鸡毒支原体灭活疫苗效力检验气囊注射攻毒方法的研究

鸡毒支原体灭活疫苗效力检验采用的喷雾攻毒方法所需菌液量大,结果易受喷雾时间和器械设备影响。为了探索一种简便、易行且结果稳定的新方法,本研究冻干了一批攻毒用菌株鸡毒支原体R株,对其性状、纯粹、真空度、剩余水分、培养特性、特异性、活菌计数和均一性等进行检定,结果全部符合规定。将其稀释成不同活菌数,采用气囊注射方式攻毒,观察试验结果并与《中国兽药典(三部)》中的喷雾方法进行比较。结果表明,建立的气囊注射攻毒法稳定、准确,通过5批次疫苗效力检验试验比较,与喷雾方法结果无显著差异,可为该类疫苗攻毒方法优化提供新思路。     

不同地区鸡毒支原体的分离鉴定及药物敏感性研究

【目的】了解中国不同地区鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum，MG）的流行和耐药情况，为禽支原体病的监测与防控提供科学依据。【方法】在广东、福建和安徽3个省份疑似MG感染的养殖场采集的43份气囊样品中分离培养和纯化MG流行菌株，并对其进行培养特性观察、生化及染色鉴定、血清学特异性鉴定、PCR测序分析、致病性试验和对常见抗菌药物敏感性试验。【结果】分离到3株疑似MG，均可使培养基颜色变黄，在固体培养基上呈典型"煎蛋"样菌落，可发酵葡萄糖，不水解精氨酸，不能利用尿素，符合MG培养特性。姬姆萨染色观察菌体形态、血清学特异性鉴定结果进一步证实分离株为MG。mgc2基因测序结果显示，3株分离株与强毒代表株亲缘关系更近。致病性试验结果显示，3株分离株与MG感染临床症状一致，发病率为70%~90%，致病力较强。药物敏感性试验结果显示，3株分离株均对恩诺沙星、替米考星、土霉素、氟苯尼考耐药，对泰万菌素和沃尼妙林均敏感，对大观霉素、金霉素、泰乐菌素和泰妙菌素的敏感性具有地域差异：福建株对大观霉素表现明显耐药，安徽株对泰妙菌素表现耐药，而广东株对大观霉素、金霉素和泰妙菌素均较敏感。【结论】本试验成功分离到3株MG，致病力较强，且均存在一定程度耐药，对药物的敏感程度有地区性差异，今后仍需加强各地区MG的药物敏感性监测，减少耐药性的产生与扩散。     

兽药注册技术要求国际协调会成员国家或地区自家疫苗的监管控制

传染病对畜牧业生产构成巨大威胁,自用疫苗的合理使用可以帮助控制和预防畜/禽群中的传染病,从而保障动物健康,护航养殖发展。伴随对于加强自用疫苗注册监管呼声日益增强,本文从总体情况、法规指南、批准类型、评审材料要求、使用限制等几个方面,对VICH成员国家关于自用疫苗的监管控制进行梳理,为构建我国兽用自用疫苗的审批监管制度提供参考。     

一株犬副流感病毒CPIV-BJ01株全基因组测序与其遗传变异分析

为分析本实验室分离的犬副流感病毒CPIV-BJ01株全基因组序列与其遗传变异情况,对CPIV-BJ01株全长进行分段扩增并测序,拼接获得全基因组序列,与GenBank发布的27株副流感病毒5型分别进行全基因组和包膜糖蛋白(F、SH和HN)核苷酸及氨基酸序列的相似性比对,分析其遗传进化关系。结果显示,CPIV-BJ01毒株与犬源PIV5 1 168-1亲缘关系最近,核苷酸相似性为99.9%,氨基酸相似性为99.8%。CPIV-BJ01的F和HN基因序列变化较为保守,核苷酸和氨基酸变化均在4%以内,其中F蛋白的氨基酸变化形成一处新的O-糖基化位点;CPIV-BJ01株的SH基因序列与其他演化分支毒株差异显著,核苷酸相似性为84.4%~97.0%,氨基酸相似性为31.8%~95.6%。综上,CPIV-BJ01株基因组序列与前人报道的毒株相比,在F、HN基因和部分非编码区存在核苷酸或氨基酸序列的改变,同时F蛋白存在糖基化修饰的改变,均为该毒株所特有,该研究结果丰富了中国CPIV流行株的基因组信息。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒检测技术的研究进展

正猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)被认为是世界范围内养猪业最为重要的传染病之一。2006年我国多个省份的养猪场出现了高致病性猪繁殖与呼吸综合征(PRRS变异而来)疫情,使养猪业蒙受了重大的经济损失。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为单股正链核糖核酸病毒,属于动脉炎病毒科、动脉炎病毒属。该病毒可危害各种日龄的猪,并且临床表现多     

兽用生物制品活菌计数方法改进的研究

活菌计数是细菌类活疫苗质量标准中重要的检验参数,与疫苗的保护效果显著相关。现行兽用细菌类生物制品检验中的活菌计数方法部分步骤易产生误差,试验成立标准表述笼统,最终影响到细菌活疫苗质量评判。因此,从检验实际需求出发,参照国内外活菌计数相关规程,通过比对试验研究,对“活菌计数法”中平板干湿程度、菌液滴加方法、菌液分散方法进行改进,提出及验证以标准差(s)衡量结果的有效性并提供参考值。改进后的方法要求更明确,普适性更高,从而减少了操作误差,提升了“活菌计数法”的规范性、可操作性及检验结果可靠性。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征(JXA1-R株)活疫苗病毒含量荧光定量PCR方法的建立

为了更加快速、准确地测得高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗的病毒含量,根据GenBank中PRRSV的保守基因序列设计合成了引物和探针,对反应条件进行优化,建立了高致病性猪繁殖与呼吸综合征（JXA1-R株）活疫苗病毒含量的荧光定量PCR方法。用该方法测定疫苗样品的病毒含量,每头份稀释100倍后,均值Ct值为17.08,病毒拷贝数均值为4.61?107copy/μL。将其与传统方法结果进行相关性分析,相关系数r=0.83,证明两种方法有很好的相关性。但是本文中只是应用该方法测定疫苗病毒含量,若要应用于疫苗效力的测定,还需要对其正确使用。     

猪丹毒疫苗效力检验攻毒冻干培养物的制备与应用研究

为提高猪丹毒疫苗效力检验结果的稳定性、一致性及工作效率,冻干制备了效力检验攻毒用猪丹毒丝菌培养物,对性状、纯粹、真空度、剩余水分、活菌计数、均一性等进行检测,测定在不同温度下短期存放的活菌数,监测在低温下长期保存的活菌数和毒力,并将其应用于猪丹毒活疫苗和灭活疫苗的效力检验。结果显示,该攻毒培养物性状良好,纯粹生长,真空度合格率98.2%,剩余水分小于3.5%,活菌数均值为3.8×10~9 CFU/瓶,瓶间活菌数变异系数(C.V)为10.0%,37℃以下温度存放2.5～3.0 h活菌数稳定,变异系数(C.V)为4.9%,-20℃保存36个月活菌数为3.0×10~9 CFU/瓶,每只小鼠注射6 CFU活菌5/5死亡,应用于猪丹毒灭活疫苗和活疫苗效力检验结果与常规方法一致。结果表明,该猪丹毒丝菌冻干培养物状态良好,活菌数和毒力较为稳定,能够满足猪丹毒疫苗效力检验攻毒使用,且提高了检验结果的一致性、稳定性及工作效率。     

猪支原体肺炎疫苗效力检验常见问题与质量控制

为了更规范、标准地评价猪支原体肺炎疫苗，本研究对近年来猪支原体肺炎疫苗检验进行了系统性分析。结果发现，效力检验作为疫苗质量的核心内容，是检验中最易出现问题参数。对效力检验相关方法、常见问题进行分析，有助于研发过程中规避问题，提高疫苗质量继而保障养殖业发展。     

国内外兽用生物制品支原体检验方法的比较分析

为探讨优化我国兽用生物制品支原体检验方法的可能性,本文从支原体检验方法、培养基种类及培养条件、培养基质量控制和检验操作方法四个方面,对中国、美国和欧盟兽用生物制品支原体检验方法进行系统比较,分析不同方法之间的差异及优劣。结果发现,与美国《联邦法规》第九卷及《欧洲药典》相比《中国兽药典》支原体检验方法有培养基种类及配方成分全面等方面的优势,但在培养基质量控制方法、检验过程控制、检验标准制定等方面还存在不足。正视这些差距与不足,提出改进和验证的方向,可为我国兽用生物制品支原体检验的优化提供参考。