电针敏化穴位激活迷走神经运动背核胆碱能神经元改善大鼠结肠炎性损伤

目的:观察电针敏化穴位对结肠炎模型大鼠脑干迷走神经运动背核(DMV)乙酰胆碱转移酶阳性(Ch AT+)神经元的影响,探讨其改善大鼠结肠炎性损伤的机制。方法:将79只雄性SD大鼠随机分为正常组(20只)、正常+敏化穴位组(5只)、模型组(34只)、电针1组(15只)和电针2组(5只)。模型组和电针组均予5%葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮用6d建立结肠炎大鼠模型。通过尾静脉注射伊文氏蓝(EB)溶液确定模型大鼠的敏化穴位后,正常+敏化穴位组、电针1组和电针2组于敏化穴位处施以电针(疏密波,频率2 Hz/15 Hz,电流强度2 m A),每天干预30 min,电针1组连续干预6 d,正常+敏化穴位组、电针2组只干预1 d。实验第0、7、13天,评定正常组、模型组和电针1组大鼠的疾病活动指数(DAI)评分、结肠组织学损伤评分及足底机械缩足反射阈值、热痛潜伏期;实验第7天,采用免疫荧光法观察正常组、正常+敏化穴位组、模型组和电针2组大鼠脊髓背角不同板层神经元和DMV中Ch AT+神经元激活情况。结果:结肠炎模型大鼠体表EB渗出点主要分布于T12~S1节段,以L2和L5节段最集中,因此,选择L5节段的上巨虚穴作为敏化穴位。第7、13天,与正常组比较,模型组大鼠足底机械缩足反射阈值降低(P<0.001),DAI评分和结肠组织学损伤评分升高(P<0.001);第7天,模型组热痛潜伏期低于正常组(P<0.001);第13天,与模型组比较,电针1组大鼠足底机械缩足反射阈值升高(P<0.001),DAI评分和结肠组织学损伤评分降低(P<0.01,P<0.05)。与正常组比较,正常+敏化穴位组和模型组大鼠脊髓L4~L6节段背角浅层(第Ⅰ、Ⅱ板层)神经元及DMV中Ch AT+神经元激活数量增多(P<0.05,P<0.01);与正常+敏化穴位组和模型组比较,电针2组大鼠脊髓背角浅层神经元和DMV中Ch AT+神经元激活数量增多(P<0.001)。结论:结肠炎大鼠体表T12~S1节段支配区域(穴位)发生敏化;电针敏化穴位可有效缓解结肠炎模型大鼠结肠炎性损伤,其机制可能与激活脊髓背角浅层神经元和DMV中Ch AT+神经元有关。     

养阴清肺方调控放射性肺炎大鼠外周血T细胞Notch1,Jagged1信号通路

目的:观察养阴清肺方调控放射性肺炎大鼠T细胞Notch信号受体1(Notch1)及Notch信号配体1(Jagged1)表达规律的影响,探讨其对放射性肺炎防治作用的机制。方法:将40只雌雄各半的SD大鼠以随机数字表法随机分为正常组、模型组、激素组、联合用药组,直线加速器对除正常组外的3组大鼠全胸单次照射,剂量为16 Gy。照射后第1天起各组予相应的药物灌胃。照射后4周,处死大鼠,取全肺称重计算肺系数,取大鼠肺组织进行苏木素-伊红(HE)染色,马松(Masson)染色,Notch1免疫组化染色,取全血标本进行免疫磁珠分选提取T细胞及流式细胞术检测Notch1比率,用提取的T细胞进行实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Notch1,Jagged1 mRNA及蛋白表达,观察各组大鼠在放射后4周肺系数改变及Notch1,Jagged1表达的变化。结果:放射后4周,各组肺系数差异明显,正常组与联合用药组肺系数最为接近;与模型组比较,养阴清肺方联合泼尼松龙可明显降低Notch1 T细胞所占比例(P0.05),可明显降低Notch1,Jagged1mRNA表达(P0.05),明显下调Notch1,Jagged1相关蛋白表达(P0.05)。结论:养阴清肺方能明显下调放射性肺炎大鼠Notch1,Jagged1表达,可能是防治放射性肺炎发生发展的机制之一。     

