比格犬胫神经皮层体感诱发电位正常值研究

为了测定比格犬胫神经皮层体感诱发电位(somatosensory evoked potential,SEP)的波形及其潜伏期和波幅的正常值。选用15只健康比格犬,在异氟烷吸入麻醉状态下,使用肌电诱发电位仪电刺激其胫神经,将自制参考电极和记录电极分别放置于头部Fz处和Cz处记录SEP波形。结果表明:15只比格犬刺激左右侧胫神经均可记录到清晰的双向SEP波。刺激左侧胫神经引发的波形潜伏期为P(21.71±1.978)ms、N(32.61±2.568)ms、P-N(10.90±1.338)ms,其变异系数分别为9.11%、7.87%、12.88%;波幅为(2.762±1.230)μV,变异系数为41.47%;刺激右侧胫神经引发的波形潜伏期为P(21.49±1.985)ms、N(32.55±2.359)ms、P-N(11.06±1.153)ms,其变异系数分别为9.24%、7.25%、10.24%;波幅为(2.634±1.092)μV,变异系数为44.55%。潜伏期和波幅左右侧差异均不显著(P0.05)。对正常比格犬胫神经皮层SEP的测定,获得了清晰的SEP波形及各波潜伏期和波幅的正常值,印证了潜伏期的稳定性优于波幅的稳定性,可以为实验室研究犬病理状态下的SEP和宠物临床应用SEP诊断疾病提供参考依据。     

磷酸二酯酶在猪卵巢的表达与相关中药对其活性的影响

为了测定猪卵巢组织磷酸二酯酶（PDE）同工酶基因表达类型与活性规律，研究相关中药的作用机理，为繁殖障碍性疾病治疗积累资料。作者提取中国实验用小型猪卵巢组织总RNA，应用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定PDE同工酶在其中的表达。选取催情散等复方及单味药，运用高效液相色谱法（HPLC）根据作用前后cAMP/cGMP含量的变化，分析对PDE活性的影响。结果检测的18个PDE亚型中除PDE4C外，PDE 1A、1B、1C、2A、3A、3B、4A、4B、4D、5A、7A、7B、8A、8B、9A、10A、11A mRNA在卵巢组织中均有表达。卵巢组织PDE活性较强，其中cGMP-PDE活性大于cAMP-PDE活性。催情散对卵巢组织cGMP-PDE活性均有较强的抑制作用，其中单味药淫阳藿作用最强。研究结果表明卵巢组织含有丰富的PDE同工酶，在通过环核苷酸水平卵巢机能调节中发挥着重要作用，中药催情散的作用与显著抑制cGMP-PDE活性有关。     

犬瘟热患犬中性粒细胞cAMP PDE活性变化及中药作用研究

研究犬瘟热患犬中性粒细胞(PMN)中环磷酸腺苷-磷酸二酯酶（cAMP-PDE）的活性变化及中药对其活性的体外调节作用，为抗炎药研究和病毒性炎症的中药治疗积累资料。提取犬瘟热患犬（n=9）和正常犬(n=6)的中性粒细胞制备cAMP-PDE样品，通过高效液相色谱(HPLC)法测定其活性及中药对其活性的影响。结果显示，犬瘟热患犬组中性粒细〖JP2〗胞cAMP-PDE活性（18.55%±2.66%）显著（P<0.05）高于正常组（11.54%±5.16%）。解表药等5类114味中药中芦根（77.27%）、胡黄连（70.41%）、女贞子（65.50%）、香薷（65.16%）、贝母（61.43%）、黄芩（60.67%）、淫羊藿（60.34%）、黄芪（59.13%）、青蒿（56.93%）、秦皮（55.55%）、辛夷（55.03%）、甘草（54.67%）、牛蒡子（53.40%）、麻黄（53.32%）14味对cAMP-PDE活性具有明显抑制作用。结果表明，中性粒细胞cAMP-PDE活性在犬瘟热患犬炎症过程中具有重要作用，对cAMP-PDE活性有明显抑制作用的中药对其炎症可能具有疗效，同时，中药抑制中性粒细胞中cAMP-PDE活性可能是其抗炎作用机理之一。     

清热中药对大鼠肺及其微血管内皮细胞磷酸二酯酶活性的影响

采用组织贴块法培养分离大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),以高效液相色谱(HPLC)检测环核苷酸(cAMP)在酶反应前后磷酸二酯酶(PDE)的变化计算PDE活性,并分析药物对其影响,为研究PMVEC特异性PDE抑制剂和清热药作用机理积累资料。结果显示:分离培养经CD31鉴定的PMVEC,其酶量在5~20μL范围内与PDE活性存在良好的线性关系(r=0.9929);17味入肺经清热药均对肺组织cAMP-PDE酶活性有不同程度的抑制作用,其中黄芩、黄药子、青蒿抑制率较高,对肺组织酶分别为:75.37%,72%,61.26%,对PMVEC分别为:66.1%,63.54%,59.39%,结果提示以cAMP-PDE活性为指标,有望筛选出其特异性PDE抑制剂,并揭示入肺经清热药的作用机制。     

中草药对磷酸二酯酶4活性影响的初步研究

以对磷酸二酯酶4(PDE4)活性的影响为指标,筛选PDE4选择性中草药调节剂,为中兽医药理学研究和临床调节环核苷酸水平提供依据。以cAMP为底物,加入由猪嗜中性粒细胞中提取的PDE4与中草药样品, 用HPLC法检测反应后的cAMP含量,计算中草药对酶活性的影响,正数为抑制作用,负数为促进作用。54味中草药里,对PDE4活性具有抑制作用的有38味,具有促进作用的有16味。部分所选中草药对PDE4活性具有较强的抑制作用,部分具有较强的促进作用,提示从中草药里筛选特异性PDE4活性调节剂是可行的。     

