受体相互作用蛋白质激酶3通过上调整合素β3促进骨关节炎相关病变

骨关节炎（osteoarthritis,OA）是最常见的慢性致残性关节疾患,目前尚无针对病因的有效治疗手段。程序性坏死在多种疾病中扮演关键角色,受体相互作用蛋白质激酶3（receptor-interacting protein kinase 3, RIP3）是程序性坏死进程的关键调控因子。有研究显示,RIP3在人与鼠骨关节炎退变软骨组织中表达水平显著上调,提示程序性坏死的发生,但RIP3在软骨中的具体病生理角色仍不明确。本研究拟对过表达RIP3前后的软骨细胞转录物组进行测序分析,探索RIP3在骨关节炎进程中发挥作用的具体机制。RNA测序结果显示,RIP3的过表达诱发软骨细胞中244个基因表达上调,277个表达下调。通过进一步构建基因间共表达作用网络,筛选出16个候选靶基因在mRNA水平进行验证,证实RIP3对磷脂酰肌醇3激酶调节亚单位5（phosphoinositide-3-kinase, regulatory subunit 5,Pik3r5）、整合素β3（integrin subunit beta 3,Itgb3）及成髓细胞瘤转录因子第2亚型（MYB proto-oncogene like 2,Mybl2）的表达上调作用最为显著。CCK-8以及乳酸脱氢酶活性检测结果表明,利用siRNA沉默Itgb3的表达可显著抑制RIP3诱发的软骨细胞活力下降及程序性坏死,同时也抑制了RIP3对软骨细胞中分解代谢相关基因Mmp1、Mmp13与Il6的表达上调作用,以及其对合成代谢相关基因Acan、Col2a1与Sox9的下调作用。本研究证实,RIP3通过上调软骨细胞中Itgb3的表达诱发软骨细胞坏死与软骨基质代谢紊乱,并最终导致软骨退变,为骨关节炎的临床治疗提供了新靶点,同时进一步明确了程序性坏死的病理生理学意义。     

线粒体分裂抑制剂Mdivi-1对大鼠心肌微血管内皮细胞缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨Mdivi-1对缺血再灌注损伤后大鼠心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)的保护作用.方法:分离培养大鼠CMECs,建立缺血再灌注(SI/R)模型,随机分为对照组、SI/R组、和SI/R+Mdivi-1组.采用MTT法检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞迁移能力;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测CMECs凋亡率;western blot法检测各组细胞Drp1,Fis1水平;活性氧检测试剂盒测细胞ROS水平.结果:与对照组比较,SI/R组和SI/R+Mdivi-1组细胞增殖和迁移能力明显降低,凋亡明显增加,Drp1,Fis1表达增高,ROS水平明显升高,结果具有统计学意义(P＜0.05);与SI/R组比较,SI/R+Mdivi-1组细胞增殖和迁移能力明显增加,凋亡明显降低,ROS水平明显降低,结果具有统计学意义(P＜0.05),而Drp1,Fis1表达则无明显改变.结论:Mdivi-1可减轻CMECs的缺血再灌注损伤,这种保护作用可能是通过抗氧化应激来实现的.     

胰岛素在巨噬细胞泡沫化过程中对Toll样受体4表达的影响及其机制

目的:观察胰岛素对巨噬细胞破泡沫化过程中Toll样受体4(TLR4)表达及IL-6、TNF-α分泌的影响.方法:采用体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导建立泡沫细胞模型,分为对照组、ox-LDL组、用胰岛素组、PI3K-AKT抑制剂组.油红O染色观察泡沫细胞模型的建立,取细胞上清用ELISA法检测白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;流式细胞术检测膜蛋白TLR4表达量,Western-blot检测TLR4、核因子-κB (NF-κB)的表达水平.结果:与对照组相比,ox-LDL处理过的巨噬细胞可向泡沫细胞转换,同时TLR4、NF-κB蛋白表达水平以及IL-6、TNF-α水平显著增加(P＜0.05);而使用胰岛素干预后ox-LDL的作用显著减弱,TLR4、NF-κB蛋白表达水平以及IL-6、TNF-α水平显著降低(P ＜0.05 vs ox-LDLgroup);而使用PI3K-AKT抑制剂干预后,抑制剂显著降低胰岛素的作用,TLR4、NF-κB蛋白表达水平以及IL-6、TNF-α水平显著升高(P ＜0.05 vs ox-LDL+ insulin).结论:ox-LDL可诱导巨噬细胞向泡沫细胞转化,同时上调TLR4及NF-κB蛋白表达,增加炎性因子分泌,促进了AS进程,而胰岛素可使ox-LDL的作用显减弱,减少TLR4、NF-κB蛋白表达及炎性因子分泌,从而减轻AS进程,其机制可能与胰岛素通过PI3K-AKT抑制TLR4-NF-κB通路有关.     

