自发Basal-like乳腺癌小鼠模型研究

探讨TA2小鼠自发乳腺癌生物学行为、形态及免疫表型特征,比较其与人Basal-like乳腺癌的相似程度,研究TA2小鼠乳腺癌发生与妊娠及小鼠乳腺癌病毒（mouse mammary tumor virus,MMTV）的关系。方法:收集TA2自发乳腺癌小鼠84只,采用H&E染色和免疫组织化学染色检测TA2自发乳腺癌组织形态、免疫表型与转移情况,比较与人Basal-like乳腺癌的相似程度。电化学法检测TA2自发乳腺癌小鼠（n=10）、妊娠15天小鼠（n=6）与正常小鼠（n=6）血清雌二醇和孕酮水平。电镜观察肿瘤细胞内是否存在MMTV病毒颗粒,使用PCR和Real-time PCR分别检测MMTV LTR在TA2正常小鼠乳腺、妊娠小鼠乳腺和乳腺癌中基因组与mRNA表达变化。结果:TA2自发乳腺癌小鼠平均见瘤年龄（329.81±95.32）天,平均分娩次数（2.70±1.82）次,且肿瘤在妊娠期内迅速增长。肿瘤多发生内脏转移,淋巴结转移未见,80.0%（64/80）发生肺转移。TA2自发乳腺癌形态一致,癌巢由胞浆稀少的小圆细胞构成,周围被发育良好的基质包绕。实性癌巢中央为未分化或分化差的癌细胞,且核分裂像多见,中央可见坏死;癌巢边缘的癌细胞多发生分化,呈腺泡状,腺管状或乳头状;腺泡状癌巢周围有单层或多层肌上皮和致密基质包绕;腺管状分化癌巢中央可见粉色分泌物积聚;实性癌巢中央可见坏死。免疫组化染色显示TA2自发乳腺癌不表达ER、PR和HER2,高表达Cyclin D1、PCNA、p53和CK5/6。电镜观察显示肿瘤细胞内存在MMTV病毒颗粒。TA2自发乳腺癌小鼠血清雌二醇和孕酮浓度及瘤组织内MMTV LTR mRNA表达均升高,其改变与妊娠小鼠相似。结论:TA2小鼠自发乳腺癌形态、免疫表型和生物学特征与人Basal-like乳腺癌极为相似,能够反映Basal-like乳腺癌发生发展的全过程,是研究Basal-like乳腺癌的良好模型。妊娠激素水平升高导致的MMTV激活在Basal-like乳腺癌发生过程中起重要作用。      

胃腺癌组织中基质金属蛋白酶-13和 p73的表达及意义

目的研究 MMP-13、抑癌基因 p73在胃腺癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系,评估其对胃腺癌转移预后的意义。方法应用免疫组织化学 SP 法检测 MMP-13、抑癌基因 p73在143例胃腺癌组织、55例癌旁正常组织中的表达情况,并分析其与临床病理参数的关系。结果胃腺癌组织中 MMP-13的表达显著高于癌旁组织（67．13％∶16．35％）,差异有统计学意义（χ2＝41．10,P ＝0．000）;p73的表达也显著高于癌旁组织（58．74％∶12．73％）,差异有统计学意义（χ2＝33．86,P ＝0．000）。胃腺癌中 MMP-13阳性表达与胃周围淋巴结转移（χ2＝11．835,P ＝0．001）、浸润深度（χ2＝5．177,P ＝0．032）、临床分期（χ2＝11．107,P ＝0．001）有关,而与患者年龄（χ2＝0．113,P ＝0．853）、肿瘤大小（χ2＝0．338,P ＝0．591）、癌细胞分化程度（χ2＝3．628,P ＝0．072）无关。胃腺癌中 p73阳性表达与胃周围淋巴结转移（χ2＝11．440,P ＝0．001）、癌细胞分化程度（χ2＝5．407,P ＝0．025）及临床分期有关（χ2＝9．497,P ＝0．003）,而与患者年龄（χ2＝1．567,P ＝0．222）、肿瘤大小（χ2＝0．841,P ＝0．392）及浸润深度（χ2＝0．554,P ＝0．498）无关,二者在胃腺癌组织中的表达呈正相关（r ＝0．684,P ＝0．000）。结论MMP-13和 p73可能共同参与胃腺癌的发生发展过程,可作为评估胃腺癌浸润和转移的重要生物学指标。     