白芍制剂对中性粒细胞相关功能及磷酸二酯酶活性的影响

 【目的】以猪中性粒细胞为靶细胞,研究白芍制剂对其相关功能（呼吸爆发和弹性蛋白酶释放）及磷酸二酯酶活性的影响。【方法】中性粒细胞分离纯化后,以细胞色素C还原法检测中性粒细胞呼吸爆发,以弹性蛋白酶底物的减少反映弹性蛋白酶的释放量,以HPLC检测底物cAMP的变化反映磷酸二酯酶的活性等。【结果】白芍制剂呈剂量依赖性抑制中性粒细胞的呼吸爆发（P＜0.001）,3个不同浓度的抑制率分别为33.15%、45.96%和62.22%;对弹性蛋白酶的释放在低浓度时表现抑制作用（P＜0.05）,抑制率为23.22%,在高浓度时表现促进作用;对中性粒细胞磷酸二酯酶活性具有抑制作用,低、高浓度抑制率分别为13.24%和25.87%（P＜0.01）;HPLC指纹图谱分析表明白芍制剂主要存在5种成分。【结论】白芍制剂对猪中性粒细胞呼吸爆发具有明显的抑制作用,对弹性蛋白酶释放在低浓度有显著抑制作用,其作用机制可能与白芍制剂对磷酸二酯酶活性的抑制有关。     

慢性心阳虚大鼠模型制备改良研究

[目的]对现有慢性心阳虚大鼠模型加以改良,制备更符合中(兽)医证候特点的心阳虚动物模型,为温阳方剂的作用机理研究积累资料.[方法]以盐酸多柔比星(主要成分为阿霉素)诱导法联合冰水浴寒冷刺激制备慢性心阳虚大鼠模型,耳温枪测量耳洞温度,生化分析仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)四种心肌酶活性,ELISA法测定血浆脑利钠肽(BNP)含量,多道生理信号采集处理系统监测心电图和心率变化,常规方法制作心脏切片并观察心肌病理学变化.[结果]与对照组相比,制备的慢性心阳虚模型大鼠出现精神萎靡、活动减少、身体蜷缩和扎堆等阳虚症状,且体温在造模后期的第28、35和42天明显降低(P＜0.01);在造模第42天,心肌酶ALT、AST、CK、LDH活性显著升高(P＜0.05/P＜0.01),血浆BNP含量显著升高(P＜0.05);心电图QRS间期在14、21和35天显著延长(P＜0.05/P＜0.01),ST段在第35、42天明显抬高(P＜0.01),心率在14、21、28、35和42天明显降低(P＜0.05/P＜0.01);心肌组织出现空泡变性、心肌变性及轻度单个核细胞浸润.[结论]改良的盐酸多柔比星联合冰水浴寒冷刺激法可制备出具有阳虚症状和心脏损伤特征的慢性心阳虚大鼠模型,造模成功率提高.     

羊患附红细胞体病后血清NO、红细胞免疫功能的变化

在国内,对动物附红细胞体病的报道越来越多[1],而研究其发病机理的则很少.羊患附红细胞体病后其血清NO、红细胞免疫功能有何变化尚未见报道.此研究旨在探讨动物患病后,血清NO及红细胞免疫功能的变化,从分子和细胞水平上揭示其可能的发病机理并为防治该病提供理论依据.     

猪嗜中性粒细胞cAMP磷酸二酯酶的提取与活性检测

目的:提取动物体的cAMP磷酸二酯酶(PDE),并检测其活性,为兽医临床研究PDE活性的生理病理变化和中西药物对PDE活性调节作用建立实验方法。方法:猪血经过葡聚糖沉降,淋巴细胞分离液分离,特殊分离液洗涤和红细胞溶胀后,获得嗜中性白细胞。嗜中性白细胞破碎后释放PDE,通过反相高效液相色谱(RP HPLC)法测定反应体系中cAMP的含量,根据底物(cAMP)的减少量,确定嗜中性白细胞中PDE活性。结果:经显微镜计数嗜中性粒细胞纯度达95%;酶量在10～40μl间对cAMP的分解率为9 90%～31 39%,与PDE活性之间存在直线相关关系(r=0 99)。结论:猪嗜中性粒细胞中含有高纯度、高活性的cAMP PDE;高效液相色谱法可以准确测定PDE反应前后cAMP含量的变化;两种方法结合可以作为兽医临床研究机体PDE活性变化和中西药物对PDE活性调节作用的新方法。     

猪中性粒细胞磷酸二酯酶基因表达及活性研究

 【目的】通过对猪中性粒细胞磷酸二酯酶（PDE）基因表达、活性及特异性抑制剂实验检测，研究其存在的主要PDE亚型及在体外的活性，为探讨PDE在中性粒细胞的分布、活性变化及对cAMP、cGMP调节与中性粒细胞功能关系提供依据。【方法】采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测PDE基因在猪中性粒细胞的表达，以高效液相色谱（HPLC）检测环核苷酸在PDE反应前后的含量变化，计算PDE活性。【结果】在检测的18个PDE亚型中，PDE1B、2A、3A、3B、4A、4B、4C、4D、5A、7A、7B、8A、8B、9A、11A 共15个PDE mRNA在猪中性粒细胞表达，特异性抑制剂实验表明PDE4、PDE5分别为水解cAMP、cGMP的主要PDE亚型；cAMP/cGMP-PDE在10～40 μl范围内，与其活性存在良好的线性关系（r＝0.9929/0.9992）。【结论】猪中性粒细胞至少存在15个PDE亚型，其中PDE4、PDE5为主要存在的2个亚型，PDE样品量在一定范围内与其活性存在良好的线性关系，可作为筛选PDE型中性粒细胞功能调节剂的方法。