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目的探究胃肠道手术患者术后感染病原菌及其感染高危因素,为该类患者的治疗提供参考。方法选择2017年1月至2019年10月于我院行胃肠道手术的106例患者为研究对象,检测感染患者病原菌分布,同时检测感染与非感染患者肠道菌群情况,分析患者术后感染的相关危险因素。结果 106例胃肠道手术患者中感染18例(16.98%),共分离出病原菌23株,其中革兰阴性菌占52.17%(12/23),以大肠埃希菌(34.78%,8/23)为主;革兰阳性菌占43.48%(10/23),以金黄色葡萄球菌(26.09%,6/23)为主;真菌占4.35%(1/23)。感染患者肠道大肠埃希菌、肠杆菌数量均明显高于未感染患者,双歧杆菌数量明显低于未感染患者(均P0.05)。Logistic分析显示,年龄60岁、急诊手术、普通手术室、参观手术人数3人、手术时间2 h、接台手术均为胃肠道手术患者术后感染的独立危险因素(均P0.05)。结论胃肠道手术患者术后感染风险较高,同时会出现肠道菌群失衡。重视患者高危因素对提高患者手术效果,调整肠道菌群失衡和改善患者预后意义重大。 相似文献
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平滑肌肌球蛋白轻链激酶的非激酶作用及对ATP 酶活性的调节 总被引:1,自引:0,他引:1
肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase, MLCK)具有激酶活性和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为探寻MLCK的非激酶活性区域对MLCK活性的影响,以进一步阐明MLCK的非激酶活性在调节平滑肌收缩过程中的分子机制.采用PCR技术构建MLCK部分氨基酸缺失的重组表达载体pGEX-F6-5/D,经大肠杆菌表达得到可溶性GST融合蛋白,利用SDS-PAGE及Western 印迹鉴定表达的MLCK在细胞中的分布,结果还显示,提取液的上清和沉淀中均有MLCK片段的表达.运用亲和层析技术分离并纯化删除前、后表达的MLCK片段(F6.5和F6-5/D),经谷胱甘肽琼脂糖凝胶 4B 纯化,SDS-PAGE鉴定显示为单一表达条带.应用EnzChek磷分析试剂盒和孔雀绿两种方法分别测定不同浓度的MLCK对非磷酸化肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性的影响.两种MLCK的片段均具有激活ATP酶活性的作用,并随MLCK浓度的增加,酶的活性增加.比较删除前后不同MLCK片段对ATP酶活性的影响结果显示,删除MLCK片段1002位丙氨酸至1019位亮氨酸后,对ATP酶的激活作用较删除前明显降低,表明删除的部分氨基酸序列为MLCK非激酶活性所必需的区域.利用电镜技术观察到MLCK片段(F6.5)使非磷酸化肌球蛋白构象发生明显的变化.加入MLCK片段后肌球蛋白的构象由非活性型转化为活性型,并且MLCK片段还具有促进肌球蛋白单体形成肌丝的作用. 相似文献
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目的:探寻MLCK的非激酶活性区域对MLCK活性的影响,进一步阐明MLCK的非激酶活性在调节平滑肌收缩过程中的分子机制。方法:利用编码MLCK全长的pColdI表达载体对其ATP结合位点进行定点突变,获得无激酶活性的MLCK突变体;应用Glycerol—PAGE鉴定肌球蛋白磷酸化水平;应用孔雀绿方法检测重组MLCK对肌球蛋白ATP酶活性的影响。结果:MLCK/△ATP(突变型)失去磷酸化肌球蛋白轻链的激酶活性;重组MLCK(野生型)和MLCK/AATP(突变型)均可以在非钙条件下激活非磷酸化肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性,抑制磷酸化肌球蛋白的Mg2+.ATP酶活性,而且激活与抑制作用均随着MLCK浓度的增加而增大,但二者对肌球蛋白的ATP酶活性的作用没有显著差异(P〉0.05)。结论:平滑肌肌球蛋白轻链激酶及ATP结合位点突变体具有激活非磷酸化肌球蛋白ATP酶活性的作用。 相似文献
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目的:探讨肌球蛋白轻链激酶(MLCK)钙调蛋白(CaM)结合位点突变体对肌球蛋白ATP酶活性的影响.方法:构建牛胃重组全长野生型MLCK CaM结合位点突变型蛋白(△CaM/MLCK);孔雀绿方法检测△CaM/MLCK对肌球蛋白的Mg2+-ATP酶活性的影响.结果:在无Ca2+/CaM存在时,随着△△CaM/MLCK浓度的增加,非磷酸化肌球蛋白的Mg2+-ATP酶活性明显增加;而磷酸化肌球蛋白的Mg2+-ATP酶活性明显降低.结论:△CaM/MLCK对肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性的影响表明MLCK具有非激酶活性. 相似文献
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目的:构建重组平滑肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)N端删除栽体,为研究平滑肌MLCK的分子机制提供研究模型.方法:以重组质粒pCoid/155为模板,根据其待删除序列(N端1-41个氨基酸)设计上下游引物,行PCR扩增.将扩增片段以NdeI/EeoRl双酶切,产物行琼脂糖凝胶电泳回收得到目的基因.将目的基因与栽体连接,转化至大肠杆菌.筛选阳性克隆,并对阳性克隆进行测序.结果:用NdeI和EcoRI双酶切重组质粒pCold/155,琼脂糖凝胶电泳显示得到约4.4kb栽体和约3.4kb的MLCK片段.阳性克隆经测序证实MLCK的N端41个氨基酸序列已被成功删除.结论:成功构建了重组MLCK N端删除栽体 pCold/155/D41. 相似文献
