不同方法提取天麻DNA的研究

[目的]探索适合于天麻DNA的提取方法。[方法]采用3种方法提取天麻DNA,测定提取的天麻DNA纯度与产量,并对其扩增产物进行电泳分析。[结果]改进的CTAB法提取的天麻DNA产量和纯度均较高,扩增产物的电泳条带也较明显。[结论]改进的CTAB法较适合用于天麻DNA的提取。     

苦参叶生物总碱提取工艺的优化及含量测定

[目的]优化苦参叶生物总碱的提取工艺,并测定其所含的生物碱含量。[方法]采用紫外分光光度法进行单因素试验和正交试验,考察乙醇体积分数、料液比、提取温度、提取时间、提取次数对苦参叶总生物碱含量的影响,并采用高效液相色谱法对生物碱含量进行测定。[结果]苦参叶生物总碱的最优提取工艺为:料液比1∶25,90℃水浴,80%乙醇,回流提取1次,提取时间2 h;苦参叶中苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱含量较高。[结论]紫外分光光度法的生物总碱提取率高,稳定性、重现性好;苦参叶含有5种指标性成分,其中苦参碱和氧化苦参碱的含量总和符合药典规定含量,叶的潜在应用价值大,为苦参叶的研发提供理论依据。     

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为黔产苦参资源的保护利用提供依据,采用紫外分光光度法对贵州不同产地苦参的生物总碱和总黄酮的含量进行研究.结果表明:不同产地苦参有效成分含量的差异较大.其中,以毕节市大方县和铜仁市思南县的苦参生物碱含量最高,分别达15.6％和15.2％,明显高于其他产地的苦参;六盘水市老鹰山的苦参总黄酮含量最高,为15.7％.     

金樱子随机扩增多态性DNA分析

[目的]揭示不同产地金樱子30个居群间的遗传多样性和亲缘关系.[方法]采用RAPD分子标记技术,从35条RAPD随机引物中,筛选出8条有效引物进行扩增,用NTSYSpc,ver.2.02软件进行UPGMA聚类分析.[结果]共扩增出86条带,其中多态性条带84条,多态性百分率(PPB)97.67％.30个居群的相似性系数在0.11 ～0.58,聚成A、B、C三大类群.[结论]金樱子具有丰富的遗传多态性,产自贵州地区的金樱子有较近的亲缘关系.     

黔产苦参ISSR-PCR反应体系正交优化研究

[目的]确定适合苦参稳定的ISSR-PCR反应体系。[方法]采用经典的CTAB法提取苦参新鲜幼嫩叶片DNA;针对Mg2+、d NTPs、引物、模板DNA和Taq DNA聚合酶进行正交设计L_(16)(4~5),优化黔产苦参ISSR-PCR反应体系。[结果]最适ISSR-PCR反应体系为:模板DNA 90 ng、0.4μmol/L引物、2.0 mmol/L Mg~(2+)、TaqDNA聚合酶0.5 U、0.5 mmol/L d NTPs。[结论]建立的苦参ISSR-PCR反应体系,经过19份苦参样品检验,证明该体系稳定可靠,可用于苦参遗传多样性分析。     

苦参生品及其炮制品的2种不同提取方法的抗菌药效研究

采用水煎煮法和乙醇回流提取法对苦参及其炮制品进行提取，采用牛津杯法测定金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的体外最小抑菌浓度(MIC),研究不同提取方法、炮制方法对苦参的抗菌效果。结果表明，醇提液中生品提取液和醋炙品提取液对金黄色葡萄球菌的抑制效果较好，而对大肠杆菌的抑菌效果最好的是生品提取液，MIC值均为0.012 5 g/mL;水提液中炒焦品提取液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果较好，MIC值分别为0.1和0.2 g/mL。其中醇提液抑菌效果较水提液抑菌效果好；醇提液对大肠杆菌的抑制效果好于金黄色葡萄球菌；水提液对金黄色葡萄球菌的抑制效果好于大肠杆菌。因此，苦参生品及不同炮制品的醇提液和水提液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有抑菌效果。