127例三阴乳腺癌临床特点分析

目的探讨三阴乳腺癌的临床特点,为提高其诊治水平提供依据。方法将920例乳腺癌患者分为三阴乳腺癌127例（三阴组）和非三阴乳腺癌793例（非三阴组）,分析两组临床特点。结果三阴组的主要临床特点为原发肿瘤体积较大,术前化疗较多,易在术后5 a发生转移,患者生存时间短,生活质量差。结论临床医师应掌握三阴乳腺癌的临床特点,以提高诊治水平。     

妊娠及分娩后TA2小鼠T细胞亚群及IL-2水平变化在自发乳腺癌中的作用

目的:观察自发乳腺癌和妊娠及分娩后不同时间,TA2小鼠T细胞亚群及IL-2水平的变化,探讨妊娠及分娩在TA2小鼠自发乳腺癌中可能发挥的作用.方法:将TA2小鼠分为正常未妊娠组、自发瘤组、妊娠5、10、20天组和分娩后1、7、14、21天共9组,采用流式细胞术、ELISA等方法,测定小鼠脾脏CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群,计算CD4/CD8,并测定血清IL-2水平.结果:与正常未妊娠组比较,TA2小鼠妊娠及分娩后不同时间内CD3+T细胞亚群百分比均有下降(P<0.01),在妊娠10天下降至最低(P<0.01),CD4+细胞百分比、CD4+/CD8+在妊娠20天降至最低(P<0.01;P<0.05),而CD8+细胞百分比升至最高(P<0.01).与自发瘤组比较,除妊娠10天CD3+T细胞亚群百分比与荷瘤小鼠无明显差别外,其他各组均高于自发瘤组(P<0.05或P<0.01);妊娠期各组CD4+、CD8+、CD4/CD8均与自发瘤组无差别.IL-2在妊娠期间有所下降,以10天和20天组下降显著(P<0.05),分娩后1天恢复至正常未妊娠时水平,但在分娩后7、14、21天又逐渐下降,在分娩后21天明显低于正常未妊娠组(P<0.01),甚至与自发瘤组接近(P<0.01).结论:妊娠和分娩在一定程度上会影响TA2小鼠T细胞亚群分布和IL-2水平的变化,使其细胞免疫功能受抑制,成为TA2小鼠自发性乳腺癌发生的可能诱因之一.     

趋化因子CXCL12及其受体在人前列腺癌嗜神经过程中的表达及相关机制

目的：阐述CXCL12-CXCR4在前列腺癌嗜神经过程中的作用及相关机制。方法：H＆E染色观察前列腺癌细胞对肿瘤组织及其周围神经的浸润，免疫组织化学方法检测CXCL12和CXCR4、MMP-2、MMP-9在22例人前列腺癌和20例前列腺增生组织中的表达差别，浸润神经的肿瘤细胞CXCR4和CXCL12的表达。结果：在人前列腺癌组织中，存在着较明显的肿瘤细胞侵犯神经现象，人前列腺癌组织中CXCL12、CXCR4、MMP-2和MMP-9表达阳性率均较前列腺增生组织明显升高（P〈0．05），侵犯神经的肿瘤细胞表达CXCR4，神经组织内神经鞘膜细胞表达CXCL12。结论：在前列腺癌组织中存在肿瘤细胞嗜神经现象，肿瘤肿瘤细胞分泌CXCL12，CXCR4与MMP-2、MMP-9促进了癌细胞的嗜神经浸润。     