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目的:平滑肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chainkinase,MLCK)具有激酶活性和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为探寻MLCK的非激酶活性区域对MLCK活性的影响,本实验利用分子生物学技术构建了肌球蛋白轻链激酶CaM结合位点突变体,并纯化出重组的MLCK表达的蛋白质,为深入研究MLCK的非激酶活性在调节平滑肌收缩过程中的分子机制提供了实验基础.方法:利用野生型MLCK全长的cDNA序列设计CaM结合位点的突变引物,利用PCR技术进行定点突变,获得CaM结合位点的突变体(△CaM/MLCK).在大肠杆茵中表达重组CaM结合位点的突变体(△CaM/MLCK),通过亲和层析及凝胶过滤进行分离纯化重组蛋白,SDS-PAGE检测表达及纯化的重组蛋白.结果:构建重组MLCK钙调蛋白结合位点突变体(△CaM/MLCK),△CaM/MLCK在大肠杆菌中以可溶形式大量表达并得到纯化.结论:成功构建重组MLCK钙调蛋白结合位点突变体(△CaM/MLCK)并获得纯化的表达蛋白质. 相似文献
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目的:探讨妊娠期高血压疾病(HDCP)发病的危险因素及其对妊娠结局的影响,以期为HDCP的诊断和早期预防提供一定的临床依据。方法:选择2011年11月到2014年11月在我院接受治疗的120例HDCP患者,设为实验组,同期选择120例正常孕产妇作为对照组。自制调查问卷调查受试者的临床资料以及妊娠结局,分析HDCP的危险因素,对比观察两组妊娠结局的差异。结果:(1)单因素分析显示,HDCP发病的危险因素可能有:年龄、体质指数(BMI)、月收入、高血压家族史、孕期并发症、负面情绪、文化程度(均P0.05)。(2)进一步行多因素非条件Logistic回归分析显示,HDCP发病的危险因素有:BMI、高血压家族史、负面情绪及文化程度。(3)实验组患者胎儿窘迫、低体重儿、新生儿窒息、围产儿死亡及胎儿畸形的发生率均明显高于对照组,具有显著性差异(P0.05)。结论:导致HDCP发病的危险因素较多,主要有BMI、高血压家族史、负面情绪及文化程度等,这些因素极易导致不良妊娠结局。 相似文献
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目的 探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)与聚乳酸/羟基乙酸共聚物(poly (lactide-co-glycolide),PLGA)三维生物支架在软骨源性形态发生蛋白1(cartilage-derived morphogenetic protein 1,CDMP1)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)作用下向软骨细胞表型分化及体内修复喉软骨缺损的能力。方法 在体外高密度细胞悬液与PLGA共同构筑的三维立体培养体系下CDMP1和(或)TGF-β1联合诱导BMSCs向软骨细胞分化,观察诱导后细胞表型的表达;将培养体系移植入动物体内,从大体、组织学方面观察其对喉软骨缺损的修复效果。结果 诱导后的培养体系可表达特异性软骨基质Ⅱ型胶原和GAG;将培养体系移植入动物体内,可有效的修复喉软骨缺损。结论 BMSCs与PLGA三维生物支架在CDMP1和TGF-β1作用下所得组织工程化软骨可以有效的修复喉软骨缺损。 相似文献
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目的:探讨ROCK亚型ROCKⅠ和ROCKⅡ对血管平滑肌细胞(A7r5)迁移及增殖的影响。方法:利用Western blot技术检测ROCKⅠ和ROCKⅡ蛋白在A7r5细胞中的表达水平;利用siRNA技术使ROCKⅠ和ROCKⅡ基因表达分别下调,并检测基因下调后蛋白表达水平;利用Boyden小室法,观察ROCKⅠ和ROCKⅡ基因下调后及ROCK特异抑制剂Y-27632对PDGF诱导的A7r5细胞迁移的影响;使用MTT法检测ROCKⅠ和ROCKⅡ基因下调后对A7r5细胞生长曲线的影响。结果:ROCKⅠ和ROCKⅡ在A7r5细胞中的蛋白表达水平不同,ROCKⅡ较ROCKⅠ的表达水平高4倍;通过对A7r5细胞进行ROCKⅠ和ROCKⅡsiRNA转染,使二者蛋白表达水平分别下调83.4%和94.7%;基因表达下调后,ROCKⅠ明显抑制了PDGF诱导的A7r5细胞的迁移,而ROCKⅡ无明显影响,Y-27632也抑制了A7r5细胞的迁移;ROCKⅠ和ROCKⅡ基因下调后对A7r5细胞生长曲线的影响无明显差别。结论:ROCKⅠ在血管平滑肌细胞迁移过程中起主导作用,ROCKⅠ和ROCKⅡ对血管平滑肌细胞的增殖作用无明显差异。 相似文献
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目的:研究PDGF介导ROCK亚型(ROCKⅠ和ROCKⅡ)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞(A7r5)基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达及活性的影响。方法:利用RNA干扰技术使ROCKⅠ,ROCKⅡ基因表达下调,并检测基因下调后蛋白表达水平;使用免疫印迹法(western blot)检测MMP-2蛋白的表达;使用明胶酶谱法检测MMP-2蛋白的活性。结果:通过对A7r5细胞进行ROCKⅠ和ROCKⅡsiRNA转染,二者蛋白表达水平分别下调79.8%和70.1%;ROCKⅠ,ROCKⅡ蛋白表达下调抑制了MMP2的表达和活性,但是ROCKⅡ作用更明显。结论:ROCKⅠ和ROCKⅡ均抑制MMP-2的表达和活性。 相似文献