高糖对线粒体乙醛脱氢酶2在大鼠心肌成纤维细胞中表达的影响

目的：观察心肌成纤维细胞是否存在线粒体乙醛脱氢酶2（ALDH2）的表达,探讨ALDH2在高糖诱导的心肌成纤维细胞引起纤维化发生中的作用。方法：原代培养心肌成纤维细胞,分为正常对照组（5.5 mmol/L）、正常+ALDH2激动剂Alda-1（20μmol/L）组、高糖组（30 mmol/L）、高糖+ Alda-1组。免疫荧光鉴定心肌成纤维细胞。各组细胞分别培养48 h后应用MTT法检测成纤维细胞增殖活力,RT-PCR和Western blot检测ALDH2 mRNA及蛋白的表达。结果：RT-PCR和Western blot结果显示心肌成纤维细胞ALDH2 mRNA和蛋白均有表达。与正常对照组相比,高糖组心肌成纤维细胞增殖能力提高（P < 0.01）,ALDH2蛋白表达下降（P < 0.05）;与高糖组相比,高糖+ Alda-1组心肌成纤维细胞增殖能力降低（P < 0.01）,ALDH2的蛋白表达增加（P < 0.05）。结论：心肌成纤维细胞存在ALDH2的表达,ALDH2激动剂Alda-1提高ALDH2的表达后可以抑制高糖引起的心肌成纤维细胞的增殖。     

低浓度乙醇激活乙醛脱氢酶2抑制糖尿病大鼠心肌中自噬相关蛋白的上调

目的探讨自噬在乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)保护糖尿病心肌损伤中的变化及beclin-1在其中发挥作用。方法腹腔注射链脲佐菌素(60mg/kg)构建糖尿病大鼠模型,随机分成正常组(CON)、糖尿病组(DM)和低浓度乙醇干预组(DM+EtOH)。称量大鼠心重(heart weight, HW)及体重(body weight, BW),计算心体比(H/B);试剂盒检测大鼠心肌组织SOD活性、MDA含量;免疫组织化学法检测beclin-1、微管相关蛋白1轻链3 B亚基(B subunit of microtubule-associated protein1 light chain 3, LC3B)、B淋巴细胞瘤-2基因/腺病毒E1B19KD相互作用蛋白3(Bcl-2/adenovirus E1B19KD Interacting Protein 3,BNIP3)的表达;Masson染色检测心肌纤维化;Western blot检测ALDH2、beclin-1、LC3B、BNIP3水平。结果与CON组相比,DM组H/B、MDA含量增加明显,SOD活性下降,心肌纤维化程度加重,ALDH2表达明显减低,而beclin-1、LC3B、BNIP3表达增加;与DM组相比,DM+EtOH组H/B、MDA含量均降低,SOD活性增加,心肌纤维化情况改善明显,同时ALDH2表达明显增加,而beclin-1、LC3B、BNIP3表达显著减低。结论 ALDH2可通过减轻心肌氧化应激、抑制心肌纤维化、减少自噬发挥糖尿病心肌损伤保护作用,可能与ALDH2抑制beclin-1通路的表达有关。     

厄贝沙坦对糖尿病大鼠心肌损伤中Notch1信号通路的影响

目的：观察厄贝沙坦对糖尿病大鼠心肌损伤的作用,分析Notch1信号通路在其中的变化。方法：实验分4组：正常对照组（CON）、高糖高脂组（HC）、糖尿病组（DM）和厄贝沙坦+糖尿病组（Ir+DM）。制作2型糖尿病（T2DM）大鼠模型成功后,第8周开始检测大鼠空腹血糖水平（FBG）、全心质量及左心室重量,计算心脏指数（H/B）及左室重量指数（LVWI）,检测大鼠血浆甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）水平,检测心肌组织超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量变化,免疫组化检测Bcl-2、Bax表达变化,Western blot检测大鼠心肌组织Notch1、Hes-1及Jagged-1的蛋白表达。结果：与CON组相比,HC组H/B、LVWI、FBG无明显变化,血脂、MDA含量明显升高,SOD活性、Bcl-2/Bax及Notch1、Hes-1、Jagged-1蛋白表达降低;与HC组相比,DM组H/B、LVWI、FBG、MDA含量增加明显,血脂水平无明显变化,SOD活性、Bcl-2/Bax及Notch1信号通路蛋白表达进一步降低;与DM组相比,厄贝沙坦干预组H/B、LVWI明显降低,血脂、血糖水平无明显变化,但SOD活性、Bcl-2/Bax增加,MDA含量降低,同时Notch1信号通路相关蛋白表达增加。结论：糖尿病可导致大鼠发生心肌损伤,厄贝沙坦可能通过增强Notch1信号通路的表达发挥心肌保护作用。     

低浓度乙醇对糖尿病大鼠心肌损伤后线粒体融合素2表达的影响

目的：探讨低浓度乙醇对糖尿病大鼠心肌损伤后线粒体融合素2（mfn2）表达的影响。方法：糖尿病大鼠模型采用链脲佐菌素55 mg/kg腹腔注射,分为正常对照组（Control组）,糖尿病组（DM组）和糖尿病+乙醇组（DM+EtOH组）（n=6）;糖尿病+乙醇组于造模成功1周后给予2.5%乙醇日常饮用,1周后改为5%的乙醇持续至8周,8周后行离体心脏灌流,测定心室血流动力学指标,应用自动生化分析仪测定血清乳酸脱氢酶（LDH）和天门冬氨酸转移酶（AST）的水平。Western blot测定左心室组织线粒体融合素2（mfn2）蛋白表达,免疫组化测定心肌组织mfn2蛋白表达。结果：与control组大鼠心肌相比,DM组大鼠心率、左室发展压、左室做功下降,左室舒张末压抬高,血清LDH及AST升高明显,心室mfn2蛋白表达降低;与DM组大鼠心肌相比,DM+EtOH组明显促进心率、左室发展压、左室做功的恢复,降低左室舒张末压,同时降低LDH的水平和AST的释放,mfn2的蛋白表达增高。结论：糖尿病大鼠心肌损伤时,心肌mfn2表达降低;低浓度乙醇增强mfn2在心肌组织中的表达,提示mfn2的增加可能参与低浓度乙醇对糖尿病诱发的心肌损伤的保护作用。     

乙醇激动ALDH2对糖尿病大鼠肾脏JNK表达的影响

目的：观察乙醇激动乙醛脱氢酶2（ALDH2）对糖尿病大鼠肾脏c-Jun氨基末端激酶（JNK）表达的影响。方法：18只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、乙醇＋糖尿病组（n=6）。造模8周后,测定血糖、糖化血红蛋白、肾功能、24h尿蛋白含量等指标,测定肾重指数,观察肾脏病理结构改变,检测肾脏组织ALDH2、p-JNK及JNK蛋白表达。结果：与正常对照组相比,糖尿病组血糖、糖化血红蛋白、尿素氮、肌酐、24h尿蛋白量及肾重指数均明显升高。病理切片显示：肾小球系膜基质增多、基底膜增厚、毛细血管腔变窄。肾脏组织ALDH2蛋白表达下降,p-JNK、JNK蛋白表达增加,p-JNK／JNK显著增高。给予乙醇干预后,肾功能损伤降低,病理改变减轻,肾脏组织ALDH2增高,p-JNK、JNK表达下降,p-JNK／JNK降低。结论：增加ALDH2表达可能通过抑制JNK信号通路的活性减轻糖尿病大鼠肾脏损伤。