妊娠对TA2小鼠乳腺癌生长影响的初步研究

目的:通过检测妊娠环境对TA2小鼠乳腺癌生长的影响,初步探讨人妊娠相关乳腺癌发生发展的机制.方法:收集TA2自发乳腺癌小鼠84只,观察其生物学行为、形态及免疫表型特征;建立妊娠TA2小鼠乳腺癌移植瘤模型(n=20),检测妊娠环境下肿瘤生长;电化学法检测小鼠血清雌二醇与孕酮浓度,Real-time PCR检测妊娠组肿瘤和乳腺组织ERα和PR mRNA相对表达,免疫组织化学染色检测ERα、PR、p53、PCNA和CD31在各组瘤组织内的表达.结果:TA2自发乳腺癌均发生于妊娠期或哺乳期,易内脏转移,乳腺癌分化程度低,不表达ER和PR,表达p53.妊娠组肿瘤生长速度显著加快,肿瘤体积和重量均大于对照组(t=4.142,P<0.001),且癌组织PCNA表达水平增高.TA2孕鼠体内血清雌二醇和孕酮水平显著增高(t=-1.568,-8.927,P=0.168,0.001),而ERα和PR mRNA相对表达相对很低(t=12.245,10.933,P<0.001,0.001),肿瘤血管数量增多.结论:TA2自发乳腺癌与人妊娠相关乳腺癌相似,妊娠促进TA2乳腺癌生长,但雌二醇与孕酮对乳腺癌增殖的促进作用可能是间接实现的.     

L-选择素整合素αL及整合素β2 的表达与TA2 小鼠乳腺癌多器官转移的关系研究*

目的:探讨L-选择素、整合素α L 及整合素β 2 的表达与TA2 小鼠乳腺癌多器官转移的关系。方法:收集天津医科大学附属肿瘤医院病理科保存的高转移性（可发生多器官转移,A 组）、低转移性（无远处转移,B 组）TA2 小鼠乳腺癌及A 组肺、肝和脾转移瘤标本,观察肿瘤特征,利用免疫组化方法检测原发瘤及转移瘤组织中整合素α L、整合素β 2、L-选择素的表达情况,并利用Real-time PCR方法检测A 组和B 组原发瘤组织中上述分子mRNA 的相对表达水平。结果:A 组全组原发肿瘤均见明显出血和坏死,均为低分化或未分化癌,可观察到血管生成拟态,均出现了明显的肺、肝和脾转移。A 组和B 组原发肿瘤组织中整合素α L 和L-选择素的平均阳性细胞百分比分别为24.81% vs 10.47% 和39.81% vs 16.75% ,二者在A 组中的表达均显著高于B 组（Z=-2.31,Z=-2.14;P<0.05）,而整合素β2 的表达在A 组与B 组间无显著性差异;A 组原发瘤及其肺、肝和脾转移瘤中L-选择素平均阳性细胞百分比分别为39.81% 、39.07% 、62.09% 和55.51% ,其中肝转移瘤中平均阳性细胞百分比显著高于原发瘤（Z=-2.24,P=0.025）,而整合素α L、β 2 平均阳性细胞百分比在转移瘤与原发瘤间均无显著性差异。整合素α L 和L-选择素mRNA 的相对表达水平在A 组原发瘤显著高于B 组（Z=-3.47,Z=-3.32;P<0.01）。 结论:TA2 小鼠乳腺癌细胞可表达L-选择素、整合素α L 和β 2,其中L-选择素的表达可能与其肝转移有关。      

