银杏叶提取物对高糖环境下ECV304细胞的保护作用

目的：探讨银杏叶提取物对高糖环境下人脐静脉内皮细胞（ECV304）的保护作用及机制。方法：体外培养的ECV304细胞分为高糖组、银杏叶保护组、甘露醇高渗对照组（甘露醇组）和正常细胞组,在35 mmol•L^-1高糖条件下培养ECV304细胞24 h后,分别收集不同处理组的细胞,检测细胞产生羟自由基（•OH）、超氧阴离子（O^-₂）、丙二醛(MDA)水平,同时测定细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性;采用不同处理组的细胞制作扫描电镜图片,观察细胞及线粒体形态的改变。结果：高糖组细胞产生•OH、O^-₂和MDA水平高于银杏叶保护组（P<0.05）,SOD活性低于银杏叶保护组（P<0.05）。甘露醇组细胞产生•OH、O^-₂、MDA水平显著低于高糖组（P<0.05）。电镜下可见银杏叶保护组线粒体形态完好,线粒体内嵴清晰可见;高糖组线粒体肿胀,线粒体内嵴消失,坏死细胞增多。结论：银杏叶提取物对高糖导致的ECV304细胞损伤具有保护作用。     

银杏叶提取物对ECV304细胞正常功能的保护作用研究

目的 探讨高糖环境下银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract, EBG)对ECV 304细胞的保护作用.方法 将细胞分为正常细胞组(不施加任何处理因素)、高糖组(加入葡萄糖至终浓度35 mmol/L);甘露醇组(加入甘露醇使其终浓度达35 mmol/L);银杏叶保护组(加入葡萄糖至终浓度35 mmol/L,同时加入银杏叶提取物使其终浓度达500 μg/ml).加入处理因素24 h后,利用流式细胞仪测定细胞内Ca2+浓度、线粒体的膜电位和细胞凋亡情况.结果 高糖组细胞内Ca2+浓度与其它各组相比较显著升高,线粒体的膜电位显著降低,发生凋亡的细胞显著增加(P＜0.05).银杏叶保护组细胞内Ca2+浓度显著低于高糖组,线粒体膜电位显著高于高糖组,发生凋亡的细胞显著减少(P＜0.05).甘露醇组细胞内Ca2+浓度显著低于高糖组,线粒体膜电位高于高糖组,细胞发生凋亡情况少于高糖组(P＜0.05).结论 银杏叶提取物能够保护高糖环境下的ECV304免受高糖的损伤.     

黄芪对糖尿病大鼠的血清学指标的作用的实验研究

目的 探讨黄芪对糖尿病(DM)大鼠血清中甘油三酯(TG)、血糖、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和胰岛素水平的作用,为黄芪治疗DM提供理论依据.方法 Wistar大鼠40只,随机分为正常组,DM模型组和黄芪组.给予Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素50 mg/kg体重,每隔2 d测一次血糖,3次血糖测定值均高于16.7 mmol/L,被确定DM模型成功,黄芪组每日腹腔注射DM大鼠黄芪注射液1 ml(内含2 g药材提取物).DM组大鼠每日腹腔注射0.1 mmol/L柠檬酸钠1 ml.于治疗后的第7、14天分别取3组大鼠的血液,测定血糖、血清TG、HDL-C、LDL-C、胰岛素水平.结果 黄芪组治疗14 d后,血清中胰岛素水平明显高于DM组(P＜0.01);TG和血糖水平显著低于DM组(均P＜0.05).结论 黄芪注射液具有调节脂代谢,降低血糖的作用.     

黄芪对高糖环境下细胞膜流动性影响

目的 探讨黄芪注射液(RA)对高糖环境下ECV304细胞膜流动性的影响,为RA在糖尿病治疗中的应用提供实验依据.方法 体外实验中利用葡萄糖建立高糖环境,体外培养ECV304细胞,将细胞随机分为正常组、高糖组、黄芪保护组(RA)组和甘露醇高渗对照组(简称甘露醇组).加入处理因素24 h后,收集细胞,测定各组细胞的细胞膜流动性和各组细胞产生OH,O2-、和丙二醛(MDA)水平.结果 高糖组细胞产生MDA水平明显升高,显著高于正常组、RA组和甘露醇组细胞(P<0.01);RA组细胞产生MDA水平显著低于甘露醇组(P<0.01),与正常组细胞比较,差异无统计学意义.高糖组细胞抑制OH、O2-的能力显著低于正常组、RA组和甘露醇组细胞(P<0.01);RA组细胞抑制OH、O2-的能力显著高于甘露醇组细胞(P<0.01),与正常组细胞比较,差异无统计学意义.高糖组细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性显著低于正常组、RA组和甘露醇组细胞(P<0.01);RA细胞SOD活性与正常组细胞比较,差异无统计学意义.RA组细胞的细胞膜流动性显著高于高糖组细胞(P<0.01),与正常组细胞比较,差异无统计学意义.结论 黄芪通过抗氧化作用,可保护高糖环境下ECV 304细胞的细胞膜流动性.     

小鼠2型金属硫蛋白基因的克隆

目的 构建含有小鼠Ⅱ型金属硫蛋白（MT）基因的真核表达载体,为进行MT抗氧化作用的体内功能实验奠定基础。方法 采用重叠延伸PCR技术设计两对引物,利用引物间的互补序列作为模板合成小鼠Ⅱ型MT基因。结果 将PCR产物经连接反应,连接产物转化JM109,摇菌后提取质粒,质粒的酶切鉴定及最后的测序结果均表明本实验所获得的小鼠Ⅱ型MT基因与GENEBANK中的目标基因序列完全一致。结论 本实验通过重叠PCR技术成功构建了小鼠Ⅱ型MT编码基因,重叠PCR技术是合成目的基因片段的有效的手段。