一株乳源松鼠葡萄球菌ExhC基因的克隆及序列分析

松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri,S.sciuri)是引起奶牛乳房炎(Cow Mastitis)的病原菌之一,其主要致病因子是该菌产生的脱皮毒素C(Exfoliative Toxin C,ExhC)。为了深入了解该基因的分子特征,本试验对从乳房炎患牛牛乳中分离的一株松鼠葡萄球菌ExhC基因(Genbank登录号:MT845354)进行了克隆及序列分析。按GenBank收录的ExhC基因设计并合成引物,利用PCR对ExhC基因进行扩增,并对扩增后的ExhC基因进行测序及分析。结果表明,松鼠葡萄球菌ExhC基因的开放阅读框序列长度为837bp,共编码278个氨基酸。通过Blast模块对ExhC基因进行同源性分析,得到5株相似序列,与ExhC基因序列相比同源性均为99.04%。系统进化树图指示该基因与其余五株相似序列属于不同的分支,遗传距离较远。利用TMHMM对松鼠葡萄球菌ExhC基因837bp序列跨膜区进行预测,结果显示ExhC蛋白的第1~277位氨基酸在细胞膜外,5~25位氨基酸所在位置为跨膜区。通过ExhC氨基酸序列分析和ExhC蛋白二级结构、三级结构预测,推断第97位氨基酸插入Asn以及其他位点氨基酸的突变可能会导致松鼠葡萄球菌功能区变化和毒株毒力的相对变化,这将给松鼠葡萄球菌致病机理的研究奠定基础。     

口蹄疫O-亚洲Ⅰ型双价灭活疫苗田间免疫试验

本试验于2006年8月15日,对在永川区境内未进行过免疫的32头仔肉牛、50头奶牛、50只羊,在40度高温下注射了口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型双价灭活苗,并采用国家规定的抗体检测方法(IHA和液相阻断BLISA),对免疫前和免疫后21天的应试动物血清进行了抗体检测。试验结果表明:注射该疫苗后,应试动物无一出现不良反应或死亡,免疫效果确实。     

口蹄疫O-Asia Ⅰ型双价灭活疫苗田间免疫试验

笔者通过田间免疫试验,对口蹄疫O-AsiaⅠ型双价灭活疫苗在安全性、免疫效果及免疫副反应等方面进行了综合评价。现将试验过程简述如下,供参考。     

仔猪阉割对免疫效果的影响

本试验对重庆市永川区境内的30头仔猪,在常温下作高致病性猪蓝耳病、猪瘟和口蹄疲疫苗田间免疫试验。采用国家规定的抗体检测方法(IHA),检测仔猪体内的猪瘟和口蹄疲抗体。分析仔猪在阉割时和阉割前后2天注射高致病性猪蓝耳病疫苗对猪瘟和口蹄疲的免疫效果的影响。结果表明:受试仔猪在阉割时注射高致病性猪蓝耳疫苗对猪瘟和口蹄疫在免疫效果上影响不显著(P>0.05)。     

口蹄疫O-Asia I 型双价灭活疫苗田间免疫试验

笔者通过田间免疫试验,对口蹄疫O-Asia I型双价灭活疫苗在安全性、免疫效果及免疫副反应等方面进行了综合评价.现将试验过程简述如下,供参考.     

初探仔猪阄割打三针的免疫新路子

为找寻一条仔猪阄割打三针的免疫新路子，笔者对永川区的来苏、大安、朱沱三个镇的90头仔猪，在7-9月做高致病性猪蓝耳病疫苗田间免疫试验，通过对仔猪阄割前后与阄割时注射高致病性猪蓝耳病疫苗的比较，观察受试仔猪的反应，分析免疫安全性。结果表明：仔猪阄割前后与阄割时注射高致病性猪蓝耳疫苗对受试仔猪在免疫安全性上影响不显著（P〉0.05），说明仔猪阄割打三针的免疫新路子确实可行。     

基于NS4蛋白的蓝舌病病毒间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

旨在建立蓝舌病病毒（BTV）血清学ELISA抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的BTV NS4重组蛋白为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种BTV重组NS4蛋白的间接ELISA抗体检测方法。SDS-PAGE结果显示,获得大小约52 ku的NS4重组融合蛋白,主要在上清中存在,Western blot显示,纯化后的重组蛋白具有良好的抗原性。通过方阵试验进行了ELISA反应条件优化,确定了重组蛋白抗原最佳包被量为3.0 μg·孔^-1;血清最佳稀释倍数为1：200,酶标二抗最佳工作浓度为1：4 000,临界值分别为0.29和0.35。上述以NS4蛋白作为包被抗原建立的BTV抗体间接ELISA方法检测敏感性可达1：1 600;批内和批间重复性变异系数均小于10%;检测76份重庆地区牛群血清样品,阳性符合率为98%,阴性符合率为100%。本研究建立的间接ELISA方法为临床BTV血清抗体检测及BTV血清流行病学调查奠定了基础。