21三体综合症植入前诊断的临床前运用研究

探讨建立一个高效、稳定的21三体遗传病植入前诊断的方法,以染色体G显带核型分析为对照,取正常成人外周血单个淋巴细胞40枚、21三体患者外周血单个淋巴细胞40枚及单卵裂球20枚,采用荧光定量PCR技术同时扩增21号染色体上特异区域基因片段(DSCR)和12号染色体上管家基因(GAPDH)片断作内对照,结果在正常组织同时扩增二片断的有效率为95%(38/40),扩增产物的荧光强度比值为1.00±0.05;21三体患者单个淋巴细胞同时扩增二片断的有效扩增率为92.5%(37/40),DSCR/GAPDH荧光强度的比值约为1.58±0.17;单卵裂球的扩增效率为80.0%(16/20).三者实验结果与染色体核型分析结果完全一致,准确率100%.研究结果表明荧光定量PCR技术产前检测21三体综合征具有准确、快速、安全、实用等特点,有较高的临床推广应用价值.     

Lewis肺癌细胞与其衍生细胞系的比较

目的对比Lewis肺癌细胞(LLC)及LLC原位接种后获得的第一代衍生细胞(R1-LLC)和R1-LLC原位接种后获得的第二代衍生细胞(R2-LLC)间的生物学特性,比较该三种细胞在原位种植模型中的侵袭转移能力。方法离体实验:采用cck8法、克隆球形成实验、Tanswell侵袭试验分别检测细胞的增殖、侵袭能力,透射电镜观察细胞和组织的结构形态;活体实验:观察在7、14、21 d时LLC、R1-LLC、R2-LLC细胞分别原位种植模型中的成瘤与转移情况,统计成瘤率与成瘤时间。结果 LLC、R1-LLC、R2-LLC细胞的增殖能力差异无显著性(P0.05),侵袭能力R2-LLCR1-LLCLLC(P0.05)。活体实验显示LLC、R1-LLC、R2-LLC成瘤率分别为66.67%、80%、93.33%(P0.05)。结论在离体及活体实验中,R2-LLC比R1-LLC及LLC细胞具有更强的侵袭及转移特性。     

兔不同急性肝衰竭模型的建立与评价

目的:探讨一种理想的急性肝衰竭(AHF)模型建立方法.方法:36只实验兔随机分为3组:①改良药物手术诱导组(A组,n=12),先用D-氨基半乳糖(D-Gain)和脂多糖(LPS)腹腔注射,同时加用乳果糖,注射后2h以氟烷作为麻醉剂,切除约50%肝脏组织.术中经肝静脉注入5%葡萄糖氯化钠溶液10ml/kg体重;②传统手术诱导组(B组,n=12),切除约95%肝脏组织,术中不行肝静脉穿刺注射5%葡萄糖氯化钠溶液;③药物诱导组(C组,n=12),用D一氨基半乳糖(D-Gain)和脂多糖(LPS)一次性腹腔注射.比较建模死亡率、建模后24h兔存活率、血谷丙转氨酶(ALT)、血氨(NH3)、总胆红素(TB)和血糖(BS).结果:B组手术死亡率高于A组死亡率(41.77%vs0%),A组、B组兔建模成功后24h存活率及C组兔建模成功后72h存活率分别为0%,0%,25%,A组ALT和NH3水平显著高于C组(P＜0.05),TB和BG水平低于C组,但差异无显著性.结论:通过改进的50%肝切除术可建立较理想的兔AHF模型,以氟烷作为麻醉剂,药物诱导注射同时加用乳果糖,术中经中叶肝静脉注入5%葡萄糖氯化钠溶液可减少手术死亡率.     

