不同固定条件下细胞与活细胞的原子力显微镜实时观察

用原子力显微镜（atom force microscope,AFM）观察固定细胞的最佳条件并在生理溶液中对活细胞实时观察.用不同固定剂和同一固定剂的不同浓度处理细胞;不加任何固定剂而直接在生理溶液中对细胞进行AFM成像.以戊二醛为固定剂并使用0.5%～1%的浓度固定细胞,后用缓冲溶液漂洗,再对细胞进行成像时可获得质量良好的图像.直接在生理溶液中进行观察,成像质量低于使用固定剂的细胞,但保持了细胞的生活原貌.在用原子力显微镜高分辨率观察生理条件下细胞的特点时,需要在制样与观测系统两方面进行改进.     

滑子菇多糖的体外生物活性初步研究

为了研究滑子菇水提粗多糖(PNP)的体外生物活性,对滑子菇多糖的总还原力、清除1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH·)和由Fe2+诱发的脂质过氧化反应的抑制作用进行研究,采用MTT比色法和胎盘蓝细胞计数检测对滑子菇水提粗多糖的体外抑制K562细胞生长作用进行了研究,采用流失细胞术对滑子菇多糖作用人白血病K562细胞后的细胞周期进行了研究。结果表明:滑子菇水提粗多糖PNP具有一定的还原能力;在高质量浓度(800μg/mL)时具有接近于Vc清除DPPH·的能力,达41.28%;PNP对Fe2+诱发的脂质过氧化反应具有一定的抑制作用,并且随着浓度的增加抑制作用逐渐增强,但总的增长趋势不大;MTT实验表明PNP对K562细胞的体外增长有抑制作用,在质量浓度为800μg/mL和作用时间为48 h时,可达到最高的抑制率35.03%。流式细胞术对细胞周期的检测表明滑子菇多糖能够阻滞人白血病K562细胞于G1期。     

结合AFM探测副伤寒沙门氏茵B感染红细胞膜的生物力学特性

采用原子力显微镜和衍射显微术,在纳米精确尺度探测副伤寒沙门氏菌B（Sp B）感染宿主红细胞（RBC）膜微观结构和力学特性,涉及细胞的形变、膜面内剪切模量和弯曲模量。结合这两种单分子测量技术,利用相关的数学模型表述RBC膜对菌体印B的入侵非常敏感。实验结果显示,不同感染期间的SpB寄生菌体,能够引起宿主RBC膜结构改变,形变能力降低,膜剪切模量和弯曲模量显著增加。这些力学特性的变化影响RBC的输氧和循环功能。实验结果表明,印B具有独特的鞭毛调控系统,入侵的毒性菌体寄生蛋白与血影蛋白网络中的运输蛋白有特异结合位点,导致RBC膜骨架网络、波动力学和细胞内、外基质都产生应激反应,这有可能为理解勋曰感染RBC的发病机理和寄生途径提供一些新的实验思路和分析依据。     

亚油酸铂靶向脂质体抗肿瘤特性的研究

用超声波制备了内部包裹亚油酸铂,表面有抗人乳腺癌单克隆抗体ＭｃＡｂＧｐ－１Ｄ８的亚油酸铂靶向脂质体和亚油酸铂非靶向脂质体,研究了这些脂质体绎腹部注射到荷瘤裸鼠之后的组织分布和抑瘤效果,实验结果表明,靶向脂质体亚油酸铂在肿瘤组织的含量明显高于游离亚油酸铂组;在肾,肝,肺,脾,心脏等器官中,前者的含量比后者有所降低,分别在接种癌细胞后６天,１２天和２４天,按６ｍｇ／ｋｇ的剂量分别注射ＰＢＳ,游离亚油酸     

髓鞘碱性蛋白对不同头部基团的髓磷脂质单层膜影响的热力学特性

髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)是中枢神经系统(central nervous system,CNS)髓鞘成熟期的主要蛋白质之一.研究资料表明,MBP与变态反应性脑脊髓炎(allergic encephalomyelitis,EAE)、多发性硬化等多种神经疾病有关,是反映中枢神经系统有无...     