艾灸促进皮肤外伤愈合及对局部组织的修复作用

目的:探讨艾灸促进创面愈合疗效及其对创伤不同阶段局部组织形态的修复作用。方法:28只成年雄性SD大鼠随机分为模型组和艾灸组,每组14只。采用直径8mm的取皮器从大鼠背部正中线肩胛下角2cm处钻取全层皮肤制备大鼠外伤模型。造模后即刻予艾灸干预,每日1次,每次25min,持续6d。观察并拍照记录创面的愈合情况,造模后第2天和第7天采用HE和Masson染色观察各组大鼠创伤局部组织形态学变化和胶原纤维生长情况。结果:与模型组比较,艾灸组干预2次后大鼠创口面积就显著减小(P0.01,P0.05),随着干预次数增加艾灸组愈合面积显著增加(P0.01),艾灸组大鼠创伤局部组织中炎性细胞数量显著增多(P0.01),新生胶原纤维显著增多(P0.05);艾灸6次后,艾灸组较模型组创伤局部组织成纤维细胞数量和胶原纤维量明显增加,细胞和胶原纤维排列更加紧密,新生血管数量较多,受损部位的皮肤结痂较厚。结论:艾灸可以明显促进创伤局部胶原纤维生长和细胞增殖,促进外伤模型大鼠皮肤创面愈合。     

电针对乳腺癌小鼠抑瘤作用的时间窗及其免疫学机制的初步观察

目的：观察肿瘤不同发展阶段电针干预对乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤生长速度的影响,明确电针“足三里”抑瘤的最佳干预时间窗,并初步探讨电针抑瘤的免疫学机制。方法：BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组、电针1组、电针2组、电针3组和电针4组。原位接种4T1-luc细胞制备乳腺癌小鼠模型。对各电针组小鼠双侧“足三里”行电针干预（0.1 mA,2/15 Hz,30 min）,阳性药组腹腔注射吉西他滨。选取正常组、模型组、电针3组、电针4组和阳性药组进行重复验证实验。采用游标卡尺和活体成像系统评估肿瘤尺寸;流式细胞术检测外周血抗肿瘤免疫细胞CD8+T和自然杀伤细胞比例。结果：第16天、19天和22天,阳性药组、电针4组和电针3组小鼠肿瘤尺寸较模型组明显减小（P<0.05或P<0.01）,且持续至观察结束。电针4组和阳性药组小鼠肿瘤重量较模型组明显减轻（P<0.05或P<0.01）。重复验证实验表明电针4组较电针3组抑瘤作用强,但差异无统计学意义。且电针3组和电针4组均可提高荷瘤小鼠外周血中CD8+T和自然杀伤细胞比例,以电针4组作用更加明显。结论：成瘤后电针干预的抑瘤效果最好,且电针“足三里”可能通过提高抗肿瘤免疫应答减缓乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长速度。     

穴位不同层次和强度电刺激缓解肌肉炎性痛及对脊髓背角广动力神经元的抑制作用

目的：观察在痛源局部穴区不同层次和强度电刺激的镇痛作用及对脊髓背角广动力（WDR）神经元诱发电活动的影响,为选择合理的电针刺激参数提供依据。方法：Wistar大鼠用于3部分实验。采用弗氏完全佐剂（CFA）建立腓肠肌炎性痛模型,造模后随机选取6只大鼠进行WDR神经元电活动多通道细胞外电生理记录,用于确定激活A-成分的电刺激阈值Ta和C-成分的电刺激阈值Tc,以此作为经皮穴位电刺激（TEAS）或电针的干预强度;选取36只大鼠随机分为正常组、模型组、TEAS-Ta组、TEAS-Tc组、EA-Ta组和EA-Tc组,每组6只,在痛源局部“承山”采用Ta或Tc强度的TEAS或电针干预,每次30 min,1次/d,连续3 d,采用小动物压痛测量仪检测大鼠腓肠肌的机械压痛阈值,Von Frey丝测量足底机械痛阈值;随机选择13只肌肉炎性痛大鼠用于观察Ta/Tc强度电针或TEAS“承山”即刻WDR神经元的反应性。结果：TEAS皮肤激活WDR神经元A-成分或C-成分的阈值分别为（2.43±0.57）mA和（7.00±1.34）mA,电针激活肌肉WDR神经元的A-成分或C-成分的阈值分别为（0.72±0.3...     

