干扰素诱导淋巴瘤细胞凋亡实验及临床研究

目的：分析梯度浓度的干扰素(IFN-α)对Burkitt淋巴瘤细胞株Daudi和T细胞淋巴瘤细胞株Jurkut及15例难治性淋巴瘤患者的直接作用。方法：以MTT法测定梯度浓度的IFN-α对两种淋巴瘤细胞株Daudi、Jurkat增殖作用的影响，以DNA末端标记法，流式细胞术，电镜观察测定IFN-α对淋巴瘤细胞的凋亡诱导作用，并采用瘤内注射IFN-α联合化疗治疗15例耐药的难治性淋巴瘤。结果：低浓度亚IFN-α对DaudiJurkat细胞增殖无明显抑制作用，高浓度IFN(10000U／ml)可显著抑制两种细胞增殖，且有时间相关性。高浓度的IFN-α可诱导淋巴瘤细胞凋亡。15例患者CR5例，PR7例，有效率80％，无明显毒副作用。结论：IFN-α可抑制淋巴瘤细胞增殖，诱导凋亡，有显著时间，剂量依赖性。局部应用IFN-α联合化疗是治疗难治性淋巴瘤的有效方法之一。     

恶性淋巴瘤骨髓受累的免疫表型特征

目的:探讨淋巴瘤骨髓受累的免疫表型特征。方法:采用流式细胞仪CD45/SSC设门方法对34例恶性淋巴瘤患者的骨髓标本进行检测,以骨髓涂片细胞学检查作阳性对照。收集骨髓受累患者的CD分子表达数据。结果:①对34例恶性淋巴瘤患者的骨髓应用流式细胞仪进行检测,发现23例阳性,阳性率67.65%(23/34),95%可信区间(51.92%,83.37%)。②该23例阳性患者中,非霍奇金淋巴瘤(NHL)19例,霍奇金淋巴瘤(HL)4例。NHL患者中B细胞来源免疫荧光单克隆抗体标记抗原出现频率最高的为CD19,CD20;T细胞来源标记抗原出现频率最高的为CD7。而在HL患者中出现频率最高的为CD9。结论:采用流式细胞仪CD45/SSC设门方法,发现非霍奇金淋巴瘤骨髓受累患者免疫表型特征为:B细胞来源:CD19、CD20;T细胞来源:CD7。霍奇金淋巴瘤为:CD9。     

乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR中Twist的表达与EMT现象的实验研究

目的：观察乳腺癌多药耐药细胞MCF-7／ADR中Twist表达及上皮-间质转化现象．探讨其与MCF-7／ADR侵袭转移能力增强的相关性。方法：分别以RT-PCR法、链霉亲和素-生物素酶复合物（Strept avidin biotin complex，SABC）免疫组织化学方法和Western blot法检测乳腺癌细胞系MCF-7及其多药耐药株MCF-7／ADR中介导EMT发生的转录因子Twist、上皮性标记基因E-钙粘素（E—cadherin）和间质性标记基因N-钙粘素（N—cadherin）表达的改变情况。结果：亲本细胞MCF-7中E—cadherin mRNA的表达和蛋白水平的表达均为阳性，Twist和N—cadherin表达阴性；多药耐药株MCF-7／ADR中E—cadherin mRNA和蛋白表达缺失，而在亲本细胞MCF-7中不表达的Twist和N—cadherin表达阳性。结论：在多药耐药乳腺癌细胞MCF-7／ADR中．其侵袭力增强可能与Twist介导的EMT发生有关。     

干扰素及三氧化二砷诱导淋巴瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究

目的 :分析梯度浓度的干扰素 (IFN α)及三氧化二砷 (As2 O3 )对EB病毒感染的Burkitt淋巴瘤Raji细胞株和EB病毒阴性Burkitt淋巴瘤Daudi细胞株直接作用。方法 :以MTT法测定梯度浓度的IFN α/As2 O3 对淋巴瘤细胞株增殖作用的影响 ,以膜联蛋白V(Annexin V)法、DNA末端标记法、流式细胞术 ,电镜观察测定IFN α对Raji、Daudi细胞株增殖周期的影响及凋亡诱导作用。结果 :低浓度IFN α对Raji、Daudi细胞增殖无明显抑制作用 ,高浓度IFN α(10 0 0 0U/mL)可显著抑制 2种细胞增殖 ,且有时间相关性。IFN α作用细胞 2 4～ 4 8h ,G0 /G1期细胞显著增多 ,S期细胞减少 ,72～ 96h细胞凋亡细胞明显增多 ,IFN α和As2 O3 有显著协同作用 ,EB病毒感染的Raji细胞对IFN α/As2 O3 的敏感性强于Daudi细胞。结论 :IFN α/As2 O3 可抑制淋巴瘤细胞增殖 ,使细胞阻滞在G0 /G1期 ,进一步诱导凋亡坏死 ,IFN α/As2 O3 作用有显著时间 ,剂量依赖性 ,对EB病毒感染的Raji细胞作用强于Daudi细胞。     