猪肚菇多糖WPG1的相对分子质量测定及原子力显微镜观测

热水提取猪肚菇粗多糖中的酸性多糖WPG1,经凝胶纯化后用高效液相色谱（HPLC）测定其相对分子质量,用气相色谱对其单糖组成进行分析,用原子力显微镜（AFM）对其形态结构进行观测。结果表明：酸性多糖WPG1经SephacrylS-300凝胶层析纯化后得到WPG1-1和WPG1-2这2个组分; 经HPLC分析可知WPG1-1与WPG1-2均为单一组分,其相对分子质量分别为1.7×106和1.6×104; WPG1-1与WPG1-2的单糖组成主要是糖醛酸、甘露糖、葡萄糖和半乳糖; 原子力显微镜观测图分析表明WPG1-1为网链状聚集体结构,WPG1-2呈梭状聚集体,两者均非单链存在。     

激光对干旱胁迫下油松种子萌发的生物学效应

用He-Ne激光以不同的时间辐照油松种子,在聚乙二醇(PEG6000)模拟干旱胁迫条件下对其进行萌发实验。结果表明:激光辐照油松种子在干旱胁迫条件下的发芽率、活力指数、生物量等分别提高32.23%、81.19%和46.58%;萌发期油松种子幼苗保护酶系统的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性显著提高,与对照组相比分别提高28.70%、46.52%。膜脂的过氧化物丙二醛含量明显下降,防止或降低了膜脂过氧化作用对膜的伤害。激光辐照油松种子其保护酶活性的提高,可能是激光促进干旱胁迫条件下种子发芽率、活力指数、生物量等生物学效应增强的原因。     

红细胞膜弹性特性的AFM力曲线测量

人血红细胞生存环境的微小变化都会直接影响到膜骨架蛋白网络形变和细胞膜弹性力学性能的改变。利用原子力显微镜力曲线测量红细胞膜表面弹性,根据相关力。距离曲线图谱信息,分析活性红细胞在不同生理溶液环境中细胞膜弹性、黏附性与渗透脆性等变化特征。实验结果表明,经不同生理溶液制备的红细胞在维持其渗透压平衡条件下,细胞形态特征基本正常,直径约7-8μm。当力曲线图谱表征的膜弹性等力学特性,波动较大且差异明显时,形变恢复作用力变化范围为30-150pN,黏附力变化范围为3.9-35nN。尤其是在探针接近和撤离膜表面过程中,不同程度的多峰锯齿波、压痕深度、黏滞拖拽线程和链状伸展形式的相关力曲线图谱,表征细胞膜表面存在着复杂作用力。在无Ca^2＋／Mg^2＋的D-PBS缓冲液中,通过调节Na^＋,K^＋浓度,改变生理溶液渗透压,红细胞形变显著,出现棘轮状、球形和血影空囊等形态,对应的细胞膜弹性等力曲线图谱信息也相对更为复杂。研究表明红细胞膜弹性特性和膜骨架形变都与生理环境中的溶质（糖类与晶体电解质等）、浓度和渗透压等因素有直接关系。这为深入了解生物膜的结构和动力学提供了证据,也为原子力显微镜应用于红细胞膜病的临床诊断提供了依据。     

莲子多糖的结构分析及抗氧化活性

用热水浸提、乙醇沉淀、Sevag法除蛋白分离得到水溶性莲子粗多糖。经十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）沉淀,硼酸反应以及SephadexG-150层析纯化,得到3种莲子多糖SN1、SN2、SN3。用气相色谱、红外光谱、紫外光谱分析其化学结构。结果表明：SN1主要由葡萄糖、半乳糖组成,含a—D-吡喃葡萄糖环;SN2主链为葡聚糖、并含有其他4种单糖;SN3含7种单糖,并推测是一种酸性氨基多糖或蛋白多糖。体外抗氧化活性实验表明莲子多糖具有一定的清除自由基能力,清除·O2-的能力较强。     

滑菇多糖wPNP-a1的制备及结构分析

利用传统热水浸提法提取滑菇粗多糖(wPNP),进而用季铵盐沉淀法和Sephadex G-150凝胶色谱柱层析对wPNP进行纯化,得滑菇多糖wPNP-a1.以高效液相色谱(HPLC)、傅里叶变换红外光谱(FIR)、气相色谱(GC)、核磁共振(NMR)、环境扫描电子显微镜(ESEM)和原子力显微镜(AMF)等方法分析wPNP-a1的结构,结果表明,滑菇多糖wPNP-a1的分子量为419310 Da,具有一般类多糖的特征吸收峰,糖苷键为β-型,不含乙酰基,由木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,其摩尔比为3.91∶2.77∶1.91∶1;wPNP-a1的分子间排斥力较大,分子间吸引力较小,在云母表面呈直链状分布,链宽23 nm左右,链高0.7～0.8 nm.