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[目的]为了获得重组柔嫩艾美耳球虫微线4N端蛋白.[方法]根据Genebank设计柔嫩艾美耳球虫微线4N端基因特异引物,RT-PCR扩增该基因,经Blast与Genebank公布的该基因比对,而后构建该蛋白的真核表达载体pPICZaA/EtMIC4N,用毕赤酵母表达系统小规模表达该蛋白,利用SDS-PAGE和Western Blot对表达的蛋白鉴定,再以摇瓶的方式进行大规模表达.[结果]RT-PCR扩增获得柔嫩艾美耳球虫微线4N端基因序列,大小为773 bp,经比较,与目的基因开放阅读框相似度99.5%,其中有4个碱基发生突变,1个gap.PCR证实成功构建真核表达载体,电转后的毕赤酵母用甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot发现在上清中有45 kD的条带,说明成功表达该蛋白,且该表达系统可持续获得较高纯度的目的蛋白,以摇瓶的方式进行大规模表达,每升能够纯化到约10 mg的目的蛋白.[结论]毕赤酵母成功表达重组柔嫩艾美耳球虫微线4N端蛋白,为该蛋白免疫原性的研究奠定基础. 相似文献
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以28日龄鸡为试验动物,在饲料中添加不同剂量马杜拉霉素(0、5、6、7、8、9和10mg/kg),对实验性马杜拉霉素中毒鸡的临床症状、剖检变化和组织病理学变化进行观察。结果马杜拉霉素急性中毒鸡表现腹泻、食欲下降、渴欲增加,翅膀下垂、腿无力或麻痹;剖检可见病鸡肝淤 血、轻度肿胀、呈微黄色;病理组织学变化为肝脂肪变性及心肌和腿肌出血。 相似文献
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粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因的克隆、原核表达及生物活性鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
为了探讨粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)在免疫中的作用,根据GenBank上发表的鸡GM-CSF基因序列设计特异引物,采用RT-PCR法对球虫免疫后的海蓝灰蛋鸡盲肠扁桃体中GM-CSF基因进行克隆和序列分析;设计GM-CSF原核表达引物,原核表达GM-CSF融合蛋白,通过菌体裂解,包涵体的洗涤、溶解、复性后,过Sepharose4B柱纯化融合蛋白,采用抗病毒试验和淋巴细胞增殖试验检测表达蛋白的生物活性。结果显示,从人工感染柔嫩艾美耳球虫的海蓝灰蛋鸡盲肠扁桃体中扩增到了435bp的DNA片段;序列分析表明其与GenBank中报道的鸡GM-CSF序列仅有1个碱基的差异,与哺乳动物的同源性在35.2%~45.4%;原核表达了海蓝灰蛋鸡GM-CSF,分离纯化的融合蛋白在抗病毒活性试验和淋巴细胞增殖试验中证明具有一定的生物学活性。 相似文献
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随着中兽药制剂的不断发展,有着悠久历史的透皮制剂受到越来越多的关注。中兽药是纯天然物质,具有无残留、不易产生耐药性、副作用低等特点;透皮给药操作简便、无首过效应、不良反应少,药物吸收不受消化道pH、食物和药物在肠道停留时间等复杂因素的影响。发展中兽药透皮制剂,是现代中兽药制剂发展的趋势。论文主要从中兽药剂型发展、中兽药透皮技术的研究、透皮制剂在中兽药中的应用实例等对近年来中兽药透皮制剂的应用进行了概述,以期为中兽药透皮制剂的研发提供依据。 相似文献
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作者采集了5个不同地区发生球虫病鸡场的粪便,分离柔嫩艾美耳球虫不同地理株,为了检测它们对药物敏感性,选择常用的预防球虫病药物马杜拉霉素、莫能菌素、地克珠利,以ACI作为指标,进行了的药物敏感试验。结果表明,北京-1、潍坊和上海株对饲料中添加5 mg/kg马杜拉霉素产生了部分耐药性,而北京-2和北京-3两个虫株对其则敏感;北京-1、北京-2和潍坊株对100 mg/kg莫能菌素部分耐药,上海株完全耐药,而北京-3株对其敏感;北京-1、北京-2、潍坊株和上海株对1.0 mg/L地克珠利产生了部分耐药性,而北京-3株对它敏感。 相似文献