let-7a-5p在急性呼吸窘迫综合征中作用

目的探讨let-7a-5p靶向调节转化生长因子-β受体1(transforming growth factor-βreceptor 1,TGF-βR1)在急性呼吸窘迫综合征中作用及机制。方法 NIH3T3细胞经转染let-7a-5p mimics或let-7a-5p inhibitor等后,分为let-7a-5p增强组、let-7a-5p增强对照组、let-7a-5p抑制组、let-7a-5p抑制对照组和阴性对照组,检测各组细胞中let-7a-5p的相对表达量,转染成功后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中TGF-βR1、Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢmRNA相对表达量,采用Western blot法检测各组细胞中TGF-βR1、Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢ蛋白相对表达量。将HEK293细胞分为实验组和对照组,分别转染let-7a-5p mimic和阴性对照,采用双荧光素酶报告基因检测系统测定2组相对荧光素酶活性的荧光值。结果转染后let-7a-5p增强组let-7a-5p相对表达量(191 215.66±115 55.57)高于阴性对照组(251.85±85.12)和let-7a-5p抑制组let-7a-5p(1.14±0.22)(P0.05),阴性对照组高于let-7a-5p抑制组(P0.05);let-7a-5p增强组细胞中Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢmRNA相对表达量低于阴性对照组和let-7a-5p抑制组(P0.05),阴性对照组低于let-7a-5p抑制组(P0.05);let-7a-5p增强对照组和let-7a-5p抑制对照组Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢmRNA相对表达量与阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05),5组细胞中TGF-βR1mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05);let-7a-5p增强组细胞中TGF-βR1、Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢ蛋白表达灰度值低于阴性对照组和let-7a-5p抑制组(P0.05),阴性对照组低于let-7a-5p抑制组(P0.05),let-7a-5p增强对照组和let-7a-5p抑制对照组细胞中TGF-βR1、Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢ蛋白表达灰度值与阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示,对照组细胞相对荧光素酶活性(1.00±0.00)高于实验组(0.34±0.13)(P0.05)。结论 let-7a-5可通过抑制TGF-βR1蛋白翻译而减轻肺纤维化,进而延缓急性呼吸窘迫综合征进程。     

缺氧再灌注斑马鱼胚胎脑部细胞凋亡及c-fos基因的表达

背景：国外已经有学者使用斑马鱼胚胎开始进行缺氧再灌注的研究,但还没有关于c-fos基因在斑马鱼脑缺氧再灌注过程中的表达及其作用机制的报道。 目的：观察缺氧再灌注后斑马鱼胚胎脑部细胞凋亡及脑组织中c-fos基因的表达情况。 方法：取48 hpf的斑马鱼胚胎进行缺氧实验,模拟新生儿缺氧再灌注损伤环境,通过向水中通入99.999%高纯氮气制造缺氧环境,分别经过6,12,24 h的缺氧处理后,在正常氧体积分数下进行6 h恢复。对照组为正常通气组(溶解氧浓度在7.0 mg/L左右)。采用吖啶橙染色方法,观察不同缺氧时间对斑马鱼神经细胞凋亡的影响,同时采用实时荧光定量核酸扩增检测系统(qPCR),对c-fos基因表达情况进行定量分析,比较缺氧再灌注前后c-fos基因表达水平的变化。 结果与结论：对照组脑部能检测到微量细胞凋亡,c-fos基因呈低水平表达;实验组经过6,12,24 h缺氧后,脑部凋亡细胞逐渐增多,缺氧24 h组凋亡细胞增幅最大(P < 0. 05),c-fos基因表达有不同程度升高(P < 0.05),尤其是缺氧6 h后,该基因的表达上调幅度最高。结果表明缺氧会导致斑马鱼脑细胞内c-fos基因表达上调,可能是导致缺氧后期脑细胞凋亡激增的机制之一。     

