临床分离产IMP-1型金属酶非发酵菌的耐药机制研究

从临床收集耐亚胺培南的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌共50株,进行头孢他啶和2-巯基乙醇的表型协同试验(CAZ ME),然后进行金属酶IMP-1基因的PCR检测。选取IMP-1阳性株测序,用PCR方法检测有无一类整合子基因(IntI1)。表型的检测发现有28株为协同阳性,其中铜绿假单胞菌27株,鲍曼不动杆菌1株。PCR和测序检测出其中一株铜绿假单胞菌含有IMP-1基因,同时也含有IntI1基因。首次在中国西部地区发现产IMP-1型金属酶、同时也含有一类整合子的铜绿假单胞菌,对于临床上研究细菌的耐药性传播具有重要意义。     

铜绿假单胞菌Quorum-Sensing系统中rhlR基因的克隆表达及其免疫保护性研究

目的研究铜绿假单胞菌rhlR表达产物的分子生物学特性,以及对小鼠的免疫保护作用。方法以铜绿假单胞菌标准株PAO1的基因组DNA为模板,PCR方法扩增rhlR基因。利用pGEX4T-1载体构建rhlR-pGEX4T-1重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用免疫印迹验证。同时用纯化的重组蛋白免疫小鼠,菌落计数法检测免疫组和对照组鼠肺对铜绿假单胞菌的清除率。结果rhlR的全基因序列为726bp,经序列分析和同源性比较,与GenBank中的rhlR基因(登录号:AE004768)完全一致。大肠杆菌BL21(DE3)转化重组质粒rhlR-pGEX4T-1后,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,表达的融合蛋白质相对分子质量为54×103,其中RhlR蛋白为27×103。体内实验中,免疫小鼠肺部对铜绿假单胞菌的清除率与未经免疫的正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建的rhlR-pGEX4T-1重组质粒能够在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达出具有生物学活性的RhlR蛋白。重组蛋白对小鼠表现出一定的保护作用。     

动态库仑法测定药物中抗坏血酸含量

目的：建立动态库仑法测定药物中抗坏血酸含量的新方法，用于维生素C的质量控制。方法：通过在0．05％KI-0．04％HAc电解液中，动态电流电解I3^-氧化滴定抗坏血酸，由电解I3^-所消耗的电量计算维生素C含量。结果：该法测量范围0．02～3．0mg&#183;L^-1，检出限可达0．01mg&#183;L^-1，与2，6-二氯靛酚法对照用于对片剂、针剂中维生素C测定，二者结果吻合，相对误差小于2％。结论：该法制样简单、试样用量少，操作简便、快速，灵敏度高、重现性好，不受试样颜色和浊度的影响，可用于临床向液和尿液中维牛素C的微量分析。     

西藏拉萨2009年度住院患者抗菌药物使用情况调查

目的:了解西藏拉萨住院患者抗菌药物使用情况,为临床合理使用抗菌药提供参考。方法:随机抽取拉萨某医院2009年度住院患者病历300份,对其抗菌药物的使用频率、使用疗程、种类、剂量、适应证以及抗菌药物使用科室分布等指标进行统计分析。结果:该院抗菌药物的总使用率为96%,抗菌药物涉及7类38种,其中使用率最高的为青霉素类。临床各科室抗菌药物使用率均超过85%,其中外科和儿科高达100%,干部病房使用率最低为86%;静脉给药达92.4%,口服给药仅为0.7%。结论:拉萨住院患者抗菌药物使用总体上合理,但仍存在一些不合理使用抗菌药物的现象,与《抗菌药物临床应用指导原则》中的要求还有一定的差距,需进一步加强管理以促进抗菌药物的合理使用。     

基于BrO-3-Ce4+-H+-丙二酸/酒石酸振荡体系的中药电化学指纹图谱研究

该文提出了BrO-3-Ce(SO4)2-H2SO4-丙二酸/酒石酸复合有机振荡反应体系,在考察各组分浓度对空白体系稳定性和特征参数影响的基础上,获得了30种中药的电化学指纹图谱。结果表明,电化学指纹图谱可用于中药的识别、不同部位区分及道地性鉴定,快速、灵敏、准确。同时,探讨并验证了振荡机制及中药指纹图谱的形成机制。     