胃癌中组织因子途径抑制剂2的表达及其与预后和肿瘤血管生成模式的相关性研究

  目的  探讨胃癌中组织因子途径抑制剂2(tissue factor pathway inhibitor 2, TFPI-2)表达的临床意义及其与患者预后的关系, 分析TFPI-2表达与胃癌组织中内皮依赖性血管和血管生成拟态的相关性。  方法  采用免疫组化对187例胃癌标本进行TFPI-2蛋白表达检测, 分析其与临床病理参数的关系。通过CD34免疫组化染色评价肿瘤组织微血管密度, CD34/PAS双重染色观察胃癌中血管生成拟态的分布特征。  结果  胃癌组织中TFPI-2阳性表达率约为48.1%(90/187), TFPI-2蛋白表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移、浸润深度及远处转移有关, 而与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤最大径及临床分期无关。Kaplan-Meier分析表明与低、中表达组相比, TFPI-2高表达组患者总生存期和无瘤生存期明显延长。TFPI-2与血管生成模式相关性分析显示, 在所有胃癌组织中TFPI-2与内皮依赖性血管呈负相关, 与血管生成拟态无关。在中、高分化胃癌组织中, TFPI-2与内皮依赖性血管呈负相关, 与血管生成拟态无关。在低分化胃癌中TFPI-2与血管生成拟态呈正相关。  结论  随着肿瘤恶性程度的增加TFPI-2蛋白表达有所降低, TFPI-2表达与胃癌预后密切相关。在分化程度较高的胃癌组织中, TFPI-2通过抑制内皮依赖性血管, 抑制肿瘤浸润和转移, 具有抑制胃癌进展的作用; 在恶性程度较高的低分化胃癌中, TFPI-2促进血管生成拟态的形成, 提示TFPI-2在胃癌血管生成模式中可能起到双向调节作用。      

流式细胞术联合形态学检查对淋巴瘤骨髓累犯的诊断价值

目的 探讨流式细胞术(FCM)联合形态学检查对淋巴瘤骨髓累犯的诊断价值.方法 对52例淋巴瘤患者的骨髓标本行FCM、涂片及活组织病理切片检查,观察骨髓受累率、免疫表型数据和检查前后临床分期(CS)、国际预后指数(IPI)的变化.结果 6例霍奇金淋巴瘤(HL)切片法仅发现1例骨髓受累;46例非霍奇金淋巴瘤(NHL)中,骨髓受累FCM检出3l例,涂片法检出5例,切片法检出12例.FCM发现的3l例受累患者中,21例为早期浸润(瘤细胞＜5%);12例为小细胞淋巴瘤(SLL);6例同时表达T、B细胞抗原,1例弥漫大B细胞性淋巴瘤同时表达髓系抗原CD13、CD33;检查后,19例由原分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期升至Ⅳ期,18例进展型NHL的IPI提高.结论FCM联合形态学检查提高了骨髓受累的检出率,并能了解骨髓增生程度,提供免疫表型数据,尤对早期浸润和SLL声重要鉴别价值.准确的骨髓检查提高了患者CS和IPI.     

肝细胞癌在血中微小转移的检测

目的 肝细胞癌患者术后复发常是术前不能检出微转移灶或术中癌细胞释放入血之故。建立早期检出肝细胞癌（HCC）血中微小转移的方法并评价其临床意义。方法 采用巢式RT－PCR检测肝细胞特异白蛋白（ALB）mRNA和甲胎蛋白（AFP）mRNA在HCC患者外周血有核细胞成分及组织标本中的表达情况。并以肝癌细胞系HepG2、SMMC7721,乳腺癌细胞MCF－7作为阳性，阴性对照。结果 在肝组织，无论是癌、癌旁还是正常组织，ALB mRNA的表达均为阳性（8／8），而AFP mRNA在癌组织7／8例表达，癌旁5／8例表达。外周血表达的情况为：同一组标本ALB mRNA的阳性率为75.6%（34／45，P＜0．01），AFPmRNA的阳性率为57．8％（26／45，P＜0．01）。在有肝外转移和无肝转移分组中，ALBmRNA和AFPmRNA的表达分别为100．0％，54．2％和29．2％。结论 在HCC患者外周血有核心细胞成分中检测ALBmRNA和AFPmRNA的表达，是预测转移、复发的简捷手段，若ALB与AFP二者联合使用，应用性会更强。     