miRNA-24-3P靶向调节SP1对RAW264.7细胞功能的影响

目的 探讨miRNA-24-3P(miR-24-3P)在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)过程中的作用机制.方法 在RAW264.7细胞中分别转染miR-24-3P mimics、miR-24-3P inhibitor及各自阴性对照,检测各组细胞中miR-24-3P的相对表达水平,检测各组细胞中肿瘤坏死因子-a(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、SP1、核因子-κB(NF-κB)的相对表达水平,并通过双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-24-3P对SP1的靶向作用.结果 TNF-α mRNA、IL-6 mRNA在各组细胞中的表达水平差异有统计学意义(P＜0.05).SP1 mRNA、NF-κBmRNA在各组细胞中的相对表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).SP1在各组细胞中的表达水平差异有统计学意义(P＜0.05).NF-κB在各组细胞中的相对表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).双荧光素酶报告基因分析表明,共同转入miR-24-3P与SP1野生型会显著抑制HEK293细胞中的荧光酶表达(P＜0.05).结论 miR-24-3P可通过影响SPI基因的翻译进而影响炎性介质的释放,在ARDS过程中发挥作用.     

牛磺酸对缺氧再灌注斑马鱼幼鱼脑部内质网应激相关因子表达的影响

目的：观察牛磺酸对缺氧再灌注斑马鱼幼鱼脑组织中内质网应激病理状态标志物葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、内质网应激特异性下游蛋白C/EBP同源蛋白(CHOP)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12)表达及神经元凋亡的影响,探讨其脑保护机制。方法将受精后5 d的斑马鱼幼鱼随机分为空白对照组、缺氧再灌注模型组以及牛磺酸组,其中牛磺酸组按不同浓度进一步分为1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L 3个亚组,每组均100条。观察并记录缺氧后再灌注1 h的斑马鱼幼鱼的行为、苏醒时间、中位生存时间、尼氏染色及原位末端标记法检测神经元凋亡情况, Western blot法测各组幼鱼脑部GRP78、CHOP及caspase-12表达水平。结果与模型组相比,各牛磺酸处理组的苏醒时间缩短、中位生存时间延长、尼氏染色阳性神经元计数增多以及凋亡神经元计数减少,差异均有统计学意义(P<0.05);GRP78、CHOP和caspase-12在模型组及各牛磺酸处理组均有表达,但三者在各牛磺酸处理组的表达均较模型组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧再灌注诱发内质网应激,牛磺酸可能通过下调GRP78、CHOP和caspase-12减少神经元凋亡从而减轻斑马鱼幼鱼缺氧再灌注脑损伤。     

缺氧再灌注斑马鱼胚胎脑部细胞凋亡及c-fos基因的表达

背景：国外已经有学者使用斑马鱼胚胎开始进行缺氧再灌注的研究,但还没有关于c-fos基因在斑马鱼脑缺氧再灌注过程中的表达及其作用机制的报道。目的：观察缺氧再灌注后斑马鱼胚胎脑部细胞凋亡及脑组织中c-fos基因的表达情况。方法：取48hpf的斑马鱼胚胎进行缺氧实验,模拟新生儿缺氧再灌注损伤环境,通过向水中通入99．999％高纯氮气制造缺氧环境,分别经过6,12,24h的缺氧处理后,在正常氧体积分数下进行6h恢复。对照组为正常通气组（溶解氧浓度在7．0mg／L左右）。采用吖啶橙染色方法,观察不同缺氧时间对斑马鱼神经细胞凋亡的影响,同时采用实时荧光定量核酸扩增检测系统（qPCR）,对c-fos基因表达情况进行定量分析,比较缺氧再灌注前后c-fos基因表达水平的变化。结果与结论：对照组脑部能检测到微量细胞凋亡,c-los基因呈低水平表达;实验组经过6,12,24h缺氧后,脑部凋亡细胞逐渐增多,缺氧24h组凋亡细胞增幅最大（尸〈0．05）,c-los基因表达有不同程度升高（P〈0．05）,尤其是缺氧6h后,该基因的表达上调幅度最高。结果表明缺氧会导致斑马鱼脑细胞内c-los基因表达上调,可能是导致缺氧后期脑细胞凋亡激增的机制之一。