豆饼添加蛋氨酸代替小鼠饲料中鱼粉的实验研究

以豆饼添加蛋氨酸代替小鼠饲料中的鱼粉，观察了对ＫＭ小鼠的饲喂效果。     

绿色荧光裸鼠部分免疫学指标的测定及分析

摘要: 目的检测绿色荧光蛋白( Green Fluorescence Protein,简称GFP) 转基因裸鼠的部分免疫学指标,分析GFP 转基因裸鼠与其他小鼠在免疫学方面的优缺点,为将来的研究提供基础参考值。方法① 实验选用6 ～ 8 周GFP 转基因裸鼠、BALB/c 裸鼠和BALB/c 小鼠,活体称体质量,剖取脾脏称其质量,之后进行脾淋巴细胞增殖能力的测定。② 取外周血,测定部分血常规指标及免疫球蛋白指标。结果① GFP 转基因裸鼠脾脏质量、脾脏系数以及T、B 淋巴细胞增殖反应与BALB/c 裸鼠相近,但与BALB/c 小鼠差异显著。② GFP 转基因裸鼠、BALB/c 裸鼠两种裸鼠品系外周血白细胞水平、淋巴细胞以比例及免疫球蛋白IgG、IgM 都远低于BALB/c 小鼠,差异显著。结论从脏器系数、白细胞水平,免疫球蛋白水平等角度发现,GFP 转基因裸鼠和BALB/c 裸鼠的免疫系统水平较BALB/c 小鼠相弱,其中GFP 转基因裸鼠的免疫系统水平最为低下。     

改良性柑橘果胶通过下调Galectin-3抑制膀胱癌细胞生长

目的 检测改良性柑橘(MCP)对人膀胱癌增殖和生长的抑制作用。方法 MTT检测膀胱癌细胞T24和J82细胞的活性。Western blot 检测T24和J82细胞中凋亡蛋白cv Caspase-3和cv PARP以及Galectin-3蛋白的表达水平。建立膀胱癌T24细胞皮下移植瘤裸鼠模型,灌胃MCP后,比较各组肿瘤重量和体积大小,免疫组化的方法检测各组别的增殖蛋白Ki67和凋亡蛋白cv Caspase-3以及Galectin-3蛋白表达水平的差异性。显微镜观察分析结果。结果 MTT结果证实MCP对人膀胱癌细胞T24和J82细胞活力有抑制作用(P<0.05)。Western blot证实浓度为2.0% 的MCP组别中膀胱癌细胞凋亡蛋白表达明显增高。灌胃MCP对 T24移植瘤荷瘤裸鼠的肿瘤体积和重量均有明显的抑制(P<0.05), 免疫组织化学染色定量分析表示700mg/kg组荷瘤鼠组织内Ki67和Caspase-3证实增殖指数降低(P<0.05), 其潜在靶点Galectin-3表达降低。结论 本课题研究显示MCP对膀胱癌细胞的增殖和存活的显著抑制作用,且Galectin-3表达降低。故MCP作为一种天然的膳食纤维,同样可以作为药物预防和治疗膀胱癌。     

不同福利条件下ICＲ 小鼠肝细胞NF-κB 表达的比较

摘要: 目的比较不同福利水平下ICＲ 小鼠肝脏NF-κB 的表达。方法选取6 周龄雄性ICＲ 小鼠,交叉使用制动和丰富环境干预形成不同的福利环境,观测小鼠的体质量增重、饲料能效及脾脏系数,ELISA 法测定血清IL-2 和COＲT,实时定量PCＲ 和免疫印迹法分别检测小鼠肝细胞内NF-κB p65 的mＲNA 和蛋白表达水平。结果与对照组相比,丰富环境组小鼠的体质量增重显著提高( P ＜ 0. 05) ,其他指标无差异( P ＞ 0. 05) ; 丰富环境+ 制动组小鼠的体质量增重、脾脏系数显著低于对照组( P ＜ 0. 05) ,而COＲT、NF-κB p65 的基因和蛋白表达显著高于对照组( P ＜0. 05) ; 制动组的体质量增重、饲料能效、脾脏系数及血清IL-2 均显著低于对照组( P ＜ 0. 05) ,COＲT、NF-κB p65 的基因和蛋白表达均显著高于对照组( P ＜ 0. 05) 。其中制动组的体质量增重显著低于丰富环境+ 制动组( P ＜0. 05) ,COＲT、NF-κB p65 的基因和蛋白表达显著高于丰富环境+ 制动组( P ＜ 0. 05) 。结论不同组别小鼠存在福利水平差异,NF-κB 表达差异与福利差异相类似,福利水平与NF-κB 表达水平之间存在紧密关联。     