MDR1和Anxa2在乳腺癌组织中的表达与侵袭转移的关系研究

探讨乳腺癌组织中多药耐药基因（MDR1）和膜联蛋白（Anxa2）表达的相关性及其与乳腺癌转移的关系。方法:应用荧光定量PCR的方法检测20例配对的乳腺导管内癌、100例乳腺浸润性导管癌、70例癌旁正常组织中MDR1和Anxa2 mRNA的相对表达情况。结果:MDR1 mRNA在乳腺导管内癌中的表达水平明显高于癌旁正常组织（P=0.005）,乳腺浸润性导管癌组织中mRNA的表达明显高于癌旁正常组织（P=0.017）和导管内癌（P=0.019 6）。Anxa2 mRNA在乳腺导管内癌中表达与癌旁正常组织相比无显著性差异（P=0.188 9）,但是在乳腺浸润性导管癌组织中的表达明显高于导管内癌（P=0.000 8）和癌旁正常组织（P<0.000 1）;MDR1和Anxa2 mRNA的表达升高均与患者出现淋巴结转移有关（P<0.01）;2种基因在乳腺浸润性导管癌中的表达呈正相关（P<0.000 1）。结论:在肿瘤进展过程中,MDR1和Anxa2 mRNA表达上调与乳腺癌的淋巴结转移有关,二者之间表达具有正相关提示肿瘤细胞的多药耐药的获得和肿瘤侵袭转移之间有着密切联系。      

三氧化二砷对恶性淋巴瘤细胞株的作用及临床研究初探

目的：研究不同浓度的三氧化二砷（As2O3)对恶性淋巴瘤细胞系和淋巴瘤患者活体淋巴瘤细胞作用及其初步临床应用效果。方法：用MTT法检测不同浓度的As2O3对Daudi,Raji及活体细胞株生长的影响，用电镜及流式细胞仪检测As2O3诱导淋巴瘤细胞凋亡情况。12例Ⅲ-Ⅳ期的非霍奇金淋巴瘤患者，给予0．1^ As2O310 mL/d,30d为1个疗程，缓解后巩固治疗采用原方案每月连用7d，结果：1．0－2．0μmol/L的As2O3可明显降低Daudi,Raji及活体细胞株活力，可见明显凋亡小体；用流式细胞仪检测出现DNA含量低于G1期的亚G1期细胞，在G1／G0期前出现凋亡峰，其数量与药物作用时间呈正相关。12例患者单用As2O3治疗1个疗程，完全缓解1例，部分缓解2例，稳定6例，均无骨髓抑制及其它副作用等。结论：一定浓度的As2O3显著抑制3株淋巴瘤细胞的生长，诱导凋亡。AS2O3对一般化疗无效者，仍有一定疗效。     

中心体相关蛋白CDK5RAP2单克隆抗体的制备及其在乳腺癌中的表达

目的 通过制备中心体相关蛋白CDK5RAP2的单克隆抗体,检测CDK5RAP2在正常乳腺及乳腺癌中的表达差异,为进一步研究CDK5RAP2在乳腺癌发生、发展中的作用提供依据.方法 采用传统的杂交瘤方法制备CDK5RAP2的单克隆抗体,通过敲除CDK5RAP2的细胞模型进行免疫荧光检测,验证其特异性.选取正常乳腺、导管内癌和浸润性导管癌3组标本各30例,用制备的单克隆抗体进行免疫组化检测. 结果得到一株CDK5RAP2单克隆抗体(5F6),亚型为IgG1,用免疫荧光检测确证其特异性.免疫组化检测CDK5RAP2的表达显示浸润性导管癌和导管内癌之间无明显的差别,但是两组均明显高于正常乳腺组(P<0.001).结论 乳腺正常组织不表达或低表达CDK5RAP2,而乳腺癌组织中该蛋白的表达率明显增高,提示CDK5RAP2可能成为乳腺癌诊治的新型标志物.