AFLP双酶切和连接方法探讨

通过AFLP双酶切和连接技术在植物病原菌分子检测和小麦抗病基因AFLP标记的研究,探讨了酶切时间,酶的用量,缓冲液选择,反应温度等操作条件对此方法重复性和稳定性的影响。     

基因芯片在百合无症病毒检测中的应用

设计百合无症病毒、植物18SrRNA基因的特异扩增引物和各种对照的探针，将探针固定在醛基化玻璃片基上，完成植物基因芯片制备。提取百合种球总RNA，经RT-PCR扩增相应区段并用Cy3dCTP进行标记，用标记的PCR产物与芯片杂交，扫描仪对杂交结果进行扫描，GenePixProd．0软件对杂交图像进行分析。结果从荷兰进口的百合种球中检测出百合无症病毒，证明了该实验研制的植物病毒基因芯片的准确性和灵敏性。     

浅析我国植物检疫领域标准样品研究现状

本文介绍了标准样品研制工作在我国植物检疫领域的发展历程,梳理分析了已发布/立项标准样品的相关数据,结合作者单位在该领域研制标准样品实践经验,对植物检疫领域标准样品存在的问题进行了讨论,以供今后工作参考。     

进境草种种带真菌的检测与初步鉴定

采用平皿测定法对我国北京口岸2014年进境草种高羊茅(Festuca arundinacea)、多年生黑麦草(Lolium perenne)和苏丹草(Sorghum sudanense)携带真菌进行分离培养,利用ITS4和ITS5引物对其内转录间隔区(Internal Transcribed Spacer,ITS)进行扩增,PCR产物纯化后测序并与数据库中的已知序列进行BLAST比对,对种带真菌进行初步鉴定。研究结果表明,不同来源种子携带真菌种类差异较大,从5个国家的7个进境草种批次中共检测出13属21种48株真菌,主要菌群为镰刀菌属(Fusarium spp.)、曲霉属(Aspergillus spp.)、茎点霉属(Phoma spp.)和链格孢属(Alternaria spp.)。基于ITS序列构建系统发育树,能够将所有分离到的真菌鉴定到属,但是在种水平上鉴定有限,不能将细极链格孢(Alternaria tenuissima)、细交链孢(A.alternata)和乔木链格孢(A.arborescens)很好地区分开。本研究明确了5个来样量较大国家的草种带菌情况,ITS基因能够运用于口岸草种携带真菌的初步检测鉴定。     

应用基因芯片检测烟草脆裂病毒

 Total RNA in tulips was extracted by Trizol method. Primers were designed according to the sequences of Tobacco rattle virus and 18S rRNA gene of plant. The corresponding sections were amplified by RT-PCR and the PCR products were labeled by Cy3-dCTP. The probes of plant virus, 18S rRNA gene and comparisons were designed and immobilized on chips. Labeled PCR products were hybridized with the probes and the signals were scanned by scanner and analyzed by GenePix Pro 4.0 software. Tobacco rattle virus was detected from tulips which were imported from Holand. The accuracy and sensitivity of the plant virus gene chip were proved.     

高羊茅根际一种短体线虫的分离与鉴定

高羊茅(Festuca elata)是草坪草中绿期最长的一个草种,在草坪建植中具有重要作用。一些病害随着高羊茅种植范围的不断扩大而逐渐频发,对草坪造成极大经济损失。本研究通过调查北京市高丽营镇高羊茅斑块状枯死的原因发现,导致高羊茅枯死的是高羊茅根际优势植物寄生线虫。采用贝尔曼漏斗法分离了侵染北京地区高羊茅上的线虫,结合唇环、受精囊、食道、V值等形态学鉴定方法,证明高羊茅草根际优势植物的寄生线虫均为一种短体线虫,确定为斯克里步纳短体线虫(Pratylenchus scribneri)。线虫ITS和28S序列的PCR扩增及Gen Bank序列比对后发现,其与国外发现的P.agilis及P.scribneri序列相似度为93%,亦确证该线虫为斯克里步纳短体线虫。     

密执安棒形杆菌的DNA条形码基因筛选与评价

密执安棒形杆菌是一种重要的植物病原细菌,其包含了能引起不同植物病害的5个亚种。近年来迅速发展起的DNA条形码技术给植物病原细菌快速准确的检测鉴定提供了新思路,本文对棒形杆菌属的4条候选DNA条形码基因进行PCR扩增测序,并从扩增及测序成功率、种内及种间遗传距离、barcoding gap及NJ树等几个方面进行比较,结果表明gyr B基因最适合进行该属内种及亚种的区分,cpn60基因可作为该属分类鉴定的有效补充。     

番石榴果实腐烂病诊断与鉴定

本文报道了从台湾进口的番石榴果实的腐烂组织中分离培养到一种病原真菌,经过病原菌形态观察和培养性状等方面的研究表明：木防己拟盘多毛孢菌（Pestalotiopsis cocuuli Guba）是导致果实腐烂的致病菌.     

从荷兰进口植物中检出南芥菜花叶病毒

南芥菜花叶病毒Arabis mosaic virus(ArMV)是豇豆花叶病毒科Comoviridae线虫传多面体病毒属Nepovirus成员,主要分布在荷兰、比利时等欧洲国家和美国、加拿大、澳大利亚、新西兰、南非、日本,我国尚未有报道。该病毒通常采用血清学和鉴别寄主方法进行检测,但该方法较易出现假阳性,存在检测时间长,准确性和灵敏度较低等问题。近几年发展起来的基因芯片技术已经广泛用于人类病毒如乙肝病毒、人类免疫缺陷病毒、严重急性呼吸系统综合征病毒[1～3]等医学诊断和动物病毒如口蹄疫、禽流感[4]的检测和检疫,而应用基因芯片检测植物病毒实例的报道…