17-DMAG抑制津白Ⅱ小鼠乳腺癌肝脾转移的实验研究及其相关机制

目的:动态观察HSPgO抑制剂17-dimethylaminoethylamino-17-demethoxygeldanamycin hydrochloride对津白Ⅱ小鼠高转移性乳腺癌生长及肝脾转移的抑制作用,并初步探讨其相关机制.方法:TA2小鼠40只,随机分为实验组和对照组,20只/组,自小鼠鼠鼷部接种TA2小鼠高转移性乳腺癌细胞,1x105/只.接种肿瘤后第4天于小鼠腹腔给予17-DMAG,1mg/(只·次),2次/周,于接种后17天和24天实验组和对照组各处死10只小鼠,收集小鼠移植瘤、肝和脾组织,留取部分新鲜组织进行Real-timePCR,检测实验组和对照组肿瘤组织中MMP-7、MMP-9mRNA的表达差别.剩余组织10%福尔马林固定后HE染色及基质金属蛋白酶-7的免疫组织化学染色.结果:接种肿瘤后第17天实验组的肿瘤体积明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);实验组16只小鼠中肝转移5例,脾脏转移13例.对照组13只小鼠中肝转移13例,脾脏转移12例;实验组小鼠肝转移例数较对照组明显下降(P0.05).HE染色下观察实验组肿瘤出现明显的坏死.实验组中MMP-7蛋白和MMP-9 mRNA的表达较对照组明显减弱(分别为3.049±2.726和21.933±14.304;1.034±0.784和2.318±1.294),差异均具有统计学意义(P<0.05).结论:17-DMAC可明显抑制TA2小鼠乳腺癌的生长,尤其是在肿瘤生长的早期,并可能通过降低MMP-7、MMP-9的表达来抑制TA2小鼠乳腺癌肝脾的转移.     

趋化因子CXCL12及其受体在人前列腺癌嗜神经过程中表达及相关机制

目的:阐述CXCL12-CXCR4在前列腺癌嗜神经过程中的作用及相关机制.方法:H＆E染色观察前列腺癌细胞对肿瘤组织及其周围神经的浸润.免疫组织化学方法检测CXCL12和CXCR4、MMP-2、MMP-9在22例人前列腺癌和20例前列腺增生组织中的表达差别,浸润神经的肿瘤细胞CXCR4和CXCL12的表达.结果:在人前列腺癌组织中,存在着较明显的肿瘤细胞侵犯神经现象,人前列腺癌组织中CXCL12、CXCR4、MMP-2和MMP-9表达阳性率均较前列腺增生组织明显升高(P<0.05),侵犯神经的肿瘤细胞表达CXCR4,神经组织内神经鞘膜细胞表达CXCL12.结论:在前列腺癌组织中存在肿瘤细胞嗜神经现象,肿瘤肿瘤细胞分泌CXCL12,CXCR4与MMP-2、MMP-9促进了癌细胞的嗜神经浸润.     

线粒体凋亡途径在TA2小鼠自发性乳腺癌中的作用

比较TA2小鼠正常乳腺、乳腺癌前病变和乳腺癌组织中细胞增殖和凋亡的情况,通过检测线粒体凋亡途径中Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9在乳腺组织中的表达,初步确定线粒体凋亡途径在TA2小鼠自发乳腺癌中可能发挥的作用。方法:收集正常TA2成年雌鼠的乳腺组织（NC组）和TA2自发性乳腺癌癌前病变组织（SBC-b组）和乳腺癌组织（SBC-t组）,采用免疫组化方法检测各组乳腺上皮细胞中PCNA、Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达并计算增殖指数（PI）;采用TUNEL方法检测细胞凋亡并计算凋亡指数（AI）;采用Real-time PCR和Western blot方法检测组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达及mRNA相对表达水平。结果:免疫组化染色,Real-time PCR以及Western blot结果一致显示,SBC-b组Bcl-2,Bax,Caspase-3和Caspase-9表达均明显高于NC（P<0.01或P<0.05）;SBC-t组中除Bcl-2高于NC外,其余蛋白表达均明显低于NC（P<0.01）,但bcl-2,bax和Caspase-3 mRNA表达均显著高于NC（P<0.01）,Caspase-9 mRNA略高于NC,但无统计学意义（P>0.05）。结论:线粒体途径可能参与了TA2鼠自发性乳腺癌的发生,其通过刺激部分乳腺上皮细胞凋亡,破坏了TA2小鼠乳腺上皮细胞增殖和凋亡的平衡,以致乳腺癌发生。