大白菜霜霉菌诱导抑制性消减杂交cDNA文库的构建和分析

以抗霜霉病大白菜双单倍体系（DH）‘T12-19’为材料,构建了霜霉病诱导表达的正向抑制性消减文库,并利用反向Northern斑点杂交技术对768个阳性克隆进行了筛选,共获得57个病原菌诱导上调表达的克隆。测序后得到55条通读表达序列标签（ESTs）,对这些ESTs序列进行聚类和拼接分析,共获得50个unigenes。Blast分析表明,37个unigenes与已知基因高度同源,占全部非重复序列的67.3%。对已知功能基因按MIPS的分类方法进行功能分类,发现这些基因的功能主要涉及物质与能量代谢、转录调控、蛋白质合成与代谢、膜及转运、信号转导、抗病防御等。为了验证文库筛选结果的可靠性,采用实时荧光定量PCR技术分析了其中2个克隆BFCH10和BFIA7的表达谱。结果表明,这2个克隆在接种病菌6h后明显上调表达,与反向Northern斑点杂交结果基本一致。     

大白菜中小孢子胚胎发生相关基因cDNA片段的克隆与表达分析

以易出胚大白菜‘09C3’为材料,克隆到7个小孢子胚胎发生相关候选基因的cDNA核心片段,并采用半定量RT-PCR方法研究了这些基因在游离小孢子热激处理和培养期间的表达。结果表明,获得的7个基因的核心片段长度在213bp和417bp之间,克隆号分别为C31、C33、99H6、99H8、EV14、EX01和C35。NCBI进行Blastn和Blastx分析结果显示,这些片段与源基因HSP70、BcHSP、Lec2、Fus3、PAP14、HSP17.6和HSP18.2的同源性均超过80%。半定量RT-PCR结果表明,HSP70和Lec2在热激24h后上调表达,而常温培养下24h后没有变化;BcHSP、HSP18.2、Fus3和HSP17.6在热激24h后和常温下24h都上调表达;PAP14在热激24h后和常温下24h表达下调。     

大白菜骨干自交系的苗期抗病性评价

为明确大白菜骨干自交系的抗病性,本研究于2012-2014年,对课题组保存和创制的203个大白菜自交系进行了霜霉病、病毒病、黑腐病、黄萎病和根肿病的苗期抗性评价。结果显示,高抗上述病害的自交系分别有7、9、0、31和12个;只抗其中一种病害的自交系82个;兼抗两种病害的有61个,兼抗三种病害的自交系有28个,兼抗四种病害的自交系有4个。自交系11-234、04-622、12-85、13-108和09-894综合抗病性最优。此外,春大白菜、夏大白菜和秋大白菜三种生态类群间,以及四种叶球抱合类群间的抗病性表现出明显差异。