来源于麦氏喙枝孢霉的玉米赤霉烯酮水解酶在毕赤酵母中的高效表达及活性分析

【背景】玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)及其衍生物是一群具有雌激素活性的霉菌毒素,广泛存在于被霉菌污染的谷物中,造成食品业和畜牧业的巨大损失。利用专一性高的水解酶进行生物转化可有效去除玉米赤霉烯酮。【目的】构建高效表达玉米赤霉烯酮水解酶的酵母系统,以促进玉米赤霉烯酮水解酶的研究和工业应用。【方法】将来源于麦氏喙枝孢霉(RhinocladiellamackenzieiCBS650.93)的Rmzhd基因转入毕赤酵母中,筛选获得高效表达菌株,通过高效液相色谱分析发酵液中重组酶的性质。【结果】发酵液中Rm ZHD对ZEN的酶活力为16.67 U/m L,对α-ZOL的酶活力为9.85 U/m L。SDS-PAGE检测表达产物的分子量,与理论值30.7k D符合,且发酵上清液蛋白纯度高。Rm ZHD的最适p H值为9.6,最适温度为45°C,并具有较好的耐热性。【结论】研究结果为玉米赤霉烯酮水解酶的异源表达及其潜在的工业应用提供了一定的指导。     

来源于Rhinocladiella mackenziei的玉米赤霉烯酮水解酶的表达纯化与酶学性质

【背景】玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是污染最广泛的霉菌毒素之一,对饲料行业和畜牧业造成了巨大的经济损失。目前研究最为广泛的玉米赤霉烯酮降解酶ZHD101因其热稳定性较差,无法满足工业应用上的要求。【目的】为实现玉米赤霉烯酮降解酶在工业上的应用,寻找酶学性质更突出的ZEN降解酶。【方法】基于对Gen Bank数据库的挖掘,发现一个来源于麦氏喙枝孢霉(Rhinocladiella mackenziei CBS 650.93)的Rmzhd基因,构建p ET-46-Rmzhd质粒。利用大肠杆菌表达体系和亲和层析、离子交换纯化体系对蛋白进行表达和纯化,通过高效液相凝胶色谱分析酶学性质。【结果】发现一个新的ZEN水解酶Rm ZHD,RmZHD在pH 8.6和45°C条件下的活性最高,而且具有较高的耐热性。结构分析表明,较高的盐桥数目和溶剂暴露脯氨酸含量可能是造成其高耐热性的原因。【结论】本研究为促进玉米赤霉烯酮降解酶在工业上的应用打下基础。     

丹参种子的吸水特性及发芽条件研究

丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)种子具有快速吸水的生物学特性,在10℃和25℃下,种子入水10min后吸水量即可达到种子原重的4．5倍左右,至2h吸水量分别达到原重的10．5和11．7倍。温度对种子的吸水速率无明显的影响。丹参种子发芽的最适宜温度在25～30℃,在实验室条件下,采用滤纸床25℃时,一级种子发芽率可达83％,混级种子为74％。同时发现,预先冷冻、PEG—4000引发和GA3浸种处理可以明显提高丹参种子的发芽率。采用超声波处理和PEG引发技术可以使贮藏1a的陈种子发芽率达到45％以上。     

UV-B辐射和干旱对丹参生长和叶片中酚酸类成分的影响

在3种UV-B辐射强度以及3种干旱的单因子以及复合作用下,采用盆栽法对丹参植株生物量、叶面积、株高等形态指标和光合参数以及叶片中丹酚酸B、迷迭香酸、咖啡酸和丹参素含量的变化进行研究。旨在探索西北干旱、半干旱地区强光和干旱对丹参生物量和叶片中酚酸类含量的影响,为丹参的深入开发利用提供依据。结果表明:干旱和UV-B辐射单因子作用均对丹参生长指标有抑制作用,而对酚酸积累有促进作用;相比于干旱,UV-B辐射的影响更加显著。UV-B辐射显著引起植株矮化、叶面积减小、生物量降低、净光合速率降低以及叶片中酚酸类物质含量增加,两种因子复合作用对酚酸类物质积累的效果表现为复杂的加强或交互抗性作用。两种因子单独和复合作用处理下,适宜水分和重度UV-B辐射复合处理(75%T2)最有利于丹参叶片中酚酸类物质积累。     

农杆菌介导的苜蓿次级体细胞胚的遗传转化

采用农杆菌菌株GV3101感染子叶期苜蓿体细胞胚来研究苜蓿次级体细胞胚的遗传转化方法。农杆菌菌株GV3101双相载体pCAMBIA2301,此双相载体具有gus报告基因和nptⅡ抗卡那霉素筛选基因。感染的子叶期苜蓿体细胞在75 mg/L卡那霉素筛选压下,经过一系列诱导培养,最终获得转基因植株。然后,通过GUS组织化学定位分析来检测转基因植株不同器官中的GUS表达,并进一步通过PCR和Southern杂交确定转基因的稳定整合和转化率。结果表明转基因植株不同器官均有GUS表达,整合的nptⅡ基因的拷贝数是1~4,获得的转基因植株的转化率是65.82%。     