Cdkn2a示踪小鼠:研究创伤性骨关节炎软骨退变细胞衰老的新模型

骨关节炎(osteoarthritis,OA)是临床上最为常见的老年性运动系统疾病之一。研究表明,衰老是OA发生发展的重要影响因素之一,但其具体作用及机制尚未完全清楚。本研究通过CRISPR/Cas9技术,建立了Cdkn2a-e(Luc-2A-tdTomato-2A-CreERT2-WPRE-pA)1定点敲入的杂合子小鼠模型,可在小鼠活体内追踪衰老经典标记物Cdkn2a(p16, p16INK4a)的表达情况,结合前交叉韧带横断术(ACLT)诱导OA小鼠模型,将OA病理进程中的衰老变化在体外直观呈现,明确衰老与OA之间的关系。本研究选取10 ～ 12周龄Cdkn2a小鼠,随机分为非手术对照组、假手术组和ACLT组,通过ACLT手术在小鼠中构建OA的模型,术后4周收取动物进行活体荧光成像检测显示,ACLT组术后4周的小鼠膝关节局部Cdkn2a荧光表达升高(P＜0.05),小鼠膝关节组织切片的番红O固绿染色显示,4周时ACLT组膝关节软骨出现退变(P＜0.05),对小鼠膝关节组织进行Cdkn2a免疫组织化学染色,相较其他2个组,ACLT组的小鼠膝关节组织软骨表面Cdkn2a染色更深。研究结果显示,通过手术诱导的OA模型在局部具有衰老的表现,这进一步验证了衰老和OA的关系。同时,该Cdkn2a示踪小鼠模型能够在活体小鼠内体现衰老的进展。结合影像学检查,可以实时观察衰老和OA发生、进展的关系,为衰老与OA疾病机制的研究提供了良好的模型,也为今后进行靶向衰老进行OA的治疗提供了很好的研究工具。     

小分子药物BNTA通过上调Insig1缓解高胆固醇引起的骨关节炎

骨关节炎(osteoarthritis,OA)是运动系统常见的退行性疾病,具有高发病率和高致残率。骨关节炎的发病机制目前尚不明确,既往研究认为骨关节炎发病主要与创伤因素相关,而近期研究表明,以胆固醇代谢异常为主的代谢性因素同样与骨关节炎密切相关,骨关节炎的治疗以早期对症治疗和晚期手术治疗为主,尚无针对病因的特效药物。既往研究中发现,有一种具有软骨保护作用的小分子药物BNTA,其在创伤引起的骨关节炎中具有较好的疗效,但其对高胆固醇引起的骨关节炎的作用尚不明确。本研究为探究BNTA对高胆固醇引起的骨关节炎的治疗作用及其机制,采用高胆固醇饮食构建了大鼠骨关节炎模型,取膝关节石蜡切片进行组织学评估,使用油红O染色评估大鼠软骨细胞内的脂质积聚情况,使用RT-qPCR、免疫荧光和免疫组化评估软骨细胞合成代谢、分解代谢及胆固醇代谢相关基因和蛋白质的表达。结果显示,BNTA可缓解高胆固醇大鼠骨关节炎模型中的病理表现,改善OARSI评分。在大鼠软骨细胞中,BNTA可促进合成代谢相关基因col2、sox9、acan的表达,抑制分解代谢相关基因mmp13、adamts5的表达,可改善高胆固醇引起的大鼠软骨细胞脂质积聚。在大鼠软骨细胞和高胆固醇大鼠骨关节炎模型中BNTA均可上调Insig1表达。本研究证实,高胆固醇可在体内和体外实验中加重骨关节炎,可引起大鼠软骨细胞脂质积聚增加。在体内和体外实验中BNTA均能缓解高胆固醇引起的骨关节炎表型,改善软骨细胞内的异常脂质积聚,其作用可能为通过上调Insig1抑制细胞内的胆固醇生物合成,从而缓解脂质异常积聚。     

表观扩散系数值和比值是诊断子宫内膜腔肿瘤病变的重要参数

本研究通过回顾性研究2016年1月至2017年1月淮南市第一人民医院48名女性子宫内膜腔肿瘤患者病例,以探讨表观扩散系数(apparent diffusion coefficient, ADC)在子宫内膜腔肿瘤鉴别诊断中的有效性。患者分组如下:组1,子宫内膜癌患者;组2,子宫内膜息肉患者;组3,粘膜下平滑肌瘤患者;另外,A组为恶性病变患者;B组为良性病变患者。通过测量肿瘤和外肌层表观扩散系数(ADC)值并计算所有患者的肿瘤-子宫肌层表观扩散系数(ADC)比值,并通过ROC曲线(Receiver operating characteristic curve)分析确定截断值、敏感性和特异性,本研究发现,组1平均ADC值和比值低于组2和组3,组3的ADC值和比值均低于组2,组1、组2、组3的表观扩散系数(ADC)值的敏感性分别为91.6、98.9和68.4,特异性分别为82.3、87.8和58.2。组1、组2、组3的表观扩散系数(ADC)比的敏感性分别为92、98.4和66,特异性分别为77.5、95和65。A和B两组在平均肿瘤表观扩散系数(ADC)值和比值方面差异显著,ADC值的敏感性和特异性分别为91%和80.5%,ADC比的敏感性和特异性分别为90%和76.8%。本研究初步结论表明,表观扩散系数(ADC)值和比值是确定子宫内膜腔肿瘤患者肿瘤病变的重要参数。     

