香港巨牡蛎ISSR-PCR反应体系的建立及优化

以香港巨牡蛎（Crassostreahongkongensis）基因组DNA为模板,采用正交设计及单因素比较试验,分别对Mg^2＋、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶和DNA模板浓度的PCR原料进行优化,并通过温度梯度PCR,筛选适宜的退火温度。确立了香港巨牡蛎的最适ISSR—PCR反应体系：25μL反应体系中含PC...     

TaqMan-MGB探针法快速检测对虾Taura 综合征病毒的研究

为建立Taura综合征病毒（Taura syndrome virus,简称TSV）的TaqMan—MGB探针荧光定量RT-PC方法,根据TSV衣壳蛋白基因保守序列设计引物和TaqMan—MGB探针,扩增产物长度为118bp。将PCR产物克隆到pGM—T载体,重组质粒经筛选鉴定、SalⅠ单酶切,得到线性化转录模板DNA,经体外转录获得标准品RNA。以体外转录的RNA作为模板,进行一步法荧光定量RT-PCR反应,根据RNA模板拷贝数与Ct（Cycle threshold,Ct）值制备了标准曲线,制作的标准曲线在2×10^1拷贝／μL≤TSV RNA≤2×10^7拷贝／此的范围内具良好的线性关系,可以用于TSV的定量分析,检测灵敏度为20个拷贝数。特异性、重复性试验结果表明,该方法对SPF对虾组织RNA没有扩增反应,表现出良好的特异性;组内和组间实验变异系数分别为0．32％～1．84％和0．79％-2．71％。利用TaqMan—MGB探针建立检测TSV的一步法荧光定量RT-PCR方法可用于对虾TSV的检测。