TLR9激动剂对约氏疟原虫记忆性T细胞的影响

为探讨TLR9激动剂对疟疾记忆性T细胞的影响,用非致死型约氏疟原虫感染BALB/c小鼠,感染前2 d注射TLR9激动剂Cp Gl826,90 d后进行二次再感染。薄血膜染色法观察虫血症,流式细胞术检测脾细胞悬液中记忆性和活化性T细胞百分率,双夹心ELISA法检测脾细胞培养上清中细胞因子水平。结果发现,再感染前,TLR9激动剂注射组记忆性T细胞百分率(12.98%)高于对照组(10.16%);再感染后,其再感染发生率(50%)和峰值血症水平(0.64%)均低于对照组(70%和0.82%);而活化性T细胞和IFN-γ水平于再感染后1 d即出现了显著升高,分别达到6.62%和372.74 pg/m L,其升高幅度高于对照组(5.04%和216.17 pg/m L)。这表明,TLR9激动剂对约氏疟原虫记忆性T细胞的产生和维持有一定促进作用。     

巨桉林草间作模式中牧草的耐阴生理适应性

研究了不同郁闭度巨桉林下鸭茅、多年生黑麦草和扁穗牛鞭草的耐阴生理适应性.结果表明:随着林分郁闭度的增加,3种牧草的光饱和点(LSP)、光补偿点(LCP)、叶绿素a/b(Chla/Chlb)、游离脯氨酸(Pro)、可溶性糖(SS)和可溶性蛋白(SP)含量呈下降趋势,表观量子效率(AQY)、叶绿素 (Chl)含量、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性有不同程度的提高;随着林分郁闭度的增加,扁穗牛鞭草的日均净光合速率(P_n)呈下降趋势,鸭茅和多年生黑麦草的P_n先增加后下降,且在林分郁闭度分别小于0.54和0.27时,二者的P_n均高于对照;3种牧草的11项生理指标与郁闭度的相关性均达到显著水平（P<0.05）;运用平均隶属函数法对3种牧草的耐阴适应性进行排序,结果为鸭茅＞多年生黑麦草＞扁穗牛鞭草.     

实时荧光核酸恒温扩增技术和液体培养法检测解脲脲原体的比较

目的:对实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)和液体培养法检测解脲脲体(UU)的结果进行评估,以选择更为快速、准确、实用的临床检测方法.方法:共采集180例疑似泌尿生殖道感染患者的尿液及2份拭子样本,一份拭子样本用液体培养,另一份拭子和尿液样本用 SAT 检测.结果:液体培养和尿液 SAT 检测阳性率均为61.1%,拭子SAT 检测阳性率为63.3%,其中16例拭子培养和拭子 SAT 检测结果不一致,18例拭子培养和尿液 SAT 结果不一致,但与拭子培养比较,拭子和尿液 SAT 结果均无统计学意义(P>0.05,kappa>0.75).结论:SAT 检测 UU 可以尿液为样本,检测效能与液体培养和拭子 SAT 基本相当,但尿液 SAT 法取样方便,检测快速,适临床实验室对 UU 的检测.     

禾本科植物单锌指家族基因对逆境应答的研究进展

转录调控是植物生长发育、逆境反应、信号转导、抗病性等一系列基因表达的最主要调控形式,转录因子是参与基因转录水平调控过程的重要反式因子。单锌指(DNA binding with one finger,DOF)转录因子是植物特有的一类转录因子,包含一个C_2-C_2锌指结构,其N-末端保守的DOF结构域是能与DNA和蛋白相互作用的双重功能域,在植物生长发育过程中参与多种生物学过程。尽管已有研究报道DOF家族基因参与植物抗逆响应,但其在禾谷类重要粮食作物中的作用机制还极不明确。本文通过对禾本科植物DOF家族基因系统进化分析及组织表达和诱导表达分析,综述了DOF家族基因参与植物胁迫应答方面的相关研究进展,为进一步深入了解禾本科植物抗逆机制提供重要参考。     

单频刺激声稳态诱发反应的可靠性研究

目的:通过测试正常听力青年男女的听觉多频稳态诱发反应ASSR和单频刺激声稳态诱发反应探求单频刺激声稳态诱发反应的可靠性。方法:选取32名64耳听力正常的青年人作为受试者,对其进行纯音听阈、ASSR及四个0.5、1、2、4k Hz单频刺激声稳态诱发反应阈值测试,并记录0.5、1、2和4k Hz四个频率纯音阈值及ASSR及四个单频刺激声稳态诱发反应阈值。结果:ASSR在0.5、1、2和4k Hz四个频率的反应阈值与纯音听阈阈值相关性系数分别为0.64、0.81、0.79、0.85;0.5k Hz单频刺激声稳态诱发反应阈值与ASSR阈值具有明显统计学差异,其余3个单频刺激声稳态诱发反应阈值与ASSR阈值没有统计学差异,0.5k Hz单频刺激声稳态诱发反应阈值与纯音听阈阈值相关性系数为0.81。结论:ASSR阈值与纯音听阈具有较好的相关性,0.5k Hz单频刺激声稳态诱发反应可以提高0.5k Hz ASSR阈值与纯音听阈的相关性。