大鼠“肾俞”穴区与肾上腺神经支配的相关性研究

目的:探索"肾俞"穴与肾上腺相关感觉、交感和运动神经元的分布特征,揭示"肾俞"穴与肾上腺之间的神经解剖学联系。方法:以6只正常SD大鼠作为实验对象,将Alexa荧光素488结合霍乱毒素亚单位B(AF 488-CTB)注射在大鼠第2腰椎(L)左侧相当于人体肾俞穴的位置,将Alexa荧光素594结合霍乱毒素亚单位B(AF 594-CTB)注入肾上腺实质。3d后灌流固定,用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜对脊神经节、交感神经链和脊髓标记到的神经元进行观察。结果:被AF 488-CTB和AF 594-CTB标记的神经元均出现在相应神经组织的左侧,与大鼠"肾俞"穴区和肾上腺相关的感觉神经元主要分布于胸(T)10至L 2节段脊神经节,并分别集中在T 12—T 13和T 11—T 12脊神经节中,T 12—L 1脊神经节中分布有少量的AF 488/594-CTB双标记神经元。在腰部交感神经链仅观察到由AF 488-CTB和AF 594-CTB各自标记的交感节后神经元,而在T 11—T 13节段脊髓侧角中只有AF 594-CTB标记的交感节前神经元。在颈(C)7—C 8以及T 11—L 1节段脊髓前角观察到AF 488-CTB标记的运动神经元。结论:大鼠"肾俞"穴区和肾上腺在感觉和交感神经支配方面存在节段性联系,这种联系可能是针刺"肾俞"穴调节肾上腺功能的神经解剖学途径。     

大鼠“曲泽”,“大陵”和“中冲”穴区之间神经血管显微结构的比较

ObjectiveThe aim of this study was to compare the microstructure of blood vessels and nerve fibers between different acupoints in the rat skin from the perspective of histology.MethodsThe skin tissue at “Qūzé” (曲泽 PC3)” “Dàlíng (大陵 PC7)” and “Zhōngchōng (中冲 PC9)” regions was taken from the rat forelimb along the pericardium meridian, and cut sagittally with a freezing microtome. After that, the skin sections were stained by fluorescent histochemistry and immunohistochemistry with phalloidin and calcitonin gene-related peptide (CGRP) to reveal the microstructure of blood vessels and nerve fibers respectively, and then examined under a laser scanning confocal microscope.ResultsThe microstructure of blood vessels and nerve fibers was clearly labeled with phalloidin and CGRP, respectively. The blood vessels and nerve fibers were observed in the dermis of “PC3” “PC7” and “PC9” regions, where the bundle of nerve fibers distribute in parallel to the blood vessels, and sent out thin branches to surround the wall of the blood vessels. In contrast, the density of blood vessels and nerve fibers in “PC3” “PC7” and “PC9” were presented orderly in an increased tendency.ConclusionThe results of present study demonstrate the differences of the neurovascular microstructure among “PC3” “PC7” and “PC9” in the rat, providing a histological view to insight into the specificity of different acupoints.     

激光扫描共聚焦显微镜技术在针灸形态学研究中的应用

激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)应用于针灸形态学方面的研究已经有20多年,并成为从组织学角度探讨腧穴结构和针灸效应的重要工具之一。借助于LSCM的技术优势,针灸形态学研究水平得到进一步提升,使我们对腧穴和经络相关的组织结构以及针灸引起的组织化学变化有了更加深入的了解。为了让LSCM在针灸形态学研究方面更有效地发挥作用,本文将对以往有关方面的研究成果进行全面的梳理,同时结合自己的实际经验在技术层面上给出具体建议。期待LSCM技术能够被整合到更多的针灸实验研究中,为揭示针灸的作用机制提供更有力的形态学依据。     

针刺治疗糖尿病合并高脂血症的研究现状与思考

针刺治疗糖尿病合并高脂血症具有改善胰岛素抵抗、保护胰岛素细胞的作用,还可作用于中枢神经系统,通过改善基因表达纠正内分泌紊乱,在降糖调脂方面具有一定的优势,是治疗糖尿病合并高脂血症不可替代的疗法之一,具有安全、有效、无不良反应的显著优势,值得深入推广应用。然而目前对于针刺治疗糖尿病合并高脂血症的临床研究存在样本量不大、缺乏手法描述、对证候诊断及取穴依据不统一、动物造模无特定方法等诸多问题,偏倚性较大,且从现阶段对针灸降糖减脂的研究来看,文献数量少,更新较慢。今后应进一步开展大样本、多中心的随机对照研究,建立明确的疗效评价标准。此外,无论临床还是实验研究,对艾灸、头皮针、梅花针等具有中医特色的治法应加以重视。