结核分枝杆菌复合体VNTR位点多态性与菌株MALDI-TOF MS蛋白谱差异的关系

  目的  研究结核分枝杆菌复合体(Mycobacterium tuberculosis complex, MTBC)数目可变串联重复序列(variable number tandem repeat, VNTR)重复单位拷贝数与菌株蛋白质谱差异的关系。  方法  采用多位点数目可变串联重复序列分析(multiple locus variable number tandem repeat analysis, MLVA)对MTBC进行基因分型。同时,利用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser-desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)对菌株的蛋白质谱进行主成分分析(principal components analysis,PCA),分析VNTR位点重复单位拷贝数差异(多态性)与菌株PCA聚类的关系。  结果  共收集157株MTBC菌株。146株MTBC(质谱鉴定得分≥1.700)生成的PCA树状图分为3个群,分别为Ⅰ群(61株)、Ⅱ群(26株)和Ⅲ群(59株)。24个VNTR位点多态性存在差异,其中7个高、7个中等和10个低多态性。MTBC菌株的Mtub39、QUB26、QUB4156位点多态性与菌株MALDI-TOF MS聚类有关(P=0.000,P=0.035,P=0.017)。  结论  MTBC菌株的Mtub39、QUB26、QUB4156位点多态性与菌株蛋白质谱的差异有关,3个位点可能具有调控菌株蛋白质谱构成的作用。     

藏药多刺绿绒蒿提取物体外抗流感病毒作用的初步研究

目的:研究藏药多刺绿绒蒿提取物体外抗流感病毒的作用;方法:制备了全草醇提取物;采用常规试管凝集实验方法,测试该提取物体外抗流感病毒活性;结果:发现该药液在1:4稀释度时(12.5mg/ml,按生药量计算),对体外甲型流感病毒有抑制作用。结论:多刺绿绒蒿提取液对流感病毒有一定的抗病毒活性,值得继续追踪研究。     

西藏地区水痘-带状疱疹病毒临床分离株基因型研究

目的 研究西藏地区水痘-带状疱疹病毒临床分离株基因型.方法 将临床采集的水痘或带状疱疹患者皮肤水疱液接种至人胚胎成纤维细胞进行病毒分离;对分离得到的病毒运用间接免疫荧光法鉴定,鉴定结果为阳性的病毒继续体外培养以提取其基因组DNA.PCR法扩增并测序水痘-带状疱疹病毒基因组中开放读码框1、21、50、54的部分片段.测序结果与GenBank中水痘-带状疱疹病毒参考株Dumas进行序列比对分析其中单核苷酸多态性,并利用Primer 5.0软件进行酶切位点分析,从而确定基因型.结果 从临床采集的16份标本中经分离鉴定后得到10株水痘-带状疱疹病毒临床分离株,病毒分离阳性率为62.5％.基因分析结果显示西藏地区10株水痘-带状疱疹病毒临床分离株中基因型A1有3株,基因型A2有4株,基因型J1有3株.结论 西藏地区水痘-带状疱疹病毒基因型分布与西藏地区地理位置密切相关.     

溶原性噬菌体对铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响

目的研究铜绿假单胞菌（PA3094）溶原性噬菌体Ppa3094对该菌生物被膜形成的影响。方法采用平板培养法建立PA3094及PA3094-L（带前噬菌体Ppa3094的溶原性菌株）两株菌的体外生物被膜模型;MTT法测定生物被膜形成过程中两株菌的生物被膜活菌量;实时荧光定量PCR测定两株菌在培养不同时间点藻酸盐合成基因MgC、algD的表达量。结果两株菌均在培养5～7d时形成成熟的生物被膜,呈薄膜状。在生物被膜形成过程中,两株菌的生物被膜菌量存在明显差异,在整个生物被膜形成过程中,PA3094生物被膜菌量均比PA3094-L高;PA3094-L在培养第5d时生物被膜菌量达最高,第7d有所下降。随着培养时间的延长,藻酸盐合成基因algD、algC表达量均上调,但PA3094-L表达量均比PA3094低,且algC表达量差异更大。结论铜绿假单胞菌溶原性噬菌体Ppa3094可降低藻酸盐合成基因algD、algC的表达,从而影响生物被膜的形成。     

基于BrO~-_3-Ce~(4+)-H_2SO_4-柠檬酸体系的中药电化学指纹图谱的应用研究

目的:基于化学振荡理论建立KBrO_3-Ce(SO_4)_2-H_2SO_4-柠檬酸振荡体系,用于中药的定性定量分析。方法:在考察各组分浓度对空白体系稳定性、重现性和特征参数影响的基础上,确定了最佳测试条件。结果:获得陈皮、黄芪、白芍等27味中药的电化学指纹图谱,并对黄芪等的道地性和质量进行了评价,同时探讨了中药振荡行为的原因及其机理。结论:表明电化学指纹图谱是一种经济、简便、快速、有效的鉴别中药和质量评价的方法。