miR-34a-5p对三阴性乳腺癌细胞的影响及相关机制研究*

目的: 探讨miR-34a-5p在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中的表达,分析miR-34a-5p对TNBC细胞增殖、凋亡、迁移的作用,对TNBC荷瘤小鼠肿瘤生长的影响以及在TNBC中对B7-H1表达的影响。方法: 利用RT-qPCR、Western blot分析TNBC细胞中miR-34a-5p、B7-H1的表达,并利用Kaplan-Meier分析二者的表达与TNBC患者的生存关系;将miR-34a-5p转染TNBC细胞,通过CCK-8、流式细胞术及划痕实验检测miR-34a-5p对TNBC细胞增殖、凋亡、迁移的影响;利用RT-qPCR、Western blot检测miR-34a-5p、B7-H1表达水平的变化,双荧光素酶基因报告验证miR-34a-5p与B7-H1的相互作用;利用RT-qPCR、Western blot、IHC检测miR-34a-5p对MDA-MB-231荷瘤小鼠miR-34a、B7-H1表达的影响。结果: TNBC细胞中miR-34a-5p呈低表达,B7-H1呈高表达,二者均与TNBC患者的不良预后有关,差距具有统计学意义(P<0.01);miR-34a-5p抑制TNBC细胞增殖、侵袭,促进细胞凋亡,并且在TNBC细胞中靶向抑制B7-H1;miR-34a-5p agomir在体内抑制MDA-MB-231成瘤裸鼠的肿瘤生长和B7-H1表达。结论: miR-34a-5p在TNBC发生、发展中发挥着重要作用,靶向miR-34a-5p/B7-H1可能成为TNBC患者新的分子治疗策略。     

组织血型抗原:轮状病毒可能的潜在受体

轮状病毒(RVs)是引起婴幼儿及动物非细菌性胃肠炎的重要病原体.研究发现,人类组织血型抗原(HBGAs)可能是RVs的结合受体.HBGAs具有丰富的多态性,包含ABO、分泌型及Lewis抗原.研究表明,不同P型的RVs与HBGAs的结合具有型特异性,而且不同人群对各型RVs易感性存在差异.因此,研究RVs与HBGAs的相互作用对于阐明RV感染的致病机理及RV疫苗的设计具有重要意义.     

Numb在三阴乳腺癌中抑制HDM2泛素化降解p53

目的:探究Numb蛋白在三阴乳腺癌患者中的表达降低情况,及Numb蛋白在三阴乳腺癌中对抑癌因子p53蛋白水平的影响及调控机制,进一步研究Numb蛋白的降低与三阴乳腺癌发生发展的相关性,从而为缺乏有效治疗方法的三阴乳腺癌提供一个潜在的治疗新靶点。方法:40例三阴乳腺癌患者病理组织切片取自重庆医科大学临床病理诊断中心,采用免疫组化法检测Numb蛋白在三阴乳腺癌患者中的表达情况。MCF-10A细胞株和MDA-MB-231细胞株均为ATCC来源,采用qPCR和Western blot法检测对比Numb、HDM2、p53三者的转录水平和蛋白质水平在以上两个细胞株中差异。采用增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)质粒转染的方法在MDA-MB-231细胞中重表达Numb,采用q PCR和Western blot法验证Numb、HDM2、p53三者表达的变化。结果:转染NUMB-EGFP后MDA-MB-231细胞中Numb的mRNA和蛋白质水平均明显上调,HDM2无显著改变,p53在转录水平无明显变化,但在蛋白质水平显著升高。在231细胞中上调Numb蛋白可以在转录后水平调节p53水平,使p53蛋白随之显著升高。结论:Numb蛋白在三阴乳腺癌患者中表达降低的比列很高,为55%,且Numb蛋白在三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231中可以调控抑癌因子p53蛋白水平,Numb蛋白水平与p53蛋白水平呈正相关。     

大鼠慢性心肌梗死模型制备的改进

目的 改进制备大鼠心肌梗死模型的方法,提高术后大鼠存活率.方法 采用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,开胸行冠状动脉前降支结扎法,术后给予呼吸道管理.结果 术后存活率达到76%,4周存活率达到67.5%.结论 准确结扎前降支才能保证造模成功,加强呼吸道管理是提高术后大鼠存活率的重要措施.