饲养方式对略阳乌鸡肌肉和脂肪相关基因mRNA表达水平的影响

为研究饲养方式对略阳乌鸡肌肉发育和脂肪形成的影响,分别检测笼养和散养方式下60日龄、120日龄略阳乌鸡肌肉组织中相关基因的表达水平。结果发现:散养方式可提高肌肉嫩度,降低其硬度;笼养方式可提高肌肉产量和肌内脂肪(IMF)含量;60日龄散养鸡肌肉组织中慢肌标志基因碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)的表达量显著低于笼养鸡,而快肌标志基因肌球蛋白碱性轻链2(MYL2)、肌球蛋白碱性轻链3(MYL3)和肌内脂肪形成候选基因脂蛋白脂肪酶(LPL)、瘦素受体基因(LEPR)的表达水平显著高于笼养鸡;120日龄时,散养鸡CAⅢ表达量显著升高,而钙/钙调素依赖性蛋白激酶(Ca MK)、MYL2、MYL3、LPL、LEPR和和胰岛素样生长因子1(IGF-1)的表达量明显降低;随着日龄增加,笼养鸡骨骼肌中肌肉生长抑制素基因(MSTN)和腹脂沉积相关的甲状腺激素应答基因(THRSP)表达量显著升高,而散养鸡明显降低。综上所述,散养方式可提高略阳乌鸡骨骼肌中慢肌纤维相关基因表达水平,笼养方式促进骨骼肌中脂肪相关基因的表达,有利于肌内脂肪形成。     

乌鸡肌卫星细胞的分离培养与鉴定

通过建立一种有效的乌鸡肌卫星细胞分离、培养及鉴定体系,为体外探讨家禽骨骼肌生长发育调控机制及骨骼肌损伤后修复的研究奠定基础。选取10日胚龄的乌鸡鸡胚为材料,采用Ⅰ型胶原酶和胰酶联合消化,差速贴壁法分离鸡肌卫星细胞,通过形态学识别和检测肌卫星细胞标志基因的表达等方法鉴定分离获得的细胞,并在低浓度血清培养基中诱导细胞成肌分化。结果显示:分离获得的细胞形态与肌卫星细胞相似;实时荧光定量PCR(q PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卫星细胞特异基因Paired protein box 7(Pax7)呈高水平表达;经成肌诱导分化后,细胞融合形成肌管,细胞免疫荧光法检测成肌分化标志基因肌球蛋白重链(Myosin heavy chain,My HC)呈阳性表达。研究成功从鸡胚中分离获得肌卫星细胞,并具有良好的体外增殖和分化能力,为肌肉的发育和损伤修复研究提供良好的细胞模型。     

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为汉中黑稻起源及其花青苷合成机制提供分子遗传依据,通过分析汉中地区8个黑稻品种和其他植物查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因序列,利用PCR扩增8个黑稻品种查尔酮合成酶基因并测序,使用DNAMAN和MEGA5.0软件分别对水稻的CHS基因外显子序列进行比对和不同物种间的聚类.结果表明:水稻种内存在4个多态位点,8种黑稻中存在3个多态位点,比对CHS氨基酸序列,仅黑宝品种存在1个氨基酸突变.经聚类分析,8种黑稻亲缘关系最近,与籼稻聚为一类,然后与粳稻聚在一起,禾本科植物CHS同源性很高.结论:CHS是一个古老的基因,可作为种属鉴定的参考基因,CHS虽是花青苷合成的限速酶基因,但其序列的变异可能与黑稻花青苷的合成无相关性.     

略阳乌鸡METTL21C基因克隆及超表达载体构建

旨在克隆略阳乌鸡 METTL21C基因,构建其超表达载体。采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测 METTL21C基因在略阳乌鸡7种组织中的表达,通过PCR扩增技术克隆 METTL21C基因完整的CDS区序列,分析其核苷酸序列及不同物种序列进化关系,将 METTL21C基因片段连接至pCD513B载体,构建其超表达载体并转染至293T细胞。结果显示: METTL21C基因在略阳乌鸡心肌中表达量最高,骨骼肌次之;克隆获得略阳乌鸡 METTL21C基因完整编码区序列,共747 bp,编码249个氨基酸残基,与原鸡的相应序列具有很高的同源性;构建的 METTL21C超表达载体能转染293T细胞并成功表达,可直接用于后续 METTL21C基因功能探索的研究。