红肉蜜柚 PDR 型转运蛋白基因的发掘及 CmPDR11-2 表达与耐草甘膦初步分析

基于红肉蜜柚 RNA-seq 数据库,筛选出 50 个 ABC 转运蛋白家族基因,其中包含 11 条 PDR 型基因。对11 条柚 PDR 基因进行命名和生物信息学分析。同源性分析结果表明：CmPDR11-2 编码的氨基酸序列与拟南芥中转运百草枯除草剂的 AtPDR11 基因同源性最高,达 69.25%,利用 RT-PCR 技术克隆得到 CmPDR11-2 的 ORF 序列。该序列长度为 4 371 bp,编码一个含有 1 456 个氨基酸的蛋白质,分子量 165.138 03 ku,该蛋白属于稳定的亲水性蛋白,无信号肽,具有 12 个跨膜结构,定位于细胞膜。实时荧光定量 PCR 结果表明,草甘膦除草剂胁迫处理条件下,1~15 d 处理组柚叶的 CmPDR11-2 基因相对表达量呈整体上升趋势,且均高于对照组,反应迅速且持久,这表明 CmPDR11-2 基因表达与红肉蜜柚耐草甘膦有关。     

中国水仙高分子量核DNA提取方法的建立

以中国水仙(Narcissus tazettaL.var.Chinensis Roem)黄化叶片为材料,比较了2种提取方法对高分子量核DNA(HMW-DNA)制备效果的影响.结果表明,改良Zhang法与Peterson法相比,前者更适合于中国水仙叶片HMW-DNA的提取.将得到的细胞核用低熔点琼脂糖包埋,琼脂糖小块用蛋...     

木奈果实中花青素合成酶基因PsANS的克隆及原核表达分析

根据NCBI数据库中已知的蔷薇科植物花青素合成酶基因序列设计特异引物,从本实验室已经构建好的木奈成熟果实均一化全长cDNA文库中筛选分离得到了一个编码花青素合成酶的cDNA:基因命名为PsANS,登录号:JN560957。该cDNA长1 478 bp,包含137 bp 5’非编码区,267 bp 3’非编码区,开放阅读框长度为1 074 bp。PsANS编码358个氨基酸,分子量为40.41 ku,理论等电点为5.35。经BLAST分析对比发现,PsANS氨基酸序列与甜樱桃、苹果和草莓的ANS氨基酸同源性都很高,分别为98%、93%和89%。将PsANS亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1和pET-32a上,在大肠杆菌BL21中经1mmol/L ITPG诱导表达获得了木奈PsANS融合表达蛋白,其分子量大小与预期的一致,进一步确认本试验克隆得到的PsANS为木奈花青素合成酶基因。     

不同矮化处理对水仙内源激素的影响

以中国水仙(Narcissus tazettaL.var.chinensis Roem)为材料,用前期试验筛选出的最佳矮化浓度:A 50 mmol.L-1、B24.5 mmol.L-1、PP33340 mg.L-1及人工模拟气候处理水仙植株,矮化处理后水仙叶片IAA、GA3含量、(IAA+GA3)/ABA比值均显著降低;ABA含量的变化则因处理方式的不同呈现不同的变化趋势;A和B矮化处理降低了Trans-Z、DHZR的含量和(Trans-Z+DHZR)/ABA的比值。并确定了高效液相色谱测定水仙叶片IAA、ABA、GA3及Trans-Z、DHZR含量的检测条件。     

