如SOD、POD和CAT等活性的诱导强度高于野生型对照;SVP1.1转基因株系叶片膜质氧化程度（MDA）低于野生型和35S:SVP1.2株系. 通过本研究显示,在拟南芥中过量表达柳树SVP1.1s提高了拟南芥的耐盐能力,揭示了木本植物中VP1基因同样具备保护细胞,使细胞耐受高盐胁迫的功能,同时也为选育优良耐盐树木品种提供了理论依据．     

线虫作为土壤健康指示生物的方法及应用

简述了线虫作为土壤健康指示生物的优势,归纳了常用指数和分析方法,对成熟指数及基于营养类群的一些指数和分析方法进行了详细介绍.与其他指数相比,成熟指数更能敏感地反映土壤环境的受胁迫程度,基于营养类群的指数和分析方法可以在生态系统功能水平上更好地揭示土壤环境的健康状态.概述了以上指数和方法在农业、森林、草原及其他生态系统中的应用研究.结合目前存在的一些问题,提出以下建议:加强对土壤线虫生活史和食性等特性的认识;进一步完善现有指数,将多种指数和分析方法结合使用;加强土壤线虫在多种生态系统及大尺度地域空间内的应用.     

pSim6质粒与新型反选择kil系统联用在重组工程的应用

基因工程中,无痕修饰是一种很受欢迎的基因组操作技术。反选择系统的严谨性决定了无痕修饰的效率。近期有文献报道了一种新型的反选择系统kil,该系统与质粒pSim6联用后反选择严谨性较pKD46质粒更高,预示着kil与pSim6质粒联用可以更高效地选择出重组子。据此,对大肠杆菌菌株W3110、MG1655和DH10B中的4个不同的非必需基因位点(lacI、dbpa、ack和glk)进行了分析,将不同长度的外源基因片段对预先插入这些位点的tet/kil进行基因替换。结果表明kil与pSim6质粒联用较其与pKD46质粒联用,重组效率均有显著提高,并且随着外源片段的增长,效果更明显。外源片段为1 000 bp时,kil与pSim6质粒联用是其与pKD46联用的1.2–2倍;外源片段为2 000 bp时,则是pKD46的2.2–5倍。综上,kil与pSim6联用具有更高的重组效率,更有利于大肠杆菌基因组的无痕修饰操作,这为大肠杆菌重组工程提供了更多的选择。