我国大豆种子中球蛋白2S组分的分离纯化及部分性质的研究

根据大豆种子球蛋白和清蛋白溶解性不同的原理,分离出我国红丰3号大豆种子球蛋白2S粗制剂,再用SephadexG-100柱层析对其进行纯化。纯化后的球蛋白表现SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳非均一性。对这样纯化过的2s球蛋白进行DEAE-纤维素离子交换柱层析分离,用0.1—0.5mol/L pH7.6磷酸盐缓冲液进行线性梯度洗脱,得到四个洗脱峰,每个峰都获得了PAGE单一条带。四个组分分别命名为SⅡP_1,SⅡP_2,SⅡP_3和SⅡP_4。然后对这四种蛋白质的某些性质进行了研究,结果表明四者的分子量按以上顺序分别为22800,21500,19200和17800。所含残基数分别为191,179,163和147个。SⅡP_1,SⅡP_2和SⅡP_3三者的沉降系数(S_(20),w)分别为2.1S,1.9S和1.8S。N-末端分析表明这四种蛋白质的N-末端均为天门冬氨酸.还发现SⅡP_2具有能抑制α-胰凝乳蛋白酶的活性。本实验所提纯的这个抑制剂的一个ATEE(N-乙酰-L-酪氨酸乙酯)单位为0.4μg抑制剂蛋白(仅指对α-chymotrypsin发生作用)。α-chymotrypsin与此抑制剂相互作用时的摩尔数比初步判断为E/I=2/1。     

瘦蛋白介导的人食欲与体重调节机制

瘦蛋白(leptin)介导了一个由5个基因的表达与调控组成的食欲调节系统,从而实现了人体重的反馈调节。深入分析类体重调节的,矿子机制对于阐明肥胖发生的生理学机制,以及对于抗肥胖药物的设计和筛选具育重要意义。     

构建转CgA基因反向cDNA片段小鼠模型

为了制作CgA基因反义RNA转基因小鼠,构建了质粒pCAS2C,并把pCAS2C中完整的反义表达框显微注射入小鼠受精卵的雌原核中,随后将注射过DNA的受精卵移植入假孕鼠的输卵管中,假母所产子一低代都用p1和p4 引物对鼠尾基因组DNA进行PCR检测,选出2只首建鼠（PCR阳性）。首建鼠与正常鼠杂交后得到F1代小鼠,经PCR方法筛选出来的阳性F1代鼠雌雄自交产生F2代。为了检测F2代鼠的基因型,将PCR方法鉴定为阳性的F2代小鼠分别与正常小鼠回交,只有回交后所得后代PCR检测结果全为阳性的F2代个体才是转基因纯合鼠,这样分别得到两只转基因首建鼠的纯合个体。转基因小鼠脑总RNA经RT－PCR反应可产生300bp的产物,证明转基因小鼠中转入的反义基因已经转录,以上结果说明转入的pCAS2C反义表达框已经整合到转基因小鼠的基因组中并遗传给后代,而且已经转录。     

拯救生命的伟大发现——纪念胰岛素发现一百周年

胰岛素的发现是过去100年中最伟大的科学发现之一。胰岛素拯救了无数人的生命,并在继续拯救生命、改善糖尿病患者的生活质量。2021年是胰岛素发现100周年,谨以此文纪念为胰岛素发现作出贡献的科学家们。     

小鼠胚胎干细胞向脂肪细胞分化过程中PPARγ2基因的表达模式

将PPARγ2基因启动子和报告基因荧光素酶相连接克隆于特定载体构建成表达质粒,电穿孔转染小鼠ES细胞,筛选阳性克隆.诱导ES细胞向脂肪细胞分化,通过定量检测荧光素酶活性跟踪PPARγ2基因的表达情况,以此研究脂肪细胞分化过程中该基因的表达模式.结果显示PPARγ2基因在未分化的ES细胞和EB形成的前两天中不表达,从EB形成的第3天开始表达,直至脂肪细胞分化完成.该基因在已完成分化的脂肪细胞中的表达远强于在分化中的前脂肪细胞中的表达.首次报道了从小鼠ES细胞到脂肪细胞分化过程中PPARγ2基因的表达模式,支持了PPARγ2基因为脂肪组织特异性表达基因的已有报道,并为脂肪细胞分化机理研究提供了线索.     

人类单基因肥胖的遗传学基础

肥胖是一种由遗传因素和环境因素共同作用导致的临床综合征,具有较高的遗传率。目前已经克隆了人类的7个基因,这些单基因突变可以独立地导致人类极度肥胖,其中6个都与食欲的中枢神经系统控制有关,1个与脂肪细胞分化调控有关。深入分析人类肥胖的遗传基础,对于阐明肥胖发生的机理以及对于抗肥胖药物的设计和筛选具有重要意义。     

小鼠3T3-L1前脂肪细胞系的增强绿色荧光蛋白标记

细胞模型是研究细胞分化原理以及进行高通量筛选的有效工具。为了建立特异性标记的脂肪细胞分化模型,构建了包括脂肪细胞分化特异性表达基因PPARγ2的启动子在内的载体（pPPARγ2-promoter-EGFP）,用电穿孔方法转染小鼠3T3L1 前脂肪细胞,用显微荧光观察和RT-PCR确认PPARγ2基因的内源表达。结果显示,EGFP基因成功转入3T3-L1前脂肪细胞,观察到细胞分化过程中EGFP表达和脂肪积累,RTPCR分析表明EGFP代表了稳定而真实的PPARγ2基因的内源性表达。建立了由脂肪组织特异表达基因PPARγ2的表达控制的EGFP标记的小鼠3T3-L1前脂肪细胞系,目前国内外尚未见用同样方法对前脂肪细胞进行特异性标记。该细胞系将为脂肪细胞分化机理研究以及为抗肥胖症和抗糖尿病药物筛选提供有力工具。     

黄芩素对3T3-L1小鼠前脂肪细胞分化及对脂肪酸合成酶活性的影响

目的 研究黄芩素对3T3-L1小鼠前脂肪细胞分化及对脂肪酸合成酶活性的影响。方法 油红O染色法测定细胞分化速度;分光光度法测定脂肪酸合成酶活性。结果 黄芩素对3T3-L1小鼠前脂肪细胞向脂肪细胞分化以及对脂肪酸合成酶活性有抑制作用。结论 黄芩素通过阻断脂肪合成而抑制小鼠前脂肪细胞分化;黄芩素具有开发成减肥药物的潜力。     

小鼠3T3-L1前脂肪细胞系的特异性标记(英文)

用增强绿色荧光蛋白特异性标记小鼠 3T3 L1前脂肪细胞系 .构建paP2 promoter EGFP载体 ,电穿孔转染小鼠 3T3 L1前脂肪细胞 ,显微荧光观察和RT PCR确认aP2基因的内源表达 .EGFP基因转入 3T3 L1前脂肪细胞 ,观察到细胞分化过程中EGFP表达和脂肪积累 .RT PCR分析表明 ,EGFP代表了稳定而真实的aP2基因的内源性表达 .建立了由脂肪组织特异表达基因aP2的表达控制的EGFP标记的小鼠 3T3 L1前脂肪细胞系 ,目前尚未见用同样方法对前脂肪细胞进行特异性标记 .该细胞系将为脂肪细胞分化机理研究以及为抗肥胖症和抗糖尿病药物筛选提供有力工具 .