比较沙库巴曲缬沙坦与缬沙坦对慢性心衰患者心肾功能的影响

目的:比较沙库巴曲缬沙坦与缬沙坦在慢性心力衰竭(Chronic heart failure, CHF)患者治疗中对心功能及肾功能的影响。方法:按WHO诊断标准随机选择CHF患者,对照组30例,给予缬沙坦80 mg/qd起,2-4周后增至160 mg/qd;研究组30例,给予沙库巴曲缬沙坦100 mg/bid,2-4周后增至200 mg/bid。治疗8周后,比较两组治疗后LVEF、LVESD和LVEDD的变化,以及对Scr、Cys C的影响。结果:(1)两组患者的性别、年龄、NYHA心功能分级等一般情况,以及治疗前LVEF、LVESD、LVEDD、Scr、Cys C等指标比较均无显著性差异(P0.05),具有可比性。(2)治疗8周后,对照组的LVEF较治疗前显著升高(38.87±6.95%VS.34.73±7.89%,P0.05),LVESD、LVEDD均较治疗前显著降低(44.43±8.26 mm VS.50.77±8.31 mm,P0.05;54.77±5.84 mm VS.59.87±7.57 mm,P0.05),Cys C较治疗前显著降低(1.00±0.33 mg/LVS.1.27±0.52 mg/L,P0.05),Scr较治疗前无显著性差异(82.24±30.38μmol/LVS.91.19±36.81μmol/L,P0.05)。研究组的LVEF较治疗前显著升高(38.70±7.29%VS.33.53±9.12%,P0.05),LVESD、LVEDD均较治疗前显著降低(43.33±9.10 mm VS.49.47±6.84 mm,P0.05;54.53±6.20 mm VS.60.23±8.30 mm,P0.05),Cys C较治疗前显著降低(1.01±0.26 mg/LVS.1.32±0.53 mg/L,P0.05),Scr较治疗前无显著性差异(84.31±32.25μmol/LVS.94.43±38.73μmol/L,P0.05)。比较两组治疗后各项指标均无显著性差异(P0.05)。结论:在CHF的治疗过程中,沙库巴曲缬沙坦与缬沙坦均能改善心功能,且在短时间内具有一定的肾功能保护作用。     

鸢尾素对心肌梗死后大鼠心房颤动和心房间质纤维化的影响

摘要 目的：探讨鸢尾素对心肌梗死后大鼠心房颤动和心房间质纤维化的影响。方法：通过结扎左前降支冠状动脉（LADCA）建立急性心肌梗死（MI）大鼠模型,大鼠每天腹腔注射100 μg/kg的鸢尾素1次,共治疗4周。通过超声心动图检查左室舒张末期直径（LVEDD）、左室收缩末期直径（LVESD）、左室射血分数（LVEF）、左室缩短分数（LVFS）。应用苏木精-伊红（HE）染色和Masson三色染色评估大鼠心肌形态和纤维化情况。蛋白质印迹分析检测TGF-β1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、MMP9、TIMP-1、collagenⅠ、collagenⅢ、NLRP3、Caspase 1和IL-1β的表达。结果：与模型组相比,鸢尾素组大鼠的LVEF和LVFS升高,而LVEDD和LVESD降低（P<0.05）;房颤诱发率和房颤持续时间显著降低（P<0.05）;心肌形态明显改善,纤维化面积显著降低（P<0.05）;TGFβ1、p-Smad2/3、collagenⅠ、collagenⅢ和MMP9的蛋白表达水平显著降低,TIMP1的蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;NLRP3炎性体、cleaved-caspase-1和IL-1β的表达水平显著降低（P<0.05）。结论：鸢尾素可显著改善心肌梗死动物模型的心脏功能,抑制心肌纤维化和房颤形成,具有较高的临床应用前景。     

我们在三江源

2007年7月5日,穿过云雾笼罩的湍流河谷．经过明媚如画的杉树林,我们考察队的四辆越野车行驶在318国道上。     

高原上的生态文化节

2007年7月18至23日，平日散居在方圆3500平方公里的村民们把帐篷搬到神山脚下一片开阔的草场上，煨桑的烟雾袅袅．五彩经幡飘扬．祭山、讲经、赛马、游戏……历时几天的活动精彩而丰富。这不同于普通的藏族赛马会，所有活动内容都是有针对性的设置．教育意义高过了它的娱乐性。搬迁黑帐篷、生火、打酥油、扔石子……传统的游牧技能在游戏中得到传承；