屏障环境与IVC饲养条件下SD大鼠脏器重量与脏器系数的比较

目的测定并比较分析屏障环境和IVC饲养条件下SD大鼠的主要脏器重量及脏器系数的差异。方法用电子天平分别测定了30只在屏障环境中和IVC饲养条件下SD大鼠的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、子宫、睾丸和卵巢的重量及脏器系数。结果雄鼠之间比较,脾脏重量差异显著,其它各脏器系数间无显著性差异;雌鼠之间比较,各脏器重量间无显著性差异,肾脏系数差异显著(P<0.05);两种条件下,雄雌鼠之间脏器重量比较差异非常显著(P<0.01),IVC雄雌之间脏器系数比较,肝、肾间无显著性差异,其它差异非常显著;屏障条件下,雄雌之间脏器系数比较,心、脾、肺、肾上腺、脑差异显著(P<0.05),肾无差异。结论屏障环境和IVC条件下饲养的SD大鼠脏器重量及脏器系数间差异较小。     

实验动物科普与伦理工作的探索与实践

关键词:实验动物;科普;伦理;生命科学;协调发展     

两株小鼠诺如病毒的分离与鉴定

摘要: 目的了解江苏地区常用实验小鼠诺如病毒( murine norovirus,MNV) 的感染情况及进化特征。方法在江苏地区抽取三个实验动物中心的实验小鼠,采集直肠及内容物样本,应用ＲT-PCＲ 方法检测MNV OＲF2 特异性基因( 547bp,MNV nt5104-5650) 。阳性样本经ＲAW264. 7 细胞分离病毒,对MNV 分离株的VP1 基因进行扩增,将其连接在pEASY-Blunt 载体上,转化至大肠杆菌Trans1-T1 感受态细胞,通过Kanamycin 抗性筛选,挑取菌落进行PCＲ鉴定,鉴定为阳性的克隆送检测定其VP1 基因序列,构建系统发生进化树。结果共检测小鼠直肠内容物30 份,检出MNV 阳性样本4 份,包括ICＲ 小鼠( 2 /8) 、BALB/c 小鼠( 1 /12) 和C57BL/6J 小鼠( 1 /10) ,感染率为13. 3%;ＲAW264. 7 细胞接毒盲传三代,两只ICＲ 小鼠样品接种的细胞产生明显细胞病变( CPE) ,表现为细胞圆缩聚集,大部分脱落死亡,而C57BL/6J 和BALB/c 小鼠样本接种ＲAW264. 7 细胞无CPE; 应用VP1 特异引物经ＲT-PCＲ 检测,表现CPE 的细胞样本出现特异条带,测序结果显示分离到的2 株MNVVP1 核酸序列均为1626bp,与引物设计参考毒株S7-P2( GenBank 登录号: AB435514) VP1 基因大小相同,进化树图表显示检测到的2 株MNV 属同一独立小分支与参考株BJ10-2062、CＲ4 最为相近。结论此次抽检的实验小鼠MNV 感染率为13. 3% ( 4 /30) ,考虑可能在同一设施内传播。常用实验小鼠携带病毒的生物学意义有待进一步研究。     

不同时期绿色荧光裸鼠雌鼠血浆及组织中性激素水平变化

目的 了解不同妊娠期、泌乳期绿色荧光(Green Fluorescence Protein,简称GFP)裸鼠雌鼠血浆中雌激素、孕激素、泌乳素及各组织中泌乳素及泌乳素受体mRNA水平变化。方法 通过电化学发光法测定血浆中激素的水平,通过荧光定量PCR法测定泌乳素及泌乳素受体mRNA相对表达量。结果 GFP裸鼠雌鼠妊娠期内雌激素和泌乳素水平不断下降、孕激素的水平先升后缓慢下降、组织中泌乳素mRNA水平较低、泌乳素受体水平较高;而在泌乳期内雌激素、孕激素水平较稳定、组织中泌乳素mRNA水平较高,泌乳素受体水平较低。结论 不同时期GFP裸鼠雌鼠体内性激素的水平不同,参与裸鼠妊娠调控过程,为解决雌鼠不孕、易流产等问题提供了基础参考值和内分泌水平的解决思路。     

基因工程ROSA小鼠血液部分生理生化指标

目的测定基因工程B6;129-Gt（ROSA）26Sor小鼠血液生理生化正常值。方法采用全自动血细胞分析仪和全自动生化测定仪能分别对5～6周雄性、6～7周雌性ROSA小鼠的血液常规及生化值进行测定。结果ROSA雄雌小鼠血常规比较,中性粒细胞百分率（GR）、中性粒细胞计数（GR#）、平均红细胞血红蛋白量（MCH）之间比较差异显著（P〈0．05）,红细胞计数（RBC）、红细胞比积（Ht）、血红蛋白（Hb）、血小板分布宽度（PDW）、平均血小板体积（MPV）之间比较差异非常显著（P〈0．01）;血液生化值雄雌小鼠比较,血肌酐（Cre）间差异显著（P〈0．05）,白蛋白（Alb）、总胆固醇（TC）间差异非常显著（P〈0．01）,其它指标差异不显著。结论该小鼠的某些生理生化指标值在雄雌间有一定的差异。     

SPF环境中实验动物微生物质量控制

南京军区总医院于1993投资新建了1 800m2的符合当时国家标准的清洁级亚屏障设施,该设施自运行至2001年,为该院、南京军区及江苏省生物医学研究单位生产了大量的符合国家标准的清洁级大小鼠。随着我国实验动物新国家标准(GB 14925-2001,GB14922·2-2001))的颁布实施[1~2],该亚屏