胸腺素α原融合蛋白基因表达、纯化与生物学活性

胸腺素α原及胸腺九肽在体内免疫方面有重要作用 .根据大肠杆菌遗传密码的偏爱性 ,设计并人工合成了胸腺素α原及胸腺九肽融合蛋白的特异引物 .以胸腺素α原cDNA为模板 ,应用PCR及分子克隆技术构建了该融合蛋白的编码基因 ,将其插入pBV2 2 0质粒 ,转化大肠杆菌 ,通过温度诱导使该融合蛋白高效表达 ,并对表达产物进行了高效特异性纯化 .运用MTT法初步测定了该融合蛋白的活性 .结果表明 ,该融合蛋白对氢化可的松诱导的胸腺细胞损伤有一定的保护作用 ,为今后进一步研究和应用该融合蛋白奠定了基础     

重组人胸腺素α原体外活性观察

以原核表达并纯化人胸腺素α原后,观察其体外活性,了解到胸腺素α原对胸腺细胞氢化考的松损伤有明显的保护作用,表现在它可明显提高氢化考的松损伤后细胞的数目和ＭＴＴ反应能力,氢化考的松引起胸腺细胞凋亡的发生,并显著降低ＣＤ４＋、ＣＤ８＋单阳性细胞和ＣＤ４－ＣＤ８－双阴性细胞的比例,胸腺素α原不能抑制胸腺细胞凋亡的发生,并可能对胸腺细胞凋亡有促进作用,与空白对照组比较,它也可明显降低ＣＤ４＋阳性细胞的比例,结果表明,胸腺素α原对胸腺细胞氢化考的松损伤的保护作用并非通过抑制凋亡而实现。     

人胸腺素α原cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

采用基因工程方法制取人胸腺素α原获得成功。用２０ｕｇ／ｍｌ植物血球凝集素（ＰＨＡ）和５００Ｕ／ｍｌ重组人白细胞介素２（ＩＬ－２）联合刺激人胎儿胸腺细胞,从中提取总ＲＮＡ,经反转录ＰＣＲ获得了人胸腺素α原ｃＤＮＡ;将之克隆入ｐＵＣ１９中,序列测定表明与已报道序列一致,进一步将之亚克隆入原核表达载体ｐＢＶ２２０,转化大肠杆菌ＤＨ５ａ．观察到在不改变氨基酸编码的前提下,增加胸腺素ａ原上游引物中Ａ、Ｔ含量,可以明显提高胸腺素α原的表达量,同时,不同培养基对它的表达也有影响。胸腺素α原在大肠杆菌中以可溶形式表达,不需复性。初步活性测定显示,它可明显刺激人外周血淋巴细胞Ｅ－玫瑰花结形成率。重组人胸腺素α原在大肠杆菌中表达,为其临床应用及基础研究奠定了基础。     

胸腺素α原对老龄鼠血清中甲状腺激素、糖皮质激素及雌二醇水平的影响

采用放射免疫分析检测胸腺素α原对老龄鼠甲状腺激素、糖皮质激素和雌二醇血清水平的影响。结果表明,与对照组相比,胸腺素α原可明显提高考龄鼠Ｔ３、Ｔ４、Ｅ２、ＡＣＴＨ的血清水平,降低ＴＳＨ和ＧＣ的水平。总之,胸腺素α原可以通过某一未明的机制调节某些激素的血清水平。     

缺锌对大鼠学习记忆功能及其脑区生长抑素和加压素含量的影响

目的和方法：本实验用避暗法检测缺锌对大鼠学习记忆的影响,并用放免法测定不同脑区生长抑素和加压素含量的变化。结果：缺锌使大鼠学习记忆功能明显降低,同时下丘脑、海马和皮层等脑组织生长抑素和加压素含量明显降低。缺锌后补锌可使大鼠学习记忆功能及其海马中生长抑素和加压素含量恢复到正常状况。结论：缺锌降低大鼠学习记忆功能与锌对脑组织尤其是海马内源性生长抑素和加压素代谢的调节有关。