淡紫拟青霉PL050705菌株的根际定殖及对根际真菌群落结构影响

室内平板法测定了生防菌淡紫拟青霉（Paecilomyces lilacinus）PL050705菌株对柑橘慢衰病株根际主要真菌的拮抗能力,PL050705菌株对测试真菌均具有强的拮抗能力。田间试验的清水对照（ck）、PL050705+虾壳粉（p+p）、PL050705（p）、灭线磷（e）4个处理组中,p+p、p的处理组PL050705在柑橘根系周年均以保持高定殖量;p+p处理组PL050705菌株的B-P优势度指数周年保持较稳定高水平（0.444～0.526）, p处理组PL050705菌株的B-P优势度指数周年呈下降状态（0.590～0.256）;根际土壤真菌多样性指数(Shannon-Wienner指数)分别是p+p>p>ck>e。实验表明PL050705菌株具有良好拮抗与根际定殖能力,特别是与虾壳粉混合施用情况下,能周年保持种群优势度,并提高土壤真菌种群多样性。     

黄皮ISSR－PCR反应体系的优化

为应用ISSR分子标记对黄皮种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究,通过单因素和正交试验对ISSR-PCR反应体系进行优化.结果表明,采用改良SDS法提取的DNA条带完整、无RNA污染,适于ISSR-PCR扩增;黄皮ISSR分析最适的扩增体系是:20 μl的反应体系中含30ng的模板DNA、1.5 U TaqDNA聚合酶、0.4μmol/L引物、0.3 mmol/L dNTPs以及引物(gA)8C的最佳退火温度为520.4℃.     

福建绿衣枳实生药醇提取物的反相HPLC指纹图谱

用RP-HPLC法获得不同绿衣枳实生药的HPLC色谱图,并确定其共有峰,用夹角余弦、相关系数、欧氏距离等不同数理统计方法进行分析。建立福建绿衣枳实生药以33个共有峰为指纹特征信息的对照指纹图谱和质量鉴定分析方法。该方法准确可靠、简便、重现性好,可用于评价不同绿衣枳实生药内在质量。     

绿衣枳实生长规律模型模拟及其应用

建立了绿衣枳实生长量与时间的logistic模型和横径与单果重的动态分形模型,用以精确描述绿衣枳实生长过程和横径、平均单果重之间的动态分形关系,并能通过此模型预测采摘日期.结合日期与药效成分含量的关系间接地判断其质量优劣,从生产栽培和商品药材流通方面对绿衣枳实的质量进行控制.     

琯溪蜜柚CmPME1的克隆及其在果实发育过程中的表达分析

利用RT-PCR技术从‘琯溪蜜柚’中克隆得到1条PME（pectinmethylesterase）基因的ORF序列,命名为CmPME1。该序列编码一个含有582个氨基酸的蛋白质,分子量63.37 ku,该蛋白属于稳定的碱性亲水性蛋白。同源性分析表明：其编码的氨基酸序列与可可树（Theobroma cacao）、毛果杨（Populus trichocarpa）的同源性分别为76％、74％,与甜橙的氨基酸序列同源性高达99％。实时荧光定量PCR结果表明,随着果实的发育,CmPME1的表达量逐渐升高,在花后170 d达到最高,然后逐渐降低,远中柱汁胞CmPME1的表达量高于近中柱。     

切花菊‘白扇’开放式组培快繁体系的建立

以切花菊‘白扇’的带腋芽茎段为外植体,以次氯酸钠为表面消毒剂,确定最佳的消毒浓度及消毒时间;以山梨酸钾、次氯酸钠和代森锰锌为抑菌剂,确定开放式初代、继代和生根培养基中抑菌剂的最佳组合,建立开放式组培快繁体系。试验结果表明：外植体最佳消毒条件为0.1%（V/V）次氯酸钠消毒15 min;在初代培养基中,抑菌剂最佳组合为50 mg/L代森锰锌、0.01%（V/V）次氯酸钠和5 mg/L山梨酸钾,该组合的污染率较低,为36.7%。开放式培养中芽的生长情况、诱导率均无显著差异;在继代增殖和生根培养阶段,抑菌剂的最佳组合为40 mg/L代森锰锌、0.01%（V/V）次氯酸钠和5 mg/L山梨酸钾,芽的增殖系数和生根率较高,分别为5.93%、80.0%,芽生长良好,与常规组培无明显差异。