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实验应用凝胶过滤和盐析等方法直接从牛初乳中分离纯化IgG,并应用化学方法断裂回收IgG轻链。分离纯化获得分子量约27.66 ku的IgG轻链蛋白溶液,蛋白质含量为0.105 mg.L-1,浓缩后免疫家兔,获得抗轻链抗血清,效价>11∶6,免疫双扩散和免疫电泳均为特异性条带,表明得到了纯化的IgG轻链及其特异性抗血清。 相似文献
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鹅细小病毒VP1与VP3非重叠序列的克隆与原核表达 总被引:8,自引:2,他引:6
根据鹅细小病毒GPVH1株基因组核苷酸序列设计了一对引物,对其结构蛋白VP1与VP3非重叠核苷酸序列进行PCR扩增,并克隆到表达性载体pGEX-6p-1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆,并转化到大肠杆菌BL21(ED3)plysS进行原核表达,并用SDS—PAGE鉴定,结果表明融合蛋白在表达性细菌BL21中重获得了高效表达。 相似文献
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牛IFN-α基因高效表达及纯化的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
基于对RNA二级结构的预测和密码子偏性计算,通过计算机辅助软件进行牛IFN-α基因优化,经人工合成优化后的基因与pWL表达载体连接后诱导表达,并对表达条件进行优化。SDS-PAGE分析表明,其产物分子量约为17ku,最优表达条件下蛋白表达量占菌体总蛋白的33%,表达产物以包涵体形式存在。经过包涵体溶解、初步复性后利用CM Sepharose Fast Flow离子交换层析柱作为蛋白质复性系统,采用梯度法进行牛α-干扰素包涵体蛋白质的纯化复性。结果表明,梯度离子交换层析法能有效地复性牛α-干扰素包涵体,复性后的重组牛α-干扰素的纯度达95%,通过离子交换层析柱纯化和复性后,重组牛α-干扰素在MDBK/VSV细胞系上的抗病毒活性为5.56×10^6 u/mg。 相似文献
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猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段克隆序列分析及原核表达 总被引:1,自引:0,他引:1
猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白可诱导中和抗体,是主要保护性抗原,N端抗原位点B和C在猪呼吸道冠状病毒(PRCV)中缺失。体外扩增TGEVS基因B、C抗原位点357bp片段(TS)。核苷酸序列与氨基酸同源性分析表明该片段较为保守。将TS克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,转化大肠杆菌中。经IPTG诱导后,SDS—PAGE分析目的蛋白与谷胱苷肽硫转移酶(GST,大小约为26ku)融合后大小约为40ku,目的蛋白分子量约为13.2ku,优化表达条件后表达量达37.9%。 相似文献
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鹅细小病毒NS1基因的克隆及原核表达 总被引:4,自引:0,他引:4
本研究根据GenBank发表的GPVB株全基因核苷酸序列,设计了1对用以扩增GPV主要非结构蛋白NS1基因的引物。通过PCR技术,扩增出NS1完整基因片段1.9kb。将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行序列测定及分析,结果表明:GPV H1株NS1基因全长1884bp,编码627个氨基酸,与国外已发表的B株核苷酸序列同源性为98.15%。同时将该目的基因正向插入到GST融合蛋白原核表达载体PGEX-6P-1的BamH1多克隆位点,构建了GPV NS1的原核表达载体,成功的表达了约97KD的NS1融合